中药治疗梅花鹿产气荚膜梭菌感染

临床上,A型和C型产气荚膜梭菌感染报道较多,而本地梅花鹿肠毒血症是由 D 型产气荚膜梭菌引起,报道如下. 1 临床症状 患病梅花鹿身体比较健壮,最早死亡的无任何临床症状.病程稍长的病鹿精神沉郁,伏卧不起,食欲减少,鼻镜干燥,反刍停止;而后出现口、鼻流出泡沫状液体,有些病鹿口流大量黄色水样物;腹部膨大,腹痛不安,3～4 d内排水样稀粪,粪便带血或带有黄白色黏液.     

C型产气荚膜梭菌外毒素致小鼠肠道损伤的转录组分析

旨在探索产气荚膜梭菌外毒素造成机体炎性损伤及免疫调控紊乱的毒性机制,为产气荚膜梭菌病的致病机理研究提供理论基础。将C型产气荚膜梭菌强毒株C59-2培养上清腹腔注射BALB/c小鼠,采集小肠样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,并对其进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果显示,共获得40.99 Gb有效碱基,筛选后共得到795个差异表达基因,其中,229个基因表达上调,566个基因表达下调,对随机选取的10个基因进行q-PCR验证,其相对表达量与转录表达谱一致。GO功能注释主要涉及G蛋白偶联核苷酸受体活性和G蛋白偶联嘌呤核苷酸受体活性等。KEGG通路富集分析发现,主要富集在TNF信号通路、IL-17信号通路、p53信号通路、FOXO信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路等。产气荚膜梭菌外泌毒素侵入机体,会激活TNF等炎性信号通路,进而造成肠道发生炎性损伤甚至坏死。     

黄牛产气荚膜梭菌病的检验和处理

我区黄牛近年来多发生一种以急性死亡为特征的传染病,俗称黄牛"猝死症".经多方诊断认定,确诊为产气荚膜梭菌引起的肠毒血症.本病致死率极高,且治疗无特效方法,作为主要传染源的病畜尸体如处理不当,可形成大量的强大抵抗力的芽胞体,污染环境,形成长期疫源地,现谈谈有关本病的检验以及处理原则.     

A型产气荚膜梭菌感染鸭回肠代谢组学分析

旨在应用非靶向代谢组学技术探究A型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens type A, CpA)感染鸭回肠差异代谢物变化特征。试验选取CpA感染37日龄健康雏鸭,采用剖检病理观察和PCR检测确定CpA感染成功后,使用液相色谱-质谱联用(liquid chromatography-mass spectrometry, LC-MS)技术检测对照组和CpA感染组感染66、90、114 h时鸭回肠的代谢组学,筛选并分析潜在的差异代谢物及相关代谢通路,最后选取对照组和CpA感染114 h组差异代谢物验证。结果表明：经剖检病理观察和病原核酸检测确定成功构建了鸭CpA感染模型;PCA图中回肠样本有部分重叠,提示感染组与对照组鸭回肠间可能存在相同的离子化合物;感染鸭66、90和114 h总差异代谢物种类分别有14、16和24种,富集的代谢通路分别有13、14和28条,主要集中在花生四烯酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成、酪氨酸代谢等;同时差异代谢物验证结果显示,感染114 h回肠缬氨酸和丙氨酸含量变化趋势均与非靶向代谢组学检测结果一致。综上所述,CpA感染鸭的致病机制可能...     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断

1988年北京，河北发生一种急性死亡的新仔猪传染病，此后，疾病逐渐蔓延到国内其他地区，发生率与死亡率也日益增高，经对来自8个省市48个猪场179窝猪中死于此病的301头仔猪检查分离病原，获得207个分离菌株，经过鉴定，将其中141株鉴定为产气荚膜梭菌A型，另66株为C型，结合着流行病学情况，临床症状和病理学观察结果，肯定了此种疾病即是由产气荚膜梭菌A型和C型引起的一种仔猪肠毒血症。     

