侵染广西甜椒的西瓜银斑驳病毒分子鉴定

西瓜银斑驳病毒(Watermelon silver mottle vi-rus,WSMoV)为布尼亚病毒科(Bunyaviridae)番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)病毒,通过蓟马以持久增殖型方式传播,主要危害番茄、辣椒、西瓜等茄科和葫芦科作物,引起褪绿轮纹、环斑、皱缩等症状,造成严重的经济损失[1]....     

广东西瓜上检测到甜瓜黄斑病毒

在广东发现了可能被番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒侵染的西瓜,采用ELISA和RT-PCR法对该西瓜病样进行了检测,西瓜病叶粗汁液不与番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)和西瓜银斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)的血清发生反应;利用引物J13/UHP通过RT-PCR可以扩增出约1400 bp的基因片段,该片段包括一个840 bp的核衣壳蛋白ORF,其推导的氨基酸序列与已报道的Melon yellow spot virus(MYSV)NP基因氨基酸序列的同源率都为99%,进化树分析表明侵染广东西瓜的病毒(命名为MYSV-GZ)属于Tospovirus的MYSV血清组。     

凤仙花花叶病的病原鉴定

<正>0引言凤仙花(Impatiens balsamina)为凤仙花科(Balsaminaceae)凤仙花属(Impatiens)一年生草本植物,在我国大部分地区均有分布。栽培过程中凤仙花真菌病害主要有白粉病、褐斑病、炭疽病和立枯病等^[1-2]。有关凤仙花病毒病的报道,如番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus,TSWV)^[3]、凤仙花坏死斑点病毒(impatiens necrotic spot virus,INSV)^[4]、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)^[5-6]、烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)^[7]、番茄花叶病毒(tomato mosaic virus,ToMV)^[8]、长叶车前花叶病毒(ribgrass mosaic virus,RMV)^[9]等均可侵染凤仙花。     

番茄环纹斑点病毒核壳体蛋白抗血清制备及其血清学特性分析

 番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus, TZSV)是番茄斑萎病毒属的一个新种,对云南番茄、辣椒生产造成严重危害。用RT-PCR 从感病番茄中扩增得到长度为837 bp TZSV 的核壳体蛋白基因(N 基因),将其克隆到原核表达载体pET-28a( + ),获得重组原核表达载体pET-TZSV-N,在大肠杆菌BL21 中表达,SDS-PAGE 分析表明,该载体高效表达33kDa 的融合蛋白;以纯化的融合蛋白作为抗原免疫家兔制备TZSV 核壳体蛋白(N 蛋白)的多克隆抗体,间接酶联免疫测定(ID-ELISA)表明效价为1 / 6 000;Western blot 分析表明,该抗血清能与西瓜银色斑驳病毒(WSMoV)血清组的辣椒褪绿病毒(CaCV)反应,而与番茄斑萎病毒(TSWV)、凤仙花坏死斑病毒(INSV)无血清交叉反应,说明获得的抗血清能用于WS-MoV 血清组成员的检测,TZSV 属于WSMoV 血清组成员。     

云南西瓜银灰斑驳病毒病害的鉴定

 应用DAS-ELISA和RT-PCR方法从褪绿和银色斑驳的西瓜叶片中检测到病毒分离物（WSMoV-YN）,感病样品能与WSMoV/GBNV复合抗血清（Agdia）呈阳性反应。获得WSMoV N蛋白的多克隆抗体,抗体能与WSMoV血清组成员CaCV和TZSV反应,但不能与INSV、TSWV、HCRV和GYSV反应。为明确引起该病害的病毒种类,采用Tospovirus通用引物对样品的总RNA进行RT-PCR扩增,获得长度为3 554 nt的S RNA全序列,经Blastn比对分析与WSMoV中国台湾分离物同源性最高,为95.8%,其N和NSs蛋白氨基酸序列同源性分别为99%和97.6%。构建系统进化树发现,西瓜银灰斑驳病毒云南分离物（WSMoV-YN）与其他WSMoV聚为一支。确定引起云南西瓜病害的病毒为WSMoV。     

山药潜隐病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

<正>0引言山药(Dioscorea oppositifolia L．)是薯蓣科薯蓣属植物,可作为药用或食用材料^[1],广泛分布于全球热带及亚热带地区,在我国河南、山东、江苏、广西和江西等省份都有种植。山药生产中以块茎无性繁殖方式为主,导致病毒病发生严重^[2]。侵染山药的病毒主要包括马铃薯Y病毒属(Potyvirus)^[3]、杆状DNA病毒属(Badnavirus)^[4]、香石竹潜隐病毒属(Carlavirus)^[5]以及蚕豆病毒属(Fabavirus)^[6]的一些病毒。     

