氧化应激对家禽卵泡闭锁的影响及机制

氧自由基的过度堆积会引起氧化应激,导致卵泡闭锁,降低卵巢中各阶段卵泡的数量,从而造成繁殖性能衰退。本文首先对家禽卵泡的命运、氧化应激对卵泡闭锁的影响等进行概述,然后对氧化应激引起颗粒细胞和卵母细胞凋亡的途径以及细胞自噬在氧化应激诱导卵泡闭锁中的作用机制等进行综述,并概述了抗氧化剂对卵泡闭锁的影响,以期为通过营养手段缓解氧化应激和进一步调控家禽繁殖和产蛋性能提供理论依据。     

颗粒细胞凋亡影响家禽卵泡闭锁的研究进展

卵巢是家禽的重要繁殖器官,会产生大量卵泡,而卵泡在生长发育的各个阶段中都可能因为不同因素的调控而发生闭锁,最终导致繁殖性能衰退。颗粒细胞对卵泡的生长发育有重要调控作用,其凋亡会诱导卵泡发生闭锁。诱导颗粒细胞发生凋亡的因素较多,包括激素、细胞因子、氧化应激、线粒体及其他体外因素。颗粒细胞凋亡主要由线粒体途径导致,其涉及到半胱天冬酶（Caspase）家族参与,当线粒体裂解时会释放细胞色素C （Cyt-C）,随后形成凋亡小体激活Caspase-3和Caspase-8,最终激活Caspase-9导致颗粒细胞凋亡;当颗粒细胞发生凋亡,家禽体内卵泡丧失生物功能并且卵泡细胞之间的调控失衡,促使卵泡内卵母细胞和膜细胞凋亡,最终导致卵泡发生闭锁;颗粒细胞在存活状态下所分泌的生长因子、性腺类固醇、细胞因子能减少卵母细胞氧化损伤,防止细胞内活性氧（ROS）水平过高导致的线粒体DNA损伤,从而避免线粒体功能障碍而造成的颗粒细胞凋亡。作者从颗粒细胞凋亡及其影响因素、颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁的关系、颗粒细胞凋亡对卵泡闭锁的影响3个方面进行阐述,以期为减少卵泡闭锁、提高家禽繁殖性能提供理论依据。     

家禽衰老进程中加速卵泡闭锁的微环境因素

家禽衰老进程中卵泡发生快速闭锁,这种生物学现象很可能是导致家禽后期产蛋性能下降的重要原因。卵泡微环境影响颗粒细胞与卵母细胞的互作关系,并决定着卵泡的生长与成熟。研究表明,颗粒细胞凋亡的发生是引起卵泡闭锁发生的主要因素。本文综述了近年来衰老进程中颗粒细胞微环境变化及卵泡闭锁信号相关研究,主要包括激素紊乱、氧化应激等因素,同时本文深入讨论氧化应激诱导的线粒体损伤和内质网应激现象,旨在阐释衰老诱导的颗粒细胞微环境变化与卵泡闭锁机制,为产蛋后期蛋禽繁殖性能或产蛋性能的调控提供参考。     

家禽卵泡闭锁研究进展

家禽卵泡闭锁是繁殖过程中重要生理现象,也是一种多因素调控的选择性细胞凋亡过程。研究卵泡的闭锁可以为家禽繁殖性能提高提供理论依据。对家禽的卵泡颗粒细胞凋亡与卵泡闭锁、激素对颗粒细胞凋亡的影响、颗粒细胞凋亡的相关基因、生长因子、细胞因子和mi RNAs等方面进行了综述。     

FOXO3基因过表达对鹅卵泡颗粒细胞凋亡和自噬相关基因mRNA表达水平的影响

本研究首先克隆鹅FOXO3基因编码区(CDS)序列,构建FOXO3基因的真核表达载体,然后将其转染至鹅卵泡颗粒细胞中,利用荧光定量PCR方法检测FOXO3基因对细胞凋亡和自噬相关基因mRNA表达水平的影响。结果显示,本研究成功克隆了鹅FOXO3基因CDS序列,并由此构建了真核表达载体pcDNA3.1-FOXO3。鹅卵泡颗粒细胞FOXO3基因过表达实验发现,过表达组凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase3、Fasl的mRNA表达水平较对照组均升高(P<0.05),而自噬相关基因LC3和Beclin1的mRNA表达水平较对照组均降低(P<0.05)。本研究结果表明,FOXO3基因可能影响鹅卵泡颗粒细胞中凋亡及自噬相关基因的表达,进而调控颗粒细胞的凋亡和自噬。     

