两种柑橘新病毒双重RT-PCR检测体系的建立及应用

正柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)和柑橘褪绿矮化病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是2种最近在我国发生的柑橘病毒(Chen et al.,2014;Guo et al.,2015),主要通过带病苗木和昆虫传播(陈洪明等,2015),对我国柑橘产业造成了严重损失。目前尚无防治CYVCV和CCDaV的药剂,种植无病毒苗木和加强病害检测是重要的防治途径。当前虽已建立了CYVCV和CCDaV的RT-PCR检测方法(Loconsole et al.,2012;陈洪明等,2015),但鉴于田间可能存在     

云南柑橘黄化脉明病毒的田间样品检测

柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的黄脉病是威胁我国柑橘产业发展的一种重要病毒性病害.云南是我国的柑橘产区之一,为明确CYVCV在云南田间的感染情况,本研究于云南省瑞丽市、怒江州、凤仪镇和丽江市4地共采集33份疑似柑橘黄脉病样品,对其进行了PCR检测.结果显示,在33份田间疑似病样中有10份样品检测到CYVCV,总检出率为30.3%.统计表明,在不同寄主样品中CYVCV的检出率差异较大;柠檬样品CYVCV检出率最高,为50%;而香橼样品和香橙上检出率为0.各地区样品中CYVCV的检出率有一定差异性;其中瑞丽样品检出率最高,达43.5%;而怒江、凤仪及丽江样品中均未检测出CYVCV.     

柑橘黄化脉明病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

为探索柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘新病害—柑橘黄脉病的早期快速检测技术,针对CYVCV核酸结合蛋白基因的保守序列设计2对特异性引物,通过优化退火温度,建立了CYVCV巢式RT-PCR检测方法,并对采自不同柑橘品种的54个CYVCV疑似样品进行了检测。结果表明,CYVCV巢式RT-PCR检测中,以55℃和60℃分别作为第1轮和第2轮扩增的退火温度时检测效果最佳;该方法检测样品中病毒总核酸的最低浓度为2.40μg/L,灵敏度较RT-PCR提高100倍。在CYVCV疑似样品检测中,巢式RT-PCR和RT-PCR的阳性检出率分别为59.26%和57.41%,前者更适用于检测不同来源的CYVCV。当尤力克柠檬、锦橙北碚-447、天草和台湾椪柑嫁接接种CYVCV后,巢式RT-PCR比RT-PCR提前10~30 d检测出病毒。表明所建立的CYVCV巢式RT-PCR检测方法适用于田间病树的早期诊断。     

广西柑橘衰退病和黄脉病调查及其病原病毒的遗传多样性分析

为明确柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)和柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)在广西柑橘上的发生?分布及其遗传变异情况, 于2020年至2021年对百色?北海?崇左?贵港?桂林?河池?贺州?来宾?柳州?南宁?梧州和玉林等12个柑橘产区进行了病毒病调查?采用RT-PCR对采集样品进行了病毒检测, 并基于病毒分离物外壳蛋白(coat protein, CP)基因的核苷酸序列进行比对分析, 构建系统发育树?结果表明:采集的737份柑橘样品中, CTV的检出率为20.62%, CYVCV检出率为18.32%, CTV的检出率略高于CYVCV?病毒复合侵染的现象在采集的柑橘样品中普遍存在, CTV和CYVCV复合侵染率高达34.50%?对RT-PCR产物测序共获得12个CTV分离物和6个CYVCV分离物的CP基因序列?遗传多样性分析发现, CTV和CYVCV的CP基因序列都较保守, CTV分离物的遗传进化与地理来源?寄主来源均没有明显相关性, 但CYVCV分离物的遗传进化与地理位置具有相关性, 而与寄主来源无明显相关性?上述研究结果可为深入了解CTV和CYVCV在广西的流行情况以及柑橘病毒病的检疫和防控提供参考?     

山药潜隐病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

<正>0引言山药(Dioscorea oppositifolia L．)是薯蓣科薯蓣属植物,可作为药用或食用材料^[1],广泛分布于全球热带及亚热带地区,在我国河南、山东、江苏、广西和江西等省份都有种植。山药生产中以块茎无性繁殖方式为主,导致病毒病发生严重^[2]。侵染山药的病毒主要包括马铃薯Y病毒属(Potyvirus)^[3]、杆状DNA病毒属(Badnavirus)^[4]、香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)^[5]以及蚕豆病毒属(Fabavirus)^[6]的一些病毒。     

西瓜和甜瓜上西瓜银斑驳病毒的鉴定及广西分离物S RNA序列分析

<正>0引言西瓜银斑驳病毒(watermelon silver mottle virus,WSMoV)是番茄斑萎病毒科(Tospoviridae)正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒，主要通过蓟马以持久增殖型方式传播^[1-2]。WSMoV病毒粒子球状，外具包膜，基因组为三分体负单链RNA，分别为L RNA、M RNA和S RNA^[1,3]。1982年IWAKI等最先在日本冲绳县发现WSMoV为害西瓜，在叶片上产生银色斑驳症状，遂命名为西瓜银斑驳病毒^[4]；随后，中国台湾、泰国、印度等地陆续报道该病毒^[1,5-6]。     

