谷氨酰胺及其二肽对过氧化氢诱导山羊瘤胃上皮细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

本试验通过建立过氧化氢(H2O2)诱导山羊瘤胃上皮传代细胞凋亡模型,研究谷氨酰胺(Gln)、甘氨酰谷氨酰胺(Gly-Gln)和丙氨酰谷氨酰胺(Ala-Gln)对凋亡细胞的凋亡率及Bcl-2、Bax基因表达量的影响。选用60日龄湘东黑山羊的瘤胃上皮传代细胞,采用不同浓度[0(对照组)、100、400、800μmol/L]的H2O2培养细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况。传代瘤胃上皮细胞分为5组,对照组和1组分别添加0、800μmol/L H2O2,2组、3组、4组均添加800μmol/L H2O2,同时分别添加17.28 mmol/L Gly-Gln(2组)、16.0 mmol/L Gln(3组)、16.0 mmol/L AlaGln(4组),应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测细胞Bcl-2、Bax基因表达量。结果显示:1)与对照组相比,当H2O2浓度增加到800μmol/L时,早期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),而晚期凋亡的凋亡率随着H2O2浓度的增加呈现增加后减少的趋势,但相对于对照组,都呈显著增加(P0.05)。2)与对照组相比,4组晚期凋亡的凋亡率显著增加(P0.05),试验组早期凋亡的凋亡率均显著增加(P0.05)。3)与对照组相比,试验组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05);与1组相比,2组、3组和4组Bcl-2/Bax均显著增加(P0.05),且2组显著高于3组、4组(P0.05)。综合得出,Gly-Gln对H2O2引起山羊瘤胃上皮细胞早期凋亡具有一定的保护作用。     

γ-氨基丁酸对离体培养牦牛黄体细胞凋亡的影响

用离体培养方法观察了γ-氨基丁酸(GABA)对牦牛黄体细胞凋亡及羟自由基(OH)生成的影响。结果表明，GABA能促进黄体细胞OH的生成并诱导黄体细胞凋亡。     

前列腺素F2α剂量依赖性对黄体溶解效果评价及其调控基因表达模式分析

本试验旨在探究不同剂量外源性PGF_2α对小鼠黄体(corpus luteum, CL)溶解效果的影响及其剂量依赖性关系。选用60只60日龄、体质量30～34 g雌性昆明小鼠随机分为6组,分别采用腹腔注射1,10,50,100,200μg PGF_2α。通过H.E染色法监测卵巢的形态学变化,ELISA法检测小鼠血清孕酮水平及利用qRT-PCR检测孕酮合成关键酶/细胞凋亡相关基因表达情况。结果显示,与对照组相比,不同剂量PGF_2α处理组中昆明小鼠的CL溶解效果为50μg组>10μg组>100μg组>1μg组>200μg组;CL功能性指征结果显示PGF_2α在50μg剂量范围内,小鼠体内P₄含量会随着PGF_2α处理剂量的增加而呈现递增趋势;而且,P₄合成关键酶基因检测结果显示StAR和3β-HSD表达量在PGF_2α注射剂量为50μg时呈现最低水平;同时,CL结构性指征检测结果发现此时促凋亡因子BAX...     

前列腺素F2α及其类似物氯前列烯醇在家畜繁殖中的应用

前列腺素F     

前列腺素F2α及其类似物对哺乳动物生殖影响的研究进展

前列腺素F_2α(prostaglandin F_2α,PGF_2α)是一种黄体溶解因子,广泛用于母猪的同期发情和分娩启动。近年来还陆续发现PGF_2α的新功能,内源性PGF_2α可作为哺乳动物的妊娠识别信号,与胎体和子宫内膜PGF_2α受体(PGF_2α receptor,FP)结合,启动下游信号通路,对早期胚胎发育、着床、妊娠维持发挥重要作用,缺乏或合成不足会导致妊娠中断或流产。鉴于PGF_2α对母畜繁殖活动的促进作用,兽药中心研发了多种PGF_2α药物,如氯前列醇钠、地诺前列腺素F_2α等,被广泛用来启动分娩和促进发情。根据氯前列醇钠的旋光性,可分为D-型和L-型两种对映体,其中D-型结构是氯前列醇钠的主要活性成分。外源性PGF_2α药物不仅可以诱导母猪同期发情与同步分娩、促进产后健康,提高断奶母猪发情率,还可以改善母猪泌乳力与初乳质量,提高仔猪活力等生产性状。作者综述了近几年国内外PGF_2α的研究进展,包括PGF_2α对周期黄体的双重作用,PGF_2α对早期胚胎的发育、着床、分娩的影响,PGF_2α对母猪泌乳力及仔猪活力等方面的重要作用等,同时也综述了几种PGF_2α及其类似物对母畜繁殖性能等方面的影响,旨在为PGF_2α及其类似物的合理运用提供依据。     