辽宁绒山羊卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡特点的研究

本试验采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究。结果表明，辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的。DNA梯状电泳表明，不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同；而颗粒细胞TUNEL原位标记表明，健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23％、32.13%±2.13％、51.31%±3.02％；不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同，健康卵泡中E2水平较高，孕酮浓度较低；闭锁卵泡中E2浓度较低，P4浓度较高，健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.0003、0.028±0.0004。     

miRNA调节卵泡颗粒细胞凋亡及其机制的研究进展

微小核糖核酸(microRNA,miRNA)是一类内源性非编码RNA,具有广泛的基因表达调控作用,可以在转录后水平通过影响靶基因来调控相应蛋白质的表达,进而调节细胞的生命活动。miRNA在哺乳动物卵泡颗粒细胞中表达,并调控颗粒细胞的凋亡。颗粒细胞作为卵巢卵泡中数量最多的细胞群,在卵泡发育过程中起着至关重要的作用,不仅为卵母细胞提供营养物质,还调控其发育和成熟。颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因,影响卵泡的数量和质量从而影响雌性动物的繁殖性能。颗粒细胞凋亡过程受多种因素的调控。文章简述了miRNA对卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用及其机制,其中包括miRNA通过调控激素分泌和细胞凋亡相关因子的表达进而调节颗粒细胞的凋亡,miRNA对颗粒细胞凋亡相关信号通路的影响,miRNA调控颗粒细胞凋亡导致的卵巢相关疾病,并总结了对颗粒细胞凋亡有调控作用的miRNA,以及miRNA在疾病诊断和治疗中的潜在作用,以期为后续相关卵巢疾病的发病机制和治疗方案研究,以及提高雌性哺乳动物生殖性能提供指导和参考。     

生殖激素控制卵泡细胞凋亡的研究进展

研究表明颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的重要原因，而颗粒细胞凋亡涉及许多因素，其中生殖激素，如GnRH、FSH、LH、P4、E、A、GH、Mel、inhibin、activin、follistatin等间接地和直接地对卵巢卵泡细胞凋亡发挥重要的综合控制作用，因此正确理解激素对体内、外卵泡及颗粒细胞发育和衰亡的调节网络具有很重要的理论和实践意义。     

牛卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡基因表达研究

颗粒细胞凋亡与卵泡闭锁是颗粒细胞功能基因及凋亡相关基因的表达结果,通过手术法获取三种不同直径的牛卵泡(小型卵泡2 mm;中型卵泡2~6 mm;大型卵泡6mm),分离卵泡颗粒细胞并提取总RNA,以研究不同直径卵泡中颗粒细胞相关基因的表达。结果表明,牛卵巢上小型卵泡颗粒细胞中Fshr的表达显著低于中型和大型卵泡(P0.05),而中型和大型两者之间差异不显著(P0.05);中型卵泡和小型卵泡颗粒细胞中CYP19的相对表达显著低于大型卵泡(P0.05);中型卵泡和小型卵泡颗粒细胞中促细胞凋亡基因BAX的表达显著低于大型卵泡(P0.05),而在中型和大型卵泡颗粒细胞中抑制细胞凋亡基因BCL2的表达显著低于小型卵泡(P0.05),且随着卵泡的增大而下调;Casapase 8与Caspase3的表达模式相同,其表达量均随着卵泡直径的增加显著上升(P0.05)。随着卵泡生长与直径增加,卵泡内部分颗粒细胞虽然在继续增殖,部分颗粒细胞已经开始凋亡,卵泡逐渐进入闭锁阶段。     

猪卵巢颗粒细胞和黄体细胞凋亡的调控机制研究进展

母猪卵巢皮质上存在大量卵泡，卵泡由原始卵泡向初级卵泡、次级卵泡逐步发育为排卵前的成熟卵泡时，伴随着卵泡闭锁的发生。目前认为颗粒细胞凋亡是导致卵泡闭锁的主要因素，并且已经证实。卵泡成熟后会破裂排卵，如果卵子未受精，则黄体会发生萎缩并退化，形成称作白体的结缔组织，最终被组织吸收。细胞凋亡受到多基因严格控制，随着分子生物学技术的发展，已经证明存在多个信号通路。本文以猪卵巢为模型，综述了卵泡闭锁期间颗粒细胞凋亡和黄体退化过程中黄体细胞凋亡的调控机制，以期为深入研究卵巢细胞凋亡提供理论基础。     