仔猪大肠杆菌和C型产气荚膜梭菌的毒力研究

为了确定不同纤毛抗原的猪大肠杆菌和C型产气荚膜梭菌引起试验动物发病的最小菌(毒)含量,用不同菌数的E.coliC83549(K88)、C83644(K99)和C83710(987P)菌株培养物对出生18～24h的仔猪进行攻毒,用不同毒素含量的C型产气荚膜梭菌毒素分别对出生18～24h的仔猪和家兔进行攻毒。结果表明,引起仔猪发病的大肠杆菌三种菌株的最低含量均为150×108CFU,C型产气荚膜梭菌引起1日龄仔猪和家兔发病的最低毒素含量分别75和80小鼠MLD。     

C型产气荚膜梭菌实验感染仔猪肠道circRNA的表达特征

circRNAs在病原菌感染宿主的肠道疾病发展中具有重要的调控作用。C型产气荚膜梭菌（C.perfringens type C）是引起仔猪腹泻及相关肠道炎症的主要细菌之一,对产业造成了严重的经济损失。然而,目前有关circRNAs如何调控仔猪C型产气荚膜梭菌性腹泻的全面且系统的研究未见报道。本研究通过RNA高通量测序研究分析了C型产气荚膜梭菌感染的7日龄仔猪回肠组织circRNAs的表达谱,筛选差异表达circRNAs,并进行差异表达基因GO和KEGG功能富集分析,利用miRanda等软件预测circRNA的microRNA靶点,构建circRNA-miRNA-mRNA的互作网络,并进行qPCR验证。结果显示,在C型产气荚膜梭菌感染的处理组（TI组）和对照组（CI组）中共鉴定出3 162个circRNAs,其中差异表达circRNAs有694个,上调表达circRNAs有404个,下调表达circRNAs有290个。功能富集分析结果表明,差异表达circRNAs的亲本基因主要富集在细胞周期、TGF-β信号通路、赖氨酸降解、Wnt信号通路、T细胞受体信号通路、MAPK信号通路等,调节仔猪对产气荚膜梭菌感染的抗性反应。此外,本研究构建了与C型产气荚膜梭菌感染致仔猪腹泻相关的circRNA-miRNA-mRNA互作网络,发现8 circRNAs-5 miRNAs-12 mRNAs组成的ceRNA网络与产气荚膜梭菌感染性疾病密切相关。本试验可为深入研究circRNA调控仔猪C型产气荚膜梭菌性腹泻疾病及猪抗腹泻病品系培育提供参考。     

A型产气荚膜梭菌小鼠感染模型的建立

近年来,我国许多牛场暴发产气荚膜梭菌病,同时产气荚膜梭菌病疫苗及其致病机制的研究不断深入.本试验以牛源A型产气荚膜梭菌强毒株C987株为基础,通过灌胃或皮下注射方式接种小鼠,记录其发病和死亡情况,并剖检观察小鼠内脏各器官病变及组织学变化,建立小鼠感染模型.结果表明,灌胃和皮下注射接种方式,A型产气荚膜梭菌对小鼠的半数致死量分别为4.35×109 CFU和8.0×106 CFU.感染小鼠腹部明显膨大,剖检内脏器官均出现明显病变,组织化学染色显示内脏器官大多出现淋巴细胞浸润及不同组织学变化.皮下注射方式在接种细菌数量、试验平行性、小鼠死亡率上均优于灌胃接种方式,因此皮下注射接种方式更适合作为A型产气荚膜梭菌小鼠感染模型的接种途径.本试验为牛A型产气荚膜梭菌疫苗的评价及其致病机制的研究提供了一种合适的动物模型.     

D型产气荚膜梭菌ε毒素研究进展

D型产气荚膜梭菌常引起新生羔羊痢疾和山羊、牛等家畜的肠毒血症,致死性强,对畜牧业造成很大的危害.ε毒素是D型产气荚膜梭菌的主要致死性毒力因子和保护性抗原,从分子生物学的角度对该毒素的研究具有重要实际意义.论文主要对国内外关于D型产气荚膜梭菌ε毒素分子生物学结构与性质,ε毒素引起的家畜肠毒血症以及对其作用靶器官肾脏和脑组织破坏的致病机理进行了介绍,对国内外D型产气荚膜梭菌ε毒素预防措施进行了综述,为研究D型产气荚膜梭菌ε毒素结构与功能的关系以及预防治疗动物肠毒血症提供参考.     