镉对小鼠生精细胞凋亡及bax和bcl-2基因表达的影响

将150只小鼠随机分成4个处理组和1个对照组，每组30只。给4个处理组小鼠分别一次性注射氯化镉1、2、4、6mg／kg（按体重给药），对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后第3、6和9d用原位末端标记法（TUNEL）测定睾丸内生精细胞的凋亡率，并用免疫组织化学方法检测bax和bcl-2基因的表达水平。结果显示，各染毒组小鼠的生精细胞凋亡率明显升高，与对照组相比差异显著（P〈0．05），并具有剂量-反应关系和时间-反应关系。bax基因的表达水平明显上升，而bel-2基因的表达水平明显下降。表明，镉可以诱导小鼠生精细胞凋亡，其机制可能与bax基因上调和bcl-2基因下调有关。     

小麦保护处理对山羊内分泌影响的研究

近年来的研究证明乳汁中酪蛋白在消化道降解过程中能产生酪啡肽(7肽) ,在一些谷物蛋白的酶解过程中也同样能产生这类生物活性多肽。我们的前期工作发现 ,小麦的胃蛋酶水解产物富含阿片肽样活性物质。本文主要研究经保护处理的小麦对反刍家畜采食及内分泌代谢的影响。在4只空怀母山羊进行试验 ,平均体重(24.75±0.73)kg,试验期小麦进行保护预处理 ,精料由88.5 %小麦全粉、10 %磷酸氢钙、0.5 %尿素组成 ,每天喂给400克/头(分2次) ,自由采食青草 ,自由饮水。对照期、试验期各25天。连续取血样结果显示 ,对照期和试验期相关平均值分别为 :采食量(4.656±0.231)、(6.413±0.039)kg/d(P≤0.001) ,血清生长激素总体水平(GH)为(23.170±0.891)ng/ml、(26.792±1.003)ng/ml(P≤0.01);血清胰岛素(18.103±1.035)ng/ml、(23.983±1.600)ng/ml(P≤0.01) ,血清氨基氮(0.102±0.003)mM/ml、(0.140±0.004)mM/ml,血清氨氮(0.206±0.012)mM/ml、(0.086±0.006)mM/ml(P≤0.01)。结果表明 ,小麦经保护处理后能够显著促进采食量并提高内分泌水平。这对于提高饲料利用率、促进生长具有重要意义。     

不同培养基对小鼠黄体细胞体外培养效果的影响

对未性成熟的雌性小鼠注射孕马血清促性腺激素和人绒毛膜促性腺激素,在适当的时间摘取小鼠卵巢进行卵巢黄体细胞的体外培养,培养用液为含10%血清的DMEM和含10%血清的RPMI 1640。结果发现,用前者培养的细胞在形态、规则程度和数量上都优于后者,为小鼠黄体细胞体外培养液的选择和进一步研究提供了参考。     

饲料中维生素D3添加水平对黄鳝外周免疫相关组织细胞增殖和凋亡的影响

本试验旨在探索维生素D3添加水平对黄鳝(Monopterus albus)外周免疫相关组织细胞增殖和凋亡的影响。挑选体质健康、平均体重为(21.7±2.1)g的黄鳝360尾,随机分为6组,每组2个重复,每个重复30尾。6组黄鳝分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、250、500、1 000、2 000和4 000 IU/kg维生素D3的试验饲料。试验期60 d。饲养试验结束后,从各组随机选择6尾黄鳝,分别采集其肝胰脏、脾脏、头肾和后肠组织,采用流式细胞术检测样品细胞的增殖和凋亡情况。结果表明:饲料中维生素D3添加水平对脾脏、后肠和头肾3种组织细胞增殖和凋亡的影响变化趋势基本一致,即1 000 IU/kg组细胞增殖指数(PI)最高,凋亡指数(AI)最低,与对照组和4 000 IU/kg组差异显著(P<0.05)。肝胰脏细胞PI随饲料中维生素D3添加水平的增加而降低,以4 000 IU/kg组最低,显著低于对照组(P<0.05);肝胰脏细胞AI以1 000 IU/kg组最低,显著低于对照组和4 000 IU/kg组(P<0.05)。由此得出,饲料中添加1 000 IU/kg维生素D3可降低黄鳝外周免疫相关组织细胞凋亡,促进脾脏、头肾和后肠细胞增殖,有利于外周淋巴器官生长;饲料中添加4 000 IU/kg维生素D3可致黄鳝外周免疫相关组织细胞增殖受阻,细胞凋亡加快,引起机体免疫功能抑制。     

黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因表达的影响

为探讨黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡的影响,本试验通过向大鼠睾丸间质细胞的体外培养体系中添加终浓度为20μg/m L的黄芪提取液,利用荧光定量PCR技术研究黄芪对大鼠睾丸间质细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达量的影响。结果:添加终浓度为20μg/m L黄芪提取液的实验组与不添加黄芪提取液的对照组相比,间质细胞内Bax基因表达量显著降低(P0.01),Bcl-2基因表达量无显著差异,Bax/Bcl-2比值显著下降(P0.05)。结论:黄芪在一定程度上能够通过抑制凋亡基因Bax的转录,抑制大鼠睾丸间质细胞凋亡。     

孕酮和雌二醇对催产素诱发山羊前列腺素F2α分泌的影响

将１２只摘除卵巢后６～７周的山羊随机分为４组，按２×２因子实验设计进行处理。实验因子为：（１）肌肉注射孕酮（Ｐ４）：第１～５ｄ每天１０ｍｇ；第６～１２ｄ每天２０ｍｇ。（２）肌肉注射雌二醇（Ｅ２）：第１３ｄ２０μｇ第１４ｄ４０μｇ。对照处理则注射相应体积的玉米油。在第１５ｄ上午，给实验羊安置后腔静脉导管。经颈静脉给每只山羊注射１０Ｕ催产素（ＯＴ）。在注射ＯＴ前后经导管采１２份血样：─３０，─１０，─５，０，２，５，１０，１５，２０，３０，４５和６０ｍｉｎ时采样。用ＲＩＡ方法测定每份血样中的前列腺素Ｆ２α（ＰＧＦ２α）水平。在注射ＯＴ之前和注射后的４５和６０ｍｉｎ，血浆ＰＧＦ２α处于基础水平，各组间的差异不显著（Ｐ＞０．０５）。在注射ＯＴ后的２～３０ｍｉｎ，Ｐ４＋Ｅ２组的ＰＧＦ２α水平极显著地高于其他３组（Ｐ＜０．０１），其他３组之间的ＰＧＦ２α水平差异不显著（Ｐ＞０．０５）。Ｅ２组在注射ＯＴ之后也有明显的ＰＧＦ２α分泌活动。结果表明，山羊经用Ｅ２或用Ｐ４和Ｅ２先后处理后，ＯＴ可以引起子宫分泌ＰＧＦ２α。     

绵羊miR-127/FOXO4反馈环路及其对卵泡颗粒细胞凋亡相关基因表达的影响

旨在研究oar-miR-127/FOXO4反馈环路及其对绵羊卵泡颗粒细胞的作用。本研究利用Promoter 2.0预测绵羊miR-127启动子,利用JASPAR数据库预测转录因子FOXO4与oar-miR-127启动子区的结合位点,构建包含预测结合位点的pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体;利用TargetScan软件在线预测oar-miR-127与FOXO4基因3'-UTR区结合位点,构建包含预测结合位点的pmir-GLO-FOXO4野生型、突变型和缺失型荧光素酶报告基因重组质粒;将pGL3-basic-miR-127荧光素酶报告载体和pcDNA-FOXO4过表达载体共（或单独）转染体外培养的绵羊卵泡颗粒细胞,FOXO4突变型、野生型和缺失型重组质粒与miR-127 mimic/mimic NC共转染体外培养的293T细胞,48 h后检测荧光素酶活性;pcDNA-FOXO4过表达载体（miR-127 mimic/mimic NC）转染绵羊卵泡颗粒细胞48 h,利用qRT-PCR检测miR-127（FOXO4）及凋亡基因（Casp3、Bax及BCL2）的表达水平。过表达转录因子FOXO4显著降低了oar-miR-127启动子相对荧光素酶活性（P<0.05）和oar-miR-127表达水平（P<0.05）;miR-127 mimic和FOXO4野生型重组质粒共转染的颗粒细胞荧光素酶活性显著低于共转染miR-127 mimic和FOXO4缺失/突变型重组质粒的细胞（P<0.05）。转染miR-127 mimic的颗粒细胞中FOXO4表达量显著降低（P<0.05）,Casp3和Bax基因表达水平极显著升高（P<0.001）;过表达转录因子FOXO4的颗粒细胞中Casp3和Bax的表达水平无显著变化（P>0.05）,但BCL2相对表达量显著降低（P<0.05）。本研究证实了oar-miR-127与靶基因FOXO4间存在反馈环路,并促进绵羊卵泡颗粒细胞的凋亡,为研究其在绵羊卵泡发育中的作用机制奠定了基础。     