鹅等级前卵泡中FOXO3及细胞凋亡和自噬相关基因mRNA的表达分析

为探明不同产蛋阶段鹅等级前卵泡中FOXO3基因与凋亡和自噬相关基因的mRNA表达情况,采用荧光定量PCR方法检测开产前、产蛋初期和产蛋高峰期鹅等级前卵泡中FOXO3基因及Bcl-2、Bax、Caspase3、Fas、Fasl、LC3、Beclin1等凋亡和自噬相关基因mRNA的表达情况。结果显示:凋亡和自噬相关基因在鹅产蛋周期不同阶段等级前卵泡中均有表达;产蛋高峰期FOXO3、Bcl2、Bax、Caspase3、Fas和Fasl的mRNA表达量随卵泡直径变大呈增加趋势,LC3和Beclin1的表达量随卵泡直径变大呈减少趋势;产蛋初期各基因的表达变化不一致。由此可见,鹅等级前卵泡中FOXO3基因的表达随着卵泡的发育而增加,且其表达变化趋势与凋亡相关基因基本一致,但与自噬相关基因的变化趋势相反,推测FOXO3基因可能与鹅卵泡颗粒细胞的凋亡和自噬有一定关联。     

辽宁绒山羊卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的研究

采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究.结果表明,辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的.DNA梯状电泳表明,不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同;而颗粒细胞TUNEL原位标记表明,健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23%、32.13%±2.13%、51.31%±3.02%;不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同,健康卵泡中E2水平较高,孕酮浓度较低;闭锁卵泡中E2浓度较低,P4浓度较高,健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.000 3、0.028±0.000 4.     

生殖激素调节颗粒细胞凋亡的机制研究进展

研究表明颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的重要原因,调控颗粒细胞凋亡的因素是多种的,而生殖激素如生长激素、抑制素、活化素、卵泡抑素等间接地和直接地对卵巢卵泡颗粒细胞凋亡发挥重要的综合调控作用,这些激素通过多种信号转导途径调节颗粒细胞的凋亡,成为卵泡的存活因子和死亡因子.这些途径相互交联,构成信号网络,与卵巢的旁分泌、内分泌、自分泌途径一起参与卵泡闭锁和颗粒细胞的凋亡.     

水牛有腔卵泡颗粒细胞凋亡的生物形态学特征

为了解水牛有腔卵泡闭锁的起因和有腔卵泡中是否存在卵泡颗粒细胞凋亡，本研究选择青春期前水牛和成年（发情间期和发情期）水牛的卵巢，采用石蜡组织切片、HE染色技术进行光镜观察，并采用DNA原位末端标记（TUNEL）技术和透射电镜观察研究了卵泡颗粒细胞凋亡的特征。结果表明：青春期前水牛的健康有腔卵泡上无或仅有极个别凋亡的卵泡颗粒细胞（GCs），而闭锁有腔卵泡上存在有多量凋亡的GCs，凋亡的形式：GCs层内出现单个或多个凋亡细胞，卵泡腔内出现凋亡小体群。在成年水牛发情间期的闭锁大卵泡上，GCs层弯曲皱折，存在多量凋亡的GCs。发情期水牛成熟卵泡的GCs层也存在GCs凋亡，排卵前的GCs层细胞全部脱落到卵泡腔内。本研究首次在同一组织切片上先后分别应用HE染色和TUNEL检查细胞凋亡，且证实了水牛有腔卵泡GCs凋亡的存在。超微结构显示了GCs凋亡的核边集化、核浓缩及凋亡小体的形态。上述结果提示：在水牛闭锁有腔卵泡中存在着GCs凋亡，GCs凋亡是启动水牛有腔卵泡闭锁的潜在机理。     

天然抗氧化剂对动物颗粒细胞保护作用的研究进展

颗粒细胞对动物卵泡正常发育至关重要，颗粒细胞凋亡将导致卵泡闭锁进而降低动物繁殖性能。一般情况下细胞以平衡方式产生并消耗活性氧(ROS),但多种因素导致的ROS过量堆积被认为是诱发细胞凋亡的主要原因之一。天然抗氧化剂具有活性强、毒性低及无残留等多种优点，对自由基具有较强的清除能力，能够有效降低ROS对细胞造成的氧化应激(OS)。已有研究证实，原花青素、梓醇、茶黄素、金雀异黄素、槲皮素、萝卜硫素、花青素、虾青素和金丝桃苷等天然物质具有良好的抗氧化及抗凋亡潜力，本文就其作用通路、研究进展及当前问题进行综述，以期为深入研究卵巢功能不全及卵泡闭锁预防技术提供参考。     

