白术、酸枣仁提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果研究

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明：0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD₂₆₀、OD₂₈₀数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。     

山苍子精油与丁香精油对金黄色葡萄球菌的协同抑菌作用

试验旨在研究山苍子精油与丁香精油对金黄色葡萄球菌的协同抑菌作用。通过测定最小抑菌浓度(MIC)、分级抑菌指数(FICI)、ATP含量、ATP酶活性、活性氧(ROS)以及丙二醛(MDA)含量,探究山苍子精油和丁香精油复配后对金黄色葡萄球菌的体外抑菌作用。结果显示：山苍子精油对金黄色葡萄球菌的MIC为0.78～1.56 g/L,丁香精油对金黄色葡萄球菌的MIC为1.56～3.13 g/L,联用FICI为0.250～0.375。复配精油可破坏金黄色葡萄球菌的细胞完整性,使菌液OD_{260 nm}、OD_{280 nm}值显著升高(P<0.05)。复配精油处理后,金黄色葡萄球菌的胞内ATP含量以及ATP酶活性显著降低(P<0.05),ROS、MDA含量均显著升高(P<0.05)。研究表明,山苍子精油和丁香精油主要通过破坏金黄色葡萄球菌的结构完整、干扰能量代谢、氧化损伤,从而对金黄色葡萄球菌具有协同抑菌作用,山苍子精油和丁香精油复配可用于防控畜禽病原菌。     

17味中药及其复方对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验研究

[目的]探索17味中药及其复方对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的体外抑菌效果。[方法]本试验以山东省某奶牛场患乳房炎奶牛乳样中分离和保存的金黄色葡萄球菌作为研究对象,采用药敏试验和试管二倍稀释法,分别确定金黄葡萄球菌对17味中药的药物敏感性,测定最低抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）,以此选取对金黄色葡萄球菌高度敏感的中药两两组合制成双联中药复方,并采用微量肉汤稀释棋盘法测定双联中药复方对金黄色葡萄球菌的MIC,计算双联中药复方的分级抑菌浓度（FIC）。[结果]黄芩、连翘和五倍子3味中药对金黄色葡萄球菌的抑菌表现为高度敏感;黄芩对金黄色葡萄球菌MIC和MBC的检测结果分别为7.813 mg/mL和15.625 mg/mL;连翘和五倍子2味中药对金黄色葡萄球菌MIC和MBC的检测结果分别为15.625 mg/mL和31.25 mg/mL;黄芩+连翘、黄芩+五倍子、连翘+五倍子3种双联中药复方对金黄色葡萄球菌MIC的检测结果均为15.625 mg/mL,且双联中药间均表现无关作用。[结论]对奶牛乳房炎金黄色葡萄球抑菌效果较好的单味中药组成复方后,其抑菌效果未必增强。     

石榴皮水提物与几种抗菌药物体外联合抗菌作用观察

为评价石榴皮水提物与抗菌药物体外联合抗菌作用的效果,试验采用双层打孔法检测石榴皮水提物的抑菌能力,采用微量二倍稀释法测定石榴皮水提物的最小抑菌浓度(MIC),使用棋盘法测定石榴皮提取物与庆大霉素、阿米卡星、链霉素、多西环素和恩诺沙星联用对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的作用效果。结果表明：制备的石榴皮水提物具有抑菌效果;对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC分别为1.25 mg/mL和5 mg/mL;石榴皮水提物联合阿米卡星对大肠杆菌表现为相加作用,联合链霉素对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均表现为相加作用,联合庆大霉素对大肠杆菌表现为颉颃作用。说明石榴皮水提物可以与阿米卡星和链霉素联用,均表现为相加作用。     

1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD₅₀),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD₆₀₀值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD₂₈₀值和OD₂₆₀值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD₀和LD₁₀₀,并计算LD₅₀,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后,>2～10 h为对数期;菌液OD₆₀₀值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R²=0.990,P<0.05;菌液OD₆₀₀     

