穿心莲超微粉2种成分在鸡体内的药动学研究

作者研究了穿心莲超微粉中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯2种有效成分在鸡体内的药物代谢动力学特征.根据体质量以5 g·kg-1单剂量给鸡灌服给药,然后采用HPLC法问时测定其体内药物浓度,用3P97药动学程序分析其药动学特征.结果表明穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯在鸡的血浆浓度一时间数据符合一级吸收二室模型,主要的药动学参数分别如下:t1/2α(47.4±3.5)和(41.9±3.9)min,t1/2β(104.8±12.8)和(143.0±12.8)min,t1/2Ka(23.2±2.6)和(9.77±1.22)min,AUC(329.3±28.8)和(329.1±25.5)(μg·mL-1)·min,tmax(51.5±3.5)和(37.2±2.8)min,Cmax(1.60±0.32)和(1.44±0.09)μg·mL-1,MRT(175.2±15.9)和(219±18)min.这2种有效成分的体内过程表征了该超微粉在鸡体内的药动学规律,且吸收和消除差异有显著或极显著的差异;本研究为穿心莲粉体制剂的临床应用和中药多成分药动学研究提供参考.     

RP-HPLC双波长法测定四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

建立了反向高效液相色谱法检测四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的方法。试验采用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温30℃;穿心莲内酯检测波长226 nm,脱水穿心莲内酯检测波长252 nm;穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定范围分别为2.32~37.14μg/m L(r=1.0000),2.00~31.94μg/m L(r=1.0000);加样平均回收率分别为99.12%、98.84%;RSD分别为0.60%、0.62%;该方法方便、准确、可靠,适用于测定四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。     

HPLC双波长法测定四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

目的：建立HPLC双波长法同时测定四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量。方法：采用XBridge C₁₈色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-水(52:48)为流动相,流速1.0ml.min_-1^;柱温25℃;进样量10μL,检测波长分别为225nm(穿心莲内酯)和254nm(脱水穿心莲内酯)。结果：穿心莲内酯浓度在12.7375μg.mL_-1^～509.5μg.mL_-1^范围内,线性良好(r₂^=0.9996);脱水穿心莲内酯浓度在3.4μg.mL_-1^～136μg.mL_-1^范围内,线性关系良好(r₂^=0.9997)。穿心莲内酯加样回收率平均为98.8%,RSD 为1.0%;脱水穿心莲内酯回收率平均为99.9%,RSD 为0.8%。结论：该方法快捷、灵敏、准确、可靠,可用于四味穿心莲散中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯2个有效成分的同步测定,为四味穿心莲散的质量控制和评价提供科学依据。     

基于LC-MS/MS分析板芪清肺组方发酵代谢差异

【目的】试验从代谢组学水平探讨贝莱斯芽孢杆菌发酵板芪清肺组方中药材的代谢差异。【方法】采用液相色谱质谱/质谱联用(LC-MS/MS)技术,通过主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)等多元统计和代谢途径分析探讨板芪清肺组方中药材粉末和经贝莱斯芽孢杆菌固态发酵的板芪清肺组方药材差异代谢产物和代谢通路。【结果】发酵板芪清肺颗粒组方组(Enzyme组)和未发酵板芪清肺颗粒组方对照组(Water组)在正离子模式下共筛选出34 624个差异代谢产物,在负离子模式下共筛选出15 762个差异代谢产物。将差异代谢物进行聚类分析,鉴定出的差异代谢物可分为203类,正、负离子模式组间关系PCA图的区分效果良好;发酵后主要上调差异代谢物包括雌马酚、二乙酸乙二醇酯、香草乙二醇、D-鸟氨酸、喹雌酚、胆固醇和乙酰胆碱等,下调差异代谢产物包括黄曲霉素、芥酸、肉豆蔻酸和黄嘌呤等;KEGG代谢通路富集分析筛选到27条显著差异代谢通路,包括近端小管碳酸氢盐回收、精氨酸生物合成、组氨酸和嘌呤衍生生物碱的生物合成、植物次生代谢物的生物合成、苯丙烷的生物合成、蛋白质的消化和吸收等。【结论】板芪清肺组方...     