C型产气荚膜梭菌β毒素基因核苷酸序列的测定与分析

为了研究C型产气荚膜梭菌β毒素基因的遗传变异特点,试验采用生物软件设计扩增产气荚膜梭菌β毒素基因的引物,PCR扩增产物纯化后测定核苷酸序列,然后与参考序列进行同源性比对。结果表明:所测菌株与参考菌株核苷酸序列同源性依次为99.5%、99.8%、99.9%,推导的氨基酸序列同源性依次为99.4%、99.4%、99.6%,碱基突变以A-G、C-T之间的转换为主。     

C型产气荚膜梭菌肠毒素基因的克隆与序列分析

研究参照国外发表的产气荚膜梭菌肠毒素全基因序列设计合成1对特异性引物,采用PCR技术对C型产气荚膜梭菌贵州分离株（CP2株）肠毒素基因进行扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体,并转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果：获得的基因序列全长960bp,编码319个氨基酸。同源性分析结果表明贵州分离株CP2株与产气荚膜梭菌参考株肠毒素基因序列的核苷酸同源性为99．4％99．8％,推导氨基酸同源性为99．1％～99．7％。     

鹿产气荚膜梭菌二价灭活疫苗的制备和免疫效力试验

为了研制鹿产气荚膜梭菌A型和C型二价灭活疫苗,对疫苗的免疫效力和免疫持续期以及疫苗保存期进行测定,从而为开发免疫原性较好的无毒副作用的灭活疫苗奠定基础。将产气荚膜梭菌T5-A和J28-C株的培养液按1∶1混和,混合菌液按9∶1加入灭菌铝胶,经浓缩制备3批灭活疫苗0406-1,0406-2,0406-3。安全检验合格后,采用"血清中和试验"检验技术,进行家兔攻毒与血清抗体效价的平行试验,测定疫苗的免疫效力和免疫持续期以及疫苗保存期。结果是疫苗的安全性良好,免疫效力表明疫苗的免疫保护率为100%,抗体效价显示C型抗体效价高于A型,疫苗对C型菌的保护期长达6个月,而对A型菌的保护期为3个月。疫苗保存期的测定表明,疫苗可以保存10个月以上。表明3批疫苗安全性较好,对家兔有较强的免疫保护,为疫苗的下一步鹿田间试验提供了理论依据。     

D型产气荚膜梭菌引起青鹿猝死

对上海动物园 1头猝死的青鹿进行了详细的病原学研究。在死亡动物的肠组织中分离到粗大正直的杆菌 ,有荚膜和芽孢 ,并能使牛乳培养基海绵状发酵 ,可致死小白鼠 ,LD5 0 为 5× 1 0 4CFU。结合肠内容物的毒素中和试验、青鹿的临床症状和病理解剖特征 ,确诊该青鹿的猝死是由于感染了毒力较强的D型产气荚膜梭菌。     

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究Ⅳ.肠毒血症C型疫苗生产用菌种的确定

试验证明用单一菌株C59-2生产C型产气荚膜梭菌肠毒血症干粉灭活疫苗,其效力可以达到<规程>要求,并且简化了生产工艺,降低了生产成本,提高了生产效率.疫苗免疫的兔血清可分别中和原来3个制苗用菌株所产生的外毒素.     

乳糖诱导剂对重组C型产气荚膜梭菌α毒素基因表达的影响

采用限制性核酸内切酶酶切鉴定含α毒素基因的重组质粒,用SDS—PAGE检测不同条件下α毒素基因的表达情况。经酶切鉴定证实重组质粒pXETA02含有α毒素基因且基因序列和阅读框架正确。结果表明,以乳糖诱导α毒素基因表达的优化条件为：培养基pH7．0,培养温度37℃,菌体生长密度D600达到1．0时分批添加0．5g／L乳糖,诱导5h,此时目的蛋白表达量为23％,实现了α毒素基因的高效表达。从而为C型产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌苗的生产工艺研究提供了可靠的试验数据。