利用小RNA深度测序技术鉴定上海地区‘红美人’柑橘病毒种类

为明确上海地区‘红美人’柑橘的病毒种类, 2020年4月在崇明、金山、奉贤、嘉定、闵行和浦东采集疑似病毒感染的叶片样品11份, 采用小RNA深度测序技术结合RT-PCR对不同来源的混合样品进行病毒种类鉴定。结果表明, 样品中含有柑橘衰退病毒Citrus tristeza virus (CTV)、柑橘黄化脉明病毒Citrus yellow vein clearing virus(CYVCV)、柑橘树皮裂纹类病毒Citrus bark cracking viroid(CBCVd)和柑橘类病毒Ⅴ Citrus viroid V(CVd-Ⅴ)。同时发现, 上海地区‘红美人’柑橘病毒复合侵染现象普遍。基于CTV和CYVCV的CP全长基因及CBCVd和CVd-Ⅴ全基因组序列系统进化分析结果表明:除了CYVCV的分离物与地理来源具有明显的相关性外, 其余病毒及类病毒均没有严格的地域相关性。研究结果为开展‘红美人’柑橘种苗病毒检测及病毒病的防治奠定基础。     

柑橘黄化脉明病毒一步法RT-qPCR检测体系的建立及应用

正柑橘黄脉病是由柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)引起的一种新发病害,对柑橘产业尤其是柠檬产业危害较重。我国于2009年首次在云南省瑞丽市发现该病,四川、重庆、江西等省市也陆续发现并呈快速传播趋势。CYVCV检测方法包括指示植物鉴定、酶联免疫吸附法、直接组织点免疫法(宾羽等,2015)、RT-PCR(陈洪明等,2015)、逆转录环介导等温核酸扩增法(刘     

三明地区柑橘黄化脉明病毒检测及分析

为查明三明地区柑橘黄化脉明病毒病发病情况,对主产区疑似感染柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)的柑橘新梢叶片样本进行实时荧光定量RT-qPCR检测及分析.结果表明,217份样品中检出CYVCV阳性样本123份,阳性检出率为57％.确定三明地区柑橘树叶脉透明(...     

凤仙花花叶病的病原鉴定

<正>0引言凤仙花(Impatiens balsamina)为凤仙花科(Balsaminaceae)凤仙花属(Impatiens)一年生草本植物,在我国大部分地区均有分布。栽培过程中凤仙花真菌病害主要有白粉病、褐斑病、炭疽病和立枯病等^[1-2]。有关凤仙花病毒病的报道,如番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)^[3]、凤仙花坏死斑点病毒(impatiens necrotic spot virus,INSV)^[4]、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)^[5-6]、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)^[7]、番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)^[8]、长叶车前花叶病毒(ribgrass mosaic virus,RMV)^[9]等均可侵染凤仙花。     

福建三明地区柑橘病毒类病原种类的鉴定及检测

为了明确福建省三明地区柑橘病毒类病原(病毒和类病毒)种类,利用RT-PCR技术对其进行了鉴定和检测,并对其检出率进行了分析。结果表明,从207份柑橘叶片样品中检出柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus, CTV)、柑橘黄化脉明病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)、柑橘叶斑驳病毒(citrus leaf blotch virus, CLBV)和蚜虫致死麻痹病毒(aphid lethal paralysis virus, ALPV)等4种病毒以及柑橘曲叶类病毒(citrus bent leaf viroid, CBLVd)、啤酒花矮化类病毒(hop stunt viroid, HSVd)、柑橘矮化类病毒(citrus dwarfing viroid, CDVd)、柑橘类病毒Ⅴ(citrus viroidⅤ, CVdⅤ)和柑橘类病毒Ⅵ(citrus viroidⅥ, CVdⅥ)等5种类病毒。其中,CTV、CYVCV、CLBV和ALPV的检出率分别是71.01%、66.67%、0.97%和6.28%,CBLVd、HSVd、C...     

玉米黄花叶病毒在河南省小麦玉米上的分布及其CP序列分析

<正>0 引言河南省是我国玉米小麦的种植大省,玉米和小麦的种植面积常年保持在3 800千公顷和5 670千公顷以上。玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus, MaYMV)是2016年在我国云南省玉米上首次发现的一种新病毒^[1],属于马铃薯卷叶病毒属(polerovirus),能够引起玉米植株叶片黄化、花叶、红叶等症状^[6],之后该病毒在亚洲^[1-2]、非洲^[3-4]、南美洲^[5]等地区禾本科作物上均有发现,     

河南丹参棒孢霉叶斑病病原菌的鉴定

<正>丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.),又叫活血根，为唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia Linn)多年生草本药用植物，干燥根入药，主要用于治疗心脑血管等疾病^[1]。近年来，随着丹参种植规模的扩大，丹参根腐病^[2-3]、枯萎病^[4]和茎基腐^[5]等病害的大规模发生，限制了丹参种植产业的发展。2019—2021年在河南省禹州、     