穿心莲内酯对小鼠肺部炎症的影响

给肺炎模型小鼠腹腔分别注射高剂量（200mg／kg·d）和低剂量（100mg／kg·d）的穿心莲内酯,7d后,测定小鼠肺脏指数、肺组织病理变化和血液中相关免疫细胞数量的变化,探讨穿心莲内酯对呼吸道感染的影响。结果表明,与模型组相比,穿心莲内酯高、低剂量组小鼠肺脏病变评分显著降低（P〈0．01）;穿心莲内酯高剂量组小鼠肺指数显著降低（P〈0．05）;穿心莲内酯高、低剂量组小鼠血液中淋巴细胞数量显著降低（P〈0．05）,穿心莲内酯低剂量组小鼠血液中中性粒细胞数量显著升高（P〈0．05）。说明穿心莲内酯能显著降低肺炎小鼠淋巴细胞数量和小鼠肺指数,减缓或消退肺部炎症,对小鼠呼吸道感染有明显保护作用。     

鸡血浆中脱水穿心莲内酯的浓度测定

为了建立鸡血浆脱水穿心莲内酯的测定方法,给动物应用穿心莲后有效成分的吸收评价研究提供基础资料,试验以脱水穿心莲内酯为指标性成分,应用反相HPLC法测定岭南黄鸡内服穿心莲超微粉后血浆中脱水穿心莲内酯含量的变化.结果表明:内服给药后,在测定的时间段(0～10 h)内脱水穿心莲内酯在血浆中均有分布,给药后约40 min达到峰值,峰浓度约为1.542 μg/mL,给药后10 h的浓度为0.067 μg/mL;该方法的平均绝对回收率为90.44%～98.99%;最低定量限、最低检测限分别为0.04 μg/mL和0.02 μg/mL.     

HPLC测定穿白痢康丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

采用液相色谱法测定穿白痢康丸中穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯的含量.以甲醇-水（52∶48）为流动相;lnertsil@ODS-SP（250 mm×4.6 mm,5μm）为固定相;检测波长240 nm.穿心莲内酯在0.06-1.2 μg,脱水穿心莲内酯在0.04-0.80 μg范围内具有良好的线性关系;穿心莲内酯的平均加样回收率为98.6％,RSD为0.47％,脱水穿心莲内酯的平均加样回收率为99.3％,RSD为0.77％.该法简便、快速、准确可靠,可用于穿白痢康丸中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量测定.     

基于LC-MS技术的代谢组学方法研究吡虫啉对工蜂代谢的影响

试验利用液相色谱-质谱联用技术（liquid chromatograph mass spectrometer,LC-MS）对出房的1日龄工蜂进行代谢组学分析,以明确亚致死剂量的吡虫啉对蜜蜂生长发育期代谢的影响。采用蜜蜂幼虫人工室内饲养技术,选取意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）为研究对象,用含0.00001μg/μL亚致死剂量吡虫啉的日粮饲喂1日龄幼虫直至排便。记录蜜蜂的羽化率、初生重、出房时间;测量蜜蜂血淋巴的超氧化物歧化酶（super oxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）、过氧化物酶（peroxidase,POD）活力;采用LC-MS方法检测亚致死剂量浓度吡虫啉处理蜜蜂羽化出房时的代谢物差异,对检测数据进行模式识别分析,筛选差异代谢物。结果表明,亚致死剂量的吡虫啉引起蜜蜂出房时间显著延长（P<0.05）;使蜜蜂血淋巴的SOD和POD活性显著升高（P<0.05）;采用主成分分析（principal component analysis,PCA）和偏最小二乘法判别方法（supervised partial leastsquares-discriminant analysis,PLS-DA）分析代谢组数据,结果显示试验组和对照组明显分离。试验共鉴定出18个蜜蜂差异代谢物。本结果可对进一步研究吡虫啉胁迫蜜蜂代谢物的代谢规律、阐明蜜蜂解毒机制提供理论依据。     

微生物代谢组学研究方法

代谢组学是后基因纰时代新兴的一种研究生物样品中所有小分子代谢物的技术,是系统生物学的有机组成部分,并在近年来取得很大进展.该文就微生物代谢组学研究中有关样品制备、代谢产物分析鉴定和数据分析等涉及的主要方法进行了概述,并用一些典型实例介绍微生物代谢组学的应用,对微生物代谢组学研究中潜在的问题和未来发展趋势进行了讨论.     