酿酒酵母表达基因工程抗菌肽Pa-AMP05的抗菌活性研究

本实验采用琼脂扩散和稀释法,对发酵得到的基因工程抗菌肽Pa-AMP05的抗菌活性进行研究,结果表明,抗菌肽Pa-AMP05具有较强的抑制大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的活性,对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为15.625μg/mL,对大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)为31.25μg/mL;且其浓度与抗菌活性呈线性正相关。     

桃金娘提取物体外抑菌试验

检测桃金娘不同部位水提物及醇提物对大肠杆菌、沙门菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用。采用琼脂扩散药敏法测定抑菌圈直径,微量倍比稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)。结果显示,桃金娘叶、果的醇提液和水提液对金黄色葡萄球菌和沙门菌均有一定的抑菌效果,并且醇提液效果优于水提液,其中桃金娘叶醇提液的抑菌效果最好,对金黄色葡萄球菌和沙门菌的MIC分别为0.125 g/mL、0.25 g/mL。桃金娘叶、果的醇提液和水提液对大肠杆菌均无抑菌效果。     

胰岛素联合利奈唑胺抑制糖尿病细菌性肺炎的机制研究

试验旨在研究胰岛素联合利奈唑胺是否同时具有降糖、抗菌以及抑制α-溶血素活性，从而抑制糖尿病细菌性肺炎。本研究通过体外试验探讨了联合用药对高糖和金黄色葡萄球菌α-溶血素共同诱导的巨噬细胞炎症反应的作用，并探讨其机制。通过药物敏感试验测定最小抑菌浓度（MIC）；通过检测D_{600 nm}值绘制生长曲线来考察胰岛素、利奈唑胺单独或联合胰岛素的抗菌活性；通过溶血试验考察药物组合对α-溶血素活性的抑制效果；通过细胞毒性试验判定药物组合的体外安全性；借助Western blotting药物组合对炎症通路蛋白的作用。药物敏感性试验结果显示，胰岛素组未检测到金黄色葡萄球菌8325-4株和DU1090株的MIC值，利奈唑胺和胰岛素+利奈唑胺药物组合对这两种金黄色葡萄球菌的MIC均为0.5 μg/mL；由生长曲线结果可知，胰岛素不抑制正常组和高糖组金黄色葡萄球菌的生长，但是在利奈唑胺组和胰岛素+利奈唑胺药物组合组，0.25~4 μg/mL利奈唑胺可抑制金黄色葡萄球菌的生长；溶血试验结果显示，正常组和高糖组胰岛素均不抑制α-溶血素活性，0.25~4 μg/mL利奈唑胺均可抑制α-溶血素活性；细胞毒性试验显示，正常组和高糖组，细胞存活率均大于88.038%，50 nmol/L胰岛素、0.25 μg/mL利奈唑胺、50 nmol/L胰岛素+0.25 μg/mL利奈唑胺药物组合可提高高糖诱导的MH-S细胞存活率；Western blotting结果显示，50 nmol/L胰岛素单独使用对高糖和α-溶血素共同诱导小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S细胞）中TLR2、MAPKs及NLRP3蛋白的表达水平没有抑制作用，而50 nmol/L胰岛素联合0.25 μg/mL利奈唑胺可降低高糖和α-溶血素共同诱导MH-S细胞中上述蛋白的表达水平，其抑制作用比单独使用利奈唑胺时显著。综上所述，胰岛素联合利奈唑胺可通过降糖、抗菌和抑制α-溶血素活性的方式抑制小鼠肺泡巨噬细胞炎症反应。     

基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及对小鼠感染的治疗

成功构建了能够高效表达鲎素TPⅠ基因的组成型毕赤酵母表达菌株,发酵培养后上清对分属于13个属的61株菌抑菌活性良好.应用肉汤微量稀释法测定发酵上清对金黄色葡萄球菌的抗菌活性,用扫描电镜观察其对金黄色葡萄球菌的抑制作用,并探讨发酵上清对小鼠皮肤感染模型的治疗作用.结果显示,基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)为(3.46±0.76) mg/L,亚抑菌浓度为(0.865±0.22) mg/L.基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌小鼠感染模型的治疗效果与抗生素差异不显著(P＞0.05),且具有刺激小鼠血管内皮生长因子表达水平增加,加速血管生成和血管发生,促进皮肤创伤愈合的功能；表明基因工程鲎素对金黄色葡萄球菌感染小鼠具有良好的治疗效果.     