高通量测序鉴定柑橘黄化脉明病毒诱导柠檬差异表达microRNA

 柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是我国新发生的危害柠檬的重要病毒。本研究对接种和未接种CYVCV的柠檬叶片样品进行了高通量小RNA测序,以甜橙基因组作为参考,采用生物信息学软件进行miRNA鉴定和靶基因预测。结果显示CYVCV侵染对13个保守miRNA和12个新鉴定的非保守miRNA的表达具有调控作用,对这些差异表达miRNA的靶基因进行预测和功能分析的结果显示,保守miRNA的靶基因功能在植物逆境反应及光合作用和能量代谢相关通路中具有明显的富集现象,推测与CYVCV侵染柠檬植株及诱导病害症状表现有关,而多数新鉴定的非保守miRNA的靶基因功能未能注释到KEGG通路。采用实时荧光定量PCR对部分miRNA的表达水平进行了分析,结果表明miRNA的表达水平在接种CYVCV后30~90 d呈时间动态变化。研究结果为进一步揭示CYVCV与柠檬互作机制提供了重要信息。     

海南海芋叶斑病病原鉴定

<正>海芋(Alocasia odora)又名滴水观音，为天南星科海芋属多年生大型常绿观叶草本植物，主要分布于我国海南、福建、广西等热带和亚热带地区^[1-2],广泛用于城市园林造景工程，也可作为室内观赏植物^[3-4]。海芋常见的病害有叶斑病、枯萎病、基腐病等^[5], 其病原菌分别为海芋链格孢(Alternaria alocasiae)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)^[6-7]。     

广西崇左油梨叶部炭疽病病原菌分离与鉴定

<正>油梨(Persea americana Mill.)又名鳄梨、酪梨，原产于墨西哥与中美洲高原，其营养丰富，含有多种维生素、脂肪酸、蛋白质、维生素等^[1]。随着油梨的规模化种植，病虫害问题也随之发生，炭疽病是油梨叶部常见病害之一。国外有学者报道油梨果实炭疽病病原菌有Colletotrichum gloeosporioides^[2]、C. acutatum^[3]等。近日，我国学者报道来自海南儋州的油梨炭疽菌病原菌为C. siamense^[4]，还有学者分析了购自广州一水果商铺油梨果(进口自秘鲁)上的炭疽病病原菌种类为果生刺盘孢(C. fructicola)^[5]。     

引起花生果腐病的新孢镰刀菌及其生物学特性

<正>0引言花生果腐病(俗称花生烂果病)是一种世界性土传病害,主要导致花生荚果腐烂。近年来花生果腐病在我国山东、河南、河北等花生主产区日趋严重,造成15%以上的减产甚至绝收^[1]。国内外已报道的花生果腐病病原菌有Sclerotium minor^[2]、Neocosmospora vasinfecta^[3,4]、N. striata^[5]、Fusarium sp.^[6]、Pythium myriotylum^[7]和Rhizoctonia solani^[8]。其中,我国不同地域的花生果腐病病原菌有N. vasinfecta^[3,4]、N. striata^[5]、Fusarium sp.^[6]、P. myriotylum^[7]和R. solani^[8]。     

山东省大蒜病毒病害的病原种类鉴定

<正>大蒜(Allium sativum L.)是百合科葱属植物，有较高的经济和药用价值^[1]。大蒜病毒病造成病毒在鳞茎中积累，营养繁殖的栽培方式加速了病害爆发，严重影响了大蒜的产量和品质。已报道的我国大蒜病毒病主要包括洋葱黄矮病毒(onion yellow dwarf virus, OYDV)、韭葱黄条病毒(leek yellow stripe virus, LYSV)、     

椰枣叶斑病的病原鉴定

<正>椰枣树(Phoenix dactylifera L.)属多年生棕榈科热带植物，是阿拉伯国家重要的经济和粮食作物，果实被称为“沙漠面包”,具有较高的营养价值^[1-2]。 目前我国对椰枣的研究主要集中于椰枣化学成分分析^[3]、基因表达^[4]、植物组织培养^[5]、逆境胁迫^[6]等领域，对椰枣病害发生及病原菌种类鲜有报道。2020年11月—2021年6月，对海南省椰枣病害发生情况进行调查，     

3种黄矮病毒多重RT-PCR检测方法的建立及应用

<正>0 引言小麦黄矮病是我国小麦生产上重要的病毒病,受害小麦感病后植物矮化叶片黄化,一般减产10%～20%左右,严重的可达到50%以上,个别地块甚至可造成绝产。目前国际上已报道的作物黄矮病毒有十多种^[1],我国引起小麦黄矮病的主要病原是大麦黄矮病毒(barley yellow dwarf virus, BYDV)PAV和GAV株系^[2],其在全国小麦种植区广泛分布。