基于UPLC-MS/MS代谢组学技术分析归芪益母口服液对产后奶牛血浆代谢物的影响

【目的】通过超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)代谢组学技术分析归芪益母口服液对产后奶牛血浆代谢物的影响,以阐明归芪益母口服液对产后奶牛的保健机制。【方法】选取15头体况相近、2～3胎健康待产荷斯坦奶牛,随机分为对照组(n=7)和试验组(n=8),分别在产后立即灌服饮用水和归芪益母口服液,500 mL/头,连续灌服6 d。产后7 d晨饲前采血,经预处理后采用UPLC-MS/MS上机检测,利用MetaboAnanlyst 5.0软件筛选VIP≥1、P<0.05的差异代谢物进行代谢通路富集分析。【结果】产后7 d,试验组血浆代谢轮廓较对照组发生明显改变,筛选出16种差异代谢物,其中8种显著上调,包括蛋氨酸亚砜、磷酸肌酸、甘油磷酸胆碱、皮质醇、L-色氨酸、溶血磷脂酰胆碱(18∶2)、五羟色胺和L-精氨酸;8种显著下调,包括1-氨基环己酸、3-甲基巴豆酰甘氨酸、L-天冬酰胺、单酰甘油酯酰基(16∶1)、泛酰巯基乙胺、十八碳单烯酰胺、1-甲基鸟嘌呤和3-N-甲基-L-组氨酸。差异代谢物显著富集在甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、色氨酸代谢通路。【结论】归芪益母口服液对产后奶牛具有...     

亚急性瘤胃酸中毒对泌乳奶牛血浆生化指标及代谢组的影响研究

本试验旨在探究亚急性瘤胃酸中毒（subacute rumen acidosis, SARA）对泌乳奶牛血液生化指标和血浆代谢组的影响。试验选用8头装有永久性瘤胃瘘管的泌乳中期奶牛,随机分成对照组（CON）（n=4）和处理组（SARA）（n=4）,CON组与SARA组分别饲喂精粗比为4∶6和6∶4的全混合日粮,试验周期为3周。于试验期每周最后一天晨饲后0、2、4、6、8和12 h进行瘤胃pH的测定,同时在pH测定当天晨饲后6 h采集颈静脉血样,用于血液生化指标和代谢组的分析。结果表明,与CON组相比,SARA组的瘤胃pH显著降低（P=0.002）,两组干物质采食量没有显著差异（P=0.524）。血浆生化指标结果显示,与CON组比较,SARA组奶牛的β-羟丁酸浓度显著降低（P=0.007）,甘油三酯浓度显著升高（P=0.014）。采用液相-质谱（LC-MS）联用技术对血浆进行代谢组学分析,主成分分析（PCA）和偏最小二乘法分析（PLS-DA）结果显示,SARA组奶牛血浆代谢物组成较CON组发生明显变化,两组间共检测到26种差异代谢物（VIP>1 & FDR<0.05）,与CON组相比,SARA组奶牛血浆中的7-酮脱氧胆酸、脱氧胆酸、胆酸、12-酮脱氧胆酸、12（13）Ep-9-KODE、12,13-DHOME和L-天冬酰胺代谢物含量显著升高（FDR<0.05）,而十一烷二酸、十六烷二酸、9-HODE、血氧烷B3、PGE2、L-精氨酸、L-色氨酸、L-苏氨酸、异丁酰甘氨酸、异戊酰甘氨酸、马尿酸、4-羟基马尿酸和6-磷酸-2-脱氢-D-葡萄糖酸酯等代谢物含量显著降低（FDR<0.05）。综上,与CON组比较,SARA组奶牛的脂代谢、氨基酸代谢和糖代谢发生显著变化,这些物质可作为SARA潜在的生物标志物。     