蜂源抗菌肽Melittin与饲料酸化剂协同抑菌效应评价

试验旨在探究蜂源抗菌肽Melittin与饲料酸化剂乙酸和柠檬酸的体外协同抑菌效应。试验采用微量肉汤稀释法测定大肠杆菌、肠炎沙门氏菌及金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);采用琼脂平板菌落计数法测定最小杀菌浓度(MBC);采用棋盘试验稀释蜂源抗菌肽Melittin与饲料酸化剂测定分级抑菌浓度(FIC)。结果显示:蜂源抗菌肽Melittin、乙酸、柠檬酸分别单独使用对3种常见病原菌均具有抑菌作用,将蜂源抗菌肽Melittin分别与乙酸和柠檬酸联合使用时效果显示为协同效应(FIC index<0.5)和相加作用(0.5≤FIC index≤1)。其中,蜂源抗菌肽Melittin与柠檬酸联合使用对大肠杆菌、肠炎沙门氏菌协同抑菌效应最佳,FIC index为0.187 5。蜂源抗菌肽Melittin与乙酸联合使用对大肠杆菌与金黄色葡萄球菌协同效应为相加作用,FIC index为0.5。研究表明,蜂源抗菌肽Melittin与乙酸、柠檬酸联合使用会降低单独使用时对动物病原菌的MIC值,作为饲料添加剂联合应用对抗生素替代具有指导作用。     

头孢喹诺对临床分离菌株抗菌活性研究

本研究旨在评价头孢喹诺对上海市养殖场临床分离菌株的体外抗菌作用,为头孢喹诺的临床使用提供参考依据。从上海市养殖场分离并鉴定大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和链球菌各若干株,采用微量肉汤稀释法测定头孢喹诺对各菌株的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）,推算MIC₅₀和MIC₉₀,并绘制头孢喹诺对这4种细菌的杀菌动力学曲线。头孢喹诺对金黄色葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌和大肠杆菌的MIC₅₀分别为0.063、0.063、0.032、0.125 μg/mL,MIC₉₀分别为0.125、0.125、0.125、0.25 μg/mL;在很小的浓度变化范围内头孢喹诺能够快速抑菌,在抑菌浓度为1倍或2倍MIC时,24 h内能杀灭金黄色葡萄球菌、大肠杆菌或链球菌、沙门氏菌。头孢喹诺对上述几种临床分离细菌具有很强的抑菌效果和杀菌活性。     

应用羽毛无损鉴别鹌鹑早期性别的方法

试验旨在探寻一种无损、价廉、耗时短,可用于大批量鹌鹑早期性别鉴定的方法。采用4种不同方法(试剂盒法、加热法、碱裂解法和碱裂解-乙醇洗涤法)提取鹌鹑羽毛样品的基因组DNA,使用凝胶电泳检验DNA质量,紫外分光光度计测定其浓度和纯度;选择最佳的羽毛DNA提取方法,应用PCR法检测3日龄鹌鹑的性别。基因组DNA提取电泳结果显示,仅碱裂解-乙醇洗涤法提取的DNA与试剂盒提取的DNA出现条带的位置相同;紫外分光光度计测定结果表明,试剂盒法获得的DNA浓度值远低于其他3种方法,其中碱裂解法浓度最高;OD₂₆₀/OD₂₈₀比值以试剂盒法和碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)为高,OD₂₆₀/OD₂₃₀比值以试剂盒法最高,碱裂解-乙醇洗涤法(裂解10 min)次之。PCR结果显示,除碱裂解法原液无目的条带外,其余各组均出现目的条带;碱裂解法操作步骤少、时间最短,加热法和碱裂解-乙醇洗涤法次之。综合分析选择碱裂解-乙醇洗涤法对70只鹌鹑进行性别鉴定,羽毛PCR鉴定性别结果与性腺解剖结果的符合率为100%,卡方分析检...     