淫羊藿苷在猪卵泡体外培养过程中对颗粒细胞凋亡的抑制作用

本试验旨在研究淫羊藿苷(ICA)对猪卵泡体外培养过程中颗粒细胞凋亡的影响。设置不同浓度ICA(0、01、1、10μg/mL)添加组,体外培养猪3~5 mm健康有腔卵泡12 h和24 h后,分别收集各组卵泡颗粒细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR检测凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA相对表达水平。结果表明,猪卵泡体外培养12 h和24 h,添加1μg/mL ICA组颗粒细胞凋亡率较对照组显著降低(P005),1μg/mL组的Caspase-3、Bax mRNA表达量最低,Bcl-2 mRNA表达量最高,且显著高于对照组(P005)。研究结果提示,ICA在卵泡闭锁过程中可明显抑制颗粒细胞凋亡,这一作用可能主要是通过抑制线粒体凋亡途径而实现的。     

鹅卵泡颗粒细胞凋亡及其与生殖激素间的关系

采用正处于产蛋期的扬州鹅10只，取其卵泡分离颗粒层细胞，用70％乙醇固定后，应用流式细胞术分析颗粒细胞凋亡情况。同时，用连续采血的方法，每3h采血一次，分离血浆，用放射免疫分析法测定血浆促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）、雌激素（Ez）水平，用以分析激素水平与凋亡间的关系。结果表明：（1）无论是健康卵泡还是闭锁卵泡，颗粒细胞90％以上均处于G1期，2％～6％处于G2期，S期比例最小；（2）闭锁卵泡颗粒细胞凋亡率极显著高于健康卵泡（P〈0．01）；（3）随着健康卵泡直径的增加，颗粒细胞的凋亡呈降低趋势；（4）健康组鹅的FSH、E2水平要高于闭锁组，而LH水平要低于闭锁组。     

细胞自噬对动物卵泡发育调控的研究进展

卵泡是雌性哺乳动物发挥其繁殖能力的基础,其发育是一个动态的过程,主要涉及原始卵泡的形成、卵泡的募集、优势卵泡的选择、成熟卵泡的排卵以及排卵后卵泡的黄体化。卵泡发育的整个过程受内分泌系统、细胞自噬、细胞凋亡等的调控。自噬是一种进化上保守的应激反应过程,通过将细胞内物质包裹形成自噬体并传递到溶酶体中进行降解,以帮助细胞维持胞内物质代谢平衡,其在卵泡发育的过程中发挥着重要作用,一方面它能够通过降解或回收受损的蛋白质或有害代谢产物缓解应激造成的卵泡损伤,另一方面它又通过产生大量自噬体导致细胞器过度降解而引起卵泡闭锁。自噬对卵泡发育的调控需要PI3K-Akt-mTOR、MAPK-ULK1、ERK1/2、Sirt1-FOXO1-Atg7等多种经典信号通路的参与,这些信号通路在激素、氧化应激、细胞饥饿等的刺激下,通过独立作用或相互作用促进或抑制自噬调控卵泡细胞的生理活动。目前已知不同的自噬水平对卵泡细胞的存活具有不同作用,但关于决定细胞能否存活的自噬水平的研究还比较少。此外,自噬对卵泡发育调控的研究主要集中在颗粒细胞中,而对卵母细胞的成熟和卵泡膜细胞的作用的报道较少。文章简述了自噬在卵巢储备的形成、...     

八眉猪卵泡闭锁过程的观察

为了研究八眉猪卵泡闭锁过程中卵泡颗粒细胞的凋亡情况、卵泡组织结构变化以及卵泡膜内层毛细血管变化特点,试验在体视显微镜下观察并将卵泡分为健康卵泡、早期闭锁卵泡和晚期闭锁卵泡,用Hoechst 33258对闭锁不同时期卵泡颗粒细胞凋亡情况进行检测。采用苏木精-伊红(H.E.)染色法对卵泡膜层组织结构进行观察,CD34免疫组化染色对卵泡膜上毛细血管的分布进行观察。结果表明:随着卵泡闭锁程度的加深,卵泡颗粒细胞逐渐脱落进入卵泡腔,颗粒细胞凋亡增多,分布在卵泡膜内层的毛细血管随着卵泡闭锁程度的加深逐渐消失。说明卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡膜上微血管消失是八眉猪卵泡闭锁的重要特征。     

家禽卵泡颗粒细胞体外培养方法研究进展

家禽卵巢中颗粒细胞在卵泡发育和闭锁中起着重要作用,包括信号传递、营养供给以及离子平衡等。卵泡颗粒细胞的增殖与分化自身也受到生殖激素和细胞因子的综合调节,其作用机制是当前研究热点。家禽卵泡颗粒细胞的体外培养可作为研究繁殖生理调节的理想细胞模型。本文对家禽卵泡颗粒细胞的体外培养研究现状及颗粒细胞在卵泡生长发育和闭锁中的作用进行简要概述,并总结了原代颗粒细胞体外培养模型的建立方法。