脂质代谢组学的研究进展

脂质是动物体内重要的生物大分子之一,具有多种重要生物学功能。脂质代谢组学是新兴起的一门研究脂质代谢调控在各种生命现象中作用机制的新学科。它通过从系统水平上研究生物体内的脂质,揭示脂质分子及与其他生物分子间的相互作用。脂质代谢组学在营养学、功能基因组学等相关学科中的应用已有许多报道。本文主要介绍了脂质的分类与代谢、脂质代谢组学的概念、研究方法、研究现状及其应用研究进展等。     

基于非靶向代谢组学分析黄芪多糖对热应激奶牛血清代谢的影响

旨在通过测定注射黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)后热应激奶牛血清代谢组学,分析血清差异代谢物及代谢通路,为APS缓解奶牛热应激作用提供参考依据.选取6头健康的荷斯坦奶牛,颈部肌肉注射APS注射液(30mL/d),连续注射4d,停止3d为1个周期,试验期共3个周期.试验期前后采集奶...     

饲喂土霉素对鲤鱼生长及代谢残留的研究

饲喂土霉素对鲤鱼生长及代谢残留的研究中国水产科学院黄海水产研究所陈四清辛福言李晓川尚德荣中国兽药监察所李美同仲锋郭文玲王芳随着水产养殖业的发展，生产中便经常使用抗生素防治鱼病，土霉素（ＯＴＣ）已成为普遍使用的一种抗菌素。生产上土霉素多掺入配合饵料中喂...     

基因代谢组学研究谷物日粮对奶牛瘤胃健康的影响

奶牛泌乳前期,饲喂高谷物日粮易导致代谢紊乱。为了揭示谷物日粮对瘤胃健康和奶牛代谢紊乱的机理,本试验选取8头奶牛,饲喂4种谷物(0%、15%、30%、45%)日粮,采集瘤胃液,利用核磁共振、气质联用仪、流动注射串联质谱,最终鉴定并定量了93种代谢物。多元统计分析结果表明,45%谷物日粮条件下瘤胃代谢物与其他3种日粮(0%、15%、30%)明显不同;试验期第1天和最后1天的瘤胃代谢物也显著不同,说明11 d的预饲期偏短。饲喂高精料日粮时,瘤胃多种毒性及炎性物质,如腐胺、甲胺、乙醇胺和短链脂肪酸,均有增加;多种氨基酸如苯丙氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、亮氨酸、精氨酸、缬氨酸、苯乙酰甘氨酸也有变化。本试验结果显示,利用多种代谢组平台进行研究可以更加深入的揭示日粮对瘤胃代谢物的影响,有助于认识谷物日粮对奶牛健康的影响。     

杜仲叶影响绵羊血清代谢组学的研究

为探索杜仲叶（Eucommia ulmoides leaves,EUL）对绵羊营养代谢和生理功能的影响,本研究选取25~30 kg、70~80日龄的湖羊30只,随机分为3组,每组10只,分别为对照组（无杜仲叶日粮组,CTL）、低剂量添加组（10%杜仲叶日粮组,EUL1）、高剂量添加组（20%杜仲叶日粮组,EUL2）。预试期15 d,正试期90 d。试验结束时,通过静脉采血,离心后分别取血浆和血清,血浆用于生化分析,血清用于代谢组学分析。结果显示,饲喂杜仲叶后,EUL1和EUL2组绵羊血浆中葡萄糖、非酯化脂肪酸、高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白均升高,EUL2组与CTL组差异显著或极显著（P<0.05;P<0.01）,EUL1组与CTL组差异不显著（P>0.05）;EUL1和EUL2组尿素较CTL组极显著降低（P<0.01）,总胆固醇水平显著降低（P<0.05）,EUL1和EUL2组间差异不显著（P>0.05）。血清样品采用液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）进行检测,在正模式下得到593个代谢物,在负模式下得到1 570个代谢物。通过主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）发现,各试验组间的差异代谢物较多,能将其得分图明显区分。进一步对变量重要性因子大于1.0（VIP>1.0）的代谢物进行t检验后发现,各组之间有24种特征代谢物差异显著（P<0.05）。这些差异代谢物涉及体内葡萄糖、脂肪酸和氨基酸等的代谢,有的代谢物还与动物的免疫机能相关。杜仲叶饲料对绵羊的营养代谢、生理状态和免疫状况可产生明显的影响,代谢组学可有针对性地分析代谢物发生的步骤及生理作用,为阐明杜仲叶影响营养代谢的机制提供参考。     