从云南蝴蝶兰上检测到番茄斑萎病毒属病毒

 应用电镜观察、DAS-ELISA以及RT-PCR检测,从症状表现黄化、环斑的云南蝴蝶兰(Phalaenopsis amabilis)病样中分离得到的一个病毒分离物Tospo-Pha。该分离物粒子近球形、具包膜、直径约90nm,与番茄斑萎病毒属(Tospovirus)的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mosaic virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)复合抗血清呈强阳性反应,分子检测发现该分离物SRNA5'末端序列与CaCV大岩桐分离物(CaCV-Gloxinia)同源性最高(91.0%),在系统进化树中与CaCV聚于同一分支。上述结果表明,从云南蝴蝶兰中分离到的Tospo-Pha属于Tospovirus病毒。     

亚洲柑橘木虱中柑橘黄脉病毒的鉴定

<正>柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)为正单链RNA病毒，属于α线性病毒科Alphaflexiviridae印度柑橘病毒属Mandarivirus成员，病毒粒子为弯曲线状，基因组大小约为7 529 nt^[1]。CYVCV可侵染大部分柑橘品种，对柠檬和酸橙危害尤为严重。CYVCV 2009年在我国首次发现，现已在我国柑橘主产区均有发生，已知的传媒昆虫为柑橘粉虱(Dialeurodes citri)和棉蚜(Aphis gossypii)^[2-4]。     

玉米黄花叶病毒在河南省小麦玉米上的分布及其CP序列分析

<正>0 引言河南省是我国玉米小麦的种植大省,玉米和小麦的种植面积常年保持在3 800千公顷和5 670千公顷以上。玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus, MaYMV)是2016年在我国云南省玉米上首次发现的一种新病毒^[1],属于马铃薯卷叶病毒属(polerovirus),能够引起玉米植株叶片黄化、花叶、红叶等症状^[6],之后该病毒在亚洲^[1-2]、非洲^[3-4]、南美洲^[5]等地区禾本科作物上均有发现,     

河南丹参棒孢霉叶斑病病原菌的鉴定

<正>丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.),又叫活血根，为唇形科(Labiatae)鼠尾草属(Salvia Linn)多年生草本药用植物，干燥根入药，主要用于治疗心脑血管等疾病^[1]。近年来，随着丹参种植规模的扩大，丹参根腐病^[2-3]、枯萎病^[4]和茎基腐^[5]等病害的大规模发生，限制了丹参种植产业的发展。2019—2021年在河南省禹州、     

侵染云南早春西瓜的西瓜银色斑驳病毒和黄瓜花叶病毒分离鉴定

早春西瓜是云南热区的特色水果,近年来病毒病发生危害日益严重。为明确侵染早春西瓜的主要病毒,本研究采集了云南省西双版纳州勐海县的早春西瓜植株与果实病毒病样品,应用透射电子显微镜制样观察、间接酶联免疫吸附测定(ID-ELISA)和RT-PCR扩增克隆与测序分析进行检测鉴定。结果表明：侵染早春西瓜的病毒为西瓜银色斑驳病毒(WSMoV)和黄瓜花叶病毒(CMV);ID-ELISA对叶部样品WSMoV和CMV的检出率分别为70%和20%,复合侵染率为15%,RT-PCR对这两种病毒的检出率分别为100%和65%,复合侵染率为65%;并且,实验对发病果实种子进行RT-PCR扩增克隆和测序分析发现上述2种病毒复合侵染率达100%;系统发育树分析表明,云南西瓜WSMoV分离株21YV-40(GenBank登录号：OP617563)、21YV-43(GenBank登录号：OP867047)与云南分离株Banna-2011(GenBank登录号：KM242056)相似性最高,达到99.00%,云南西瓜CMV分离株CMVYN40(GenBank登录号：OP617565)、CMVYN46(GenBank登录号：...     

海南海芋叶斑病病原鉴定

<正>海芋(Alocasia odora)又名滴水观音，为天南星科海芋属多年生大型常绿观叶草本植物，主要分布于我国海南、福建、广西等热带和亚热带地区^[1-2],广泛用于城市园林造景工程，也可作为室内观赏植物^[3-4]。海芋常见的病害有叶斑病、枯萎病、基腐病等^[5], 其病原菌分别为海芋链格孢(Alternaria alocasiae)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)^[6-7]。     

温郁金叶鞘腐烂病病原菌的鉴定

<正>温郁金(Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling)为姜科植物,原产于浙江省温州市瑞安市,具有去除血瘀、消炎和抗癌等多种功能^[1]。目前,已被报道的温郁金病害包括叶枯病^[2]、白绢病^[3]、病毒病^[4]等。2017年6月在海南省东山镇种植基地发生温郁金叶鞘腐烂病。主要危害分蘖期的茎基部和叶鞘,从茎基部开始发病;发病初期茎基部产生浅褐色水渍状病斑,病斑逐渐向上延伸至叶鞘;后期形成水渍状、     