红茂草中精油成分分析及抑菌活性的研究

为红茂草药物的进一步开发和利用,本试验以甘肃平凉地区野生药用植物红茂草为研究对象,采用水蒸气提取、蒸馏萃取（SDE）提取、超临界CO₂萃取等3种方法,分别提取红茂草中的精油成分;以GC-MS对其精油进行化学成分分析,并将超临界CO₂萃取的红茂草精油采用平板菌落计数法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌进行抑菌活性测定。结果显示,三种提取方法中,水蒸气提取法和蒸馏萃取提取法所得精油为橙黄色,有浑浊,超临界CO₂萃取法所得精油为淡黄色,澄清液体。3种方法所得精油均含有24种共同成分,以超临界CO₂萃取法最优,其提取率为2.1220%,水蒸气提取法最低,提取率为1.7870%;将超临界CO₂萃取的红茂草精油作用于3种供试菌,测定其最小抑菌浓度（MIC）分别为：金黄色葡萄球菌0.2500 g/mL、大肠杆菌0.3000 g/mL,绿脓杆菌0.2600 g/mL,抑菌效果显著。研究结果表明,超临界CO₂萃取是提取红茂草精油的最佳方法,通过超临界CO₂萃取法提取的红茂草精油对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有良好的抑菌效果。     

中草药对奶牛乳房炎致病菌的体外抑菌效果试验

目的 为研究中草药对奶牛乳房炎主要致病菌体外抑菌效果。方法 试验选取金银花等10 味中草药,采用试管二倍稀释法测定其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果 中草药对主要致病菌有不同程度的抑菌效果。连翘对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好,MIC为15.63 mg/mL;板蓝根、蒲公英和黄芩对大肠杆菌抑菌效果最好,MIC为62.5 mg/mL;紫花丁对无乳链球菌抑菌效果最好,MIC为15.63 mg/mL。结论 试验为临床研制乳房炎中草药制剂提供了技术参考。     

防治奶牛乳房炎中药组方的筛选及其抑菌杀菌作用研究

试验根据中兽医治疗奶牛乳房炎的辨证施治原则,筛选出抑制引起奶牛乳房炎主要病原菌（金黄色葡萄球菌和大肠杆菌）的最佳中药组方,为其临床防治提供新的途径与方法。选用蒲公英、马齿苋、金银花、紫花地丁、赤芍、白芍、菊花、黄芩、漏芦、红花10味中药,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选抗菌中药组方中的最佳优选因素,再通过L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方配比;采用牛津杯法测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌效果;采用二倍稀释法和平板计数法分别测定中药组方对奶牛乳房炎主要致病菌最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示,通过L₁₂（2¹¹）正交试验初步筛选出了抗菌中药组方最佳优选因素：赤芍、黄芩、红花、菊花和白芍;L₁₆（4⁵）正交试验进一步筛选药物组方最佳配比为黄芩：赤芍：菊花：白芍：红花=3：3：3：1：2;新药组方对大肠杆菌的抑菌直径为17.39 mm,MIC和MBC分别为62.50、125.00 mg/mL,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为25.44 mm,MIC和MBC均为31.25 mg/mL。本研究成功筛选出了一种对奶牛乳房炎主要致病菌具有良好抑菌、杀菌作用的中药新配比组方。     

苦参生物碱体外抗菌活性研究

采用杯碟法和对倍稀释法测定苦参生物碱对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌、枯草杆菌的抑菌效果和最低抑菌浓度(MIC)。应用扫描电镜方法观察苦参生物碱对大肠杆菌形态结构的影响。结果显示,20mg/ml苦参生物碱对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌的抑菌圈分别是18.8mm、12.6mm和6.4mm,MIC分别是5mg/ml、8mg/ml和20mg/ml,而对沙门氏菌、枯草杆菌无抑菌作用。扫描电镜观察,苦参醇提物使大肠杆菌的菌体形态结构发生明显变化,表现为菌体固缩变形,中间凹陷,呈规则元宝状,严重者细胞壁破损,内容物外泄。     