基于靶向代谢组学研究环形泰勒虫对宿主细胞能量代谢的影响

环形泰勒虫感染宿主淋巴细胞可使其获得类似肿瘤细胞样的无限增殖能力,而细胞转化现象会伴随虫体的消失而终止,该寄生模式为人们更好地理解环形泰勒虫和细胞相互作用的分子机制提供了一个理想模型。本研究通过靶向代谢组学方法研究环形泰勒虫感染对宿主细胞能量代谢相关代谢物的变化情况,为进一步揭示其转化机制奠定基础。以环形泰勒虫转化细胞为试验材料,设置布帕伐醌（buparvaquone,BW720c）药物处理组、DMSO对照组及空白对照组,观察不同处理对环形泰勒虫感染细胞生长状态的影响;并在72 h时收集细胞样品,利用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）的靶向代谢组学方法对不同处理组的细胞样品进行能量代谢相关代谢物检测,再运用能量数据库对检测到的代谢物变量进行化合物种类鉴别,使用最小判别二乘分析法（partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA）筛选差异代谢物。通过对转化细胞的药物试验发现,相对于对照组,试验组在24 h内细胞增殖无明显变化,从36 h开始试验组的细胞生长速度明显低于对照组,在72 h时两组间的活细胞数量相差最大。PLS-DA分析发现,代谢物变量可将药物处理组及DMSO对照组之间聚类区分,并筛选到21种组间差异的代谢物,药物处理组中有8个代谢物上调,13个代谢物下调。经富集分析发现这些代谢物主要是与能量代谢相关的代谢物,如谷氨酰胺、L-乳酸、苹果酸、丙酮酸、异柠檬酸等。同时用相应的试剂盒检测后发现,谷氨酰胺、L-乳酸及丙酮酸的含量在药物处理组和对照组的变化趋势与靶向代谢组学检测的结果一致。本试验通过靶向代谢组学分析环形泰勒虫感染细胞的差异代谢物和代谢途径,说明环形泰勒虫感染可显著影响感染细胞的能量代谢,为进步阐明环形泰勒虫转化细胞的机制提供思路。     

基于液质平台代谢组学生物样本的采集和制备

代谢组学是利用高通量检测技术对内源性代谢物进行定性和定量分析,从而挖掘代谢物与相应生物学变化的相对关系。目前,代谢组学在药物研发、疾病研究、药物毒理学等领域发挥着越来越大的作用。液相-质谱联用平台,检测的相对分子质量范围大、分辨能力强、扫描速度快,拥有很高的灵敏度和较宽的动态范围,其在代谢组学中的应用得到越来越多研究者的认可。生物样品的采集和制备是代谢组学试验中至关重要的步骤,直接决定着试验结果的可靠性。由于样本自身的复杂性以及对样本采集和制备过程中细节的忽视,往往导致试验结果出现偏差,甚至导致错误的结论。因此充分验证样本的采集和处理方法在试验中尤为重要。本文主要综述了基于质谱平台的代谢组学常用生物样本的采集和制备方法,为代谢组学试验提供相关参考。     

基于GC/TOF-MS技术对流感感染小鼠粪便代谢组学的研究

为了探讨小鼠感染流感病毒后粪便代谢物的变化情况,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,本研究运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC/TOF-MS)检测对照组和病毒组小鼠的粪便。结果显示:在正交偏最小二乘法分析(OPLS)模型中,对照组与病毒组的得分图呈现明显差异,病毒组中一些代谢物发生了显著性的改变。α-酮戊二酸、甲硫氨酸、果糖-6-磷酸、苯丙氨酸、草酸、乳糖、棕榈酸、正缬氨酸、腺嘌呤、胆固醇、葡萄糖-6-磷酸、油酸、甘油、十五烷酸、β-丙氨酸等代谢物显著降低,而L-苹果酸、天冬氨酸、乳酸等代谢物显著上升。结论:病毒组与对照组之间存在脂类代谢、氨基酸代谢及糖代谢的差异,代谢组学的研究可以为流感病毒引起的肠道损伤机制提供新的依据。