利用siRNA高通量测序技术检测烟草病毒

<正>烟草是我国的主要经济作物之一,病毒病是烟草生产上的重要病害。常见的烟草病毒主要有马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、烟草脉带花叶病毒(Tobacco vein banding mosaic virus,TVMBV)等[1]。此外,近年来在烟草上还发生一些新的病毒病害,如南美红辣椒脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)[2]、番茄环纹斑点病毒(Tomato zonate spot virus,ZTSV)[3]和番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)[4]。这些病毒     

椰枣叶斑病的病原鉴定

<正>椰枣树(Phoenix dactylifera L.)属多年生棕榈科热带植物，是阿拉伯国家重要的经济和粮食作物，果实被称为“沙漠面包”,具有较高的营养价值^[1-2]。 目前我国对椰枣的研究主要集中于椰枣化学成分分析^[3]、基因表达^[4]、植物组织培养^[5]、逆境胁迫^[6]等领域，对椰枣病害发生及病原菌种类鲜有报道。2020年11月—2021年6月，对海南省椰枣病害发生情况进行调查，     

分离自我国北方玉米叶斑的链格孢和弯孢属真菌

<正>0引言国内由链格孢属(Alternaria)和弯孢属(Curvularia)真菌引起的玉米叶斑病在黑龙江、吉林、河南、海南等地都有报道^[1-8];在青海发生的玉米叶斑病多由Alternaria引起^[9];而在辽宁、内蒙古、北京、河北、山东、陕西和四川等地发生的玉米叶斑病多由Curvularia引起^[6,10-12]。根据多基因序列分析鉴定的种有A. burnsii[3];据rDNA ITS^[4,9]或多基因^[3]鉴定的种有A. alternata、A. tenuissima和Alternaria sp.;     

广西胜红蓟黄脉病样中发现多种菜豆金色花叶病毒属的病毒

 双生病毒科(Geminiviridae)病毒是一组植物单链DNA病毒,它的特点是病毒粒子形态为孪生颗粒状。双生病毒分为菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)、甜菜曲顶病毒属(Curtovirus)、玉米线条病毒属(Mastrevirus)和番茄伪曲顶病毒属(Topocuvirus)^[1]。     

番茄褐色皱果病毒TaqMan 荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus, ToBRFV)TaqMan荧光定量RT-PCR方法，本研究针对ToBRFV RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase, RdRP)基因序列设计了4组特异性引物和TaqMan探针，构建了标准曲线，并对该方法的特异性、灵敏度和实际样品的检测效率进行评估。结果显示，该方法特异性强，与番茄花叶病毒、番茄斑驳花叶病毒、烟草花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、番茄环斑病毒、番茄黑环病毒、辣椒轻斑驳病毒、烟草环斑病毒和凤果花叶病毒等9种病毒均无交叉反应。建立的标准曲线的R²为0.999,扩增效率为102.096%,检测灵敏度为10 fg/μL,与EPPO PM 7/146(1)推荐的CaTa28、CSP1325方法相当，是常规RT-PCR的100倍；采用该方法成功从60份番茄和辣椒叶片、种子样品中检出10份阳性样品。建立的TaqMan荧光定量RT-PCR方法特异性强、灵敏度高，适用于实际样品中ToBRFV的快速精准检测。     

番茄斑萎病毒RT-RPA检测方法的建立

为了快速、准确地鉴定番茄斑萎病毒,根据GenBank中韩国的番茄斑萎病毒株系(序列号:KC261961)ss RNA-S基因组编码保守外壳蛋白基因序列设计特异性引物TSWV 5F/5R,建立了番茄斑萎病毒RT-RPA检测方法。特异性检测结果表明,仅番茄斑萎病毒样品扩增出215 bp目标条带,而其他4种病毒样品无扩增出目标条带。灵敏度检测结果表明番茄斑萎病毒RPA检测方法可以达到10-5 cDNA稀释度。     

引起我国葡萄黑根病的Dactylonectria novozelandica的鉴定

<正>葡萄黑根病(Black foot disease)是重要的葡萄枝干病害之一，全球葡萄主要种植区均有发生^[1],近两年我国有该病害发生的报道^[1-2]。田间，黑根病主要危害8年树龄以下的幼树，症状主要表现为发芽异常，枝条节间缩短，叶片失绿黄化，根部出现褐色至黑色坏死等^[3-5]。引起葡萄黑根病的病原菌复杂多样，已报道8个属34种病原菌^[1]。2021年，北京市林果所育苗棚发现一批葡萄幼苗的根部及根茎部变褐或变黑，根系发育不良，毛细根稀少，