头孢噻呋体外抗菌活性及其对实验性感染鸡大肠杆菌病的疗效

采用肉汤微量稀释法测定头孢噻呋对大肠杆菌、沙门菌、溶血性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等病原菌的最小抑菌浓度,采用棋盘稀释法测定头孢噻呋与氧氟沙星、甲氧苄啶(TMP)的联合抑菌浓度指数.结果表明,头孢噻呋、氧氟沙星对5种病原菌都具有很强的抗菌活性;头孢噻呋与氧氟沙星联合使用时,对大肠杆菌、沙门菌、链球菌可产生协同作用,对溶血性巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌表现为无关作用;头孢噻呋与TMP联合用药时,对上述5种病原菌均具有协同作用.对实验性感染鸡大肠杆菌病的药效学试验结果表明,头孢噻呋高(100mg/L)、中(50mg/L)剂量对感染鸡的有效率明显高于对照药物庆大霉素(P<0.05),极显著高于感染对照组(P<0.01);头孢噻呋高剂量组(100mg/L)感染鸡的增重率与健康对照组相比差异不显著(P>0.05).建议临床应用头孢噻呋治疗鸡大肠杆菌病时,可采用饮水给药,剂量为100mg/L.     

勒马回与抗生素配伍前后对金黄色葡萄球菌抑菌效果的比较

为了探讨抗生素与勒马回配伍前后联合抑菌效果,试验采用倍比稀释法分别测定勒马回、头孢拉定、左氧氟沙星、青霉素钠、磷霉素钠对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度,采用棋盘稀释法测定勒马回和4种抗生素配伍后体外联合抑菌浓度指数,比较配伍前后联合抑菌的效果。结果表明:勒马回提取液、头孢拉定、磷霉素、青霉素、左氧氟沙星对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为80,1,0.5,0.25,0.5μg/mL。勒马回与青霉素和头孢拉定联用后呈相加作用,与左氧氟沙星联用后呈无关作用,与磷霉素联用后呈颉颃作用。说明勒马回与青霉素和头孢拉定联用可达到高效抑制金黄色葡萄的目的。     

赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素及蛋白A表达的影响

探讨了赤芍水提物在体外对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A分泌及mRNA转录的影响。试验中采用微量倍比稀释法测定赤芍对金黄色葡萄球菌ATCC29213的最小抑菌浓度(MIC);采用Western blot和实时荧光定量PCR检测亚抑菌浓度下赤芍水提物对金黄色葡萄球菌肠毒素A、B及蛋白A在mRNA转录和毒素蛋白分泌表达的影响。结果表明,赤芍水提物对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC值为6.3mg/mL;在亚抑菌浓度下,赤芍水提物可以明显抑制肠毒素A、B及蛋白A在蛋白水平和转录水平的表达,且呈现明显的浓度依赖性。     

金黄色葡萄球菌细胞壁变化与β-内酰胺类抗生素耐药的关系

旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016-2018年间，采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样，通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法，分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌；利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性，了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况；通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度，并结合透射电镜进行形态观察，以确定增厚及发生原因。结果显示，分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌，其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）。药敏试验结果显示，金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率，其中氨苄西林为79.69%，青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多；其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明，4种相关基因的转录丰度均极显著上调（P<0.001或P<0.01）。透射电镜观察发现，甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）JY21菌株的细胞壁在64和128 μg·mL^-1的青霉素浓度下，较对照组均极显著增厚（P<0.001），并可见细胞壁表面粗糙，有结节状凸起；但药物浓度从64 μg·mL^-1升高至128 μg·mL^-1细胞壁不再显著增厚（P>0.05）。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚（P>0.05）。综上所述，本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素，存在细胞壁增厚的耐药机制；增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比，细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。