鸡Bcl-2基因的克隆及其对卵泡颗粒细胞凋亡的影响

将鸡的 Bcl- 2基因克隆到真核表达载体 JL V中 ,构建了重组质粒 JL VB。 0 .2μg/孔 JL VB重组质粒经脂质体介导转染卵泡颗粒细胞 ,应用流式细胞术等方法分析了转染 Bcl- 2基因后原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。与对照组相比 ,转染后的传代细胞分裂速度较快 (P<0 .0 1) ,凋亡比率较低 ,G2 / M S期细胞比例极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。这些结果表明 ,Bcl- 2基因具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用 ,这种作用是直接的。在转染时间为 12 h、DNA量为 0 .3μg/孔的条件下 ,较好的脂质体介导用量为 1.2 μL/孔。     

BIRC5对山羊睾丸细胞周期、凋亡的影响

旨在在克隆山羊BIRC5基因的基础上,通过过表达或者敲低BIRC5基因表达揭示BIRC5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用,为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础。本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板,利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC5基因CDS区序列,并进行生物信息学分析。将克隆回收产物连接真核表达载体,从而构建pcDNA3.1(+)-BIRC5。根据山羊BIRC5基因序列设计并筛选有效siRNA。将pcDNA3.1(+)-BIRC5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后,利用Western blot检测BIRC5蛋白表达,利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase7、Bcl-2、p53、BCL2L11和PARP1的表达。结果,成功扩增山羊BIRC5基因序列,长度为506 bp,包含5′UTR 28 bp, CDS区429 bp, 3′UTR 49 bp,编码142个氨基酸残基,且与牛亲缘关系最近。过表达BIRC5基因后抑制了细胞凋亡,且细胞被阻滞于G2/M+S期;同时可下调Ca...     

PCV3对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响

【目的】研究猪圆环病毒3(Porcine circovirus 3,PCV3)对仔猪生长相关激素及其功能基因表达的影响,探索PCV3导致仔猪消瘦的机制。【方法】以8头23日龄的健康断奶仔猪为研究对象,随机均分为PCV3感染组(感染组)、DMEM组,分别从颈部注射3 mL PCV3病毒液(10⁹拷贝/mL)和3 mL DMEM,并于注射前(0 d)及注射后3、7、14、21 d称量仔猪体重,观察其临床表现,采集各组仔猪血清、口腔拭子、鼻腔拭子和肛拭子,采用实时荧光定量PCR检测各样品中PCV3病毒载量;ELISA法测定各组3、7、14、21 d仔猪血清中的三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine, T₃)、甲状腺素4(thyroxine, T₄)的浓度;实时荧光定量PCR测定背最长肌、腿肌、脾脏、肝脏组织中生长激素受体(growth hormone receptor, GHR)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)、胰岛素样生长因子1受体(insulin-li...     

饲粮中添加牛磺酸对慢性热应激肉鸡血清内分泌激素水平、下丘脑形态及食欲相关基因表达的影响

试验旨在探索慢性热应激条件下,日粮中添加牛磺酸对肉鸡血清内分泌激素水平、下丘脑形态及采食相关基因表达的影响。选取144羽平均体重为(1.10±0.02)kg的4周龄健康爱拔益加(AA)肉鸡,随机分为3个处理,每个处理组6个重复,每个重复8只鸡。对照组(normal control, NC,饲养温度22℃)和热应激组(heat stress, HS,饲养温度32℃)均饲喂基础配合日粮;热应激+牛磺酸处理组(heat stress+taurine, HT,饲养温度32℃)在基础日粮中添加0.5%的牛磺酸,试验期2周。结果表明：日粮中添加牛磺酸降低了肉鸡血清中瘦素水平,增加了三碘甲状腺原氨酸(T3)水平。对热应激导致的促食欲基因刺鼠相关蛋白(AgRP)下调无显著缓解作用,但其下调了阿黑皮素原(POMC)和瘦素受体(LEPR)的mRNA表达水平,从而减弱热应激下饱感激素分泌导致的食欲下降。研究结果为牛磺酸作为动物营养调控添加剂提供一定的理论依据。     

雌激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素E2和F2α合成酶mRNA表达的影响

为了揭示雌激素(estrogen,E₂)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E₂合成酶(PGES)和前列腺素F_2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E₂对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4、8、16、24和48 h)和不同浓度(10^-12、10^-11、10^-10、10^-9 mol/L)添加雌激素E₂(以不加雌激素作空白对照),采用荧光定量PCR 技术检测PGES和PGFS mRNA表达。不同浓度的E₂或同一浓度不同刺激时间的E₂均能增加PGES的表达,但4 h浓度为10^-10 mol/L时与空白对照相比差异极显著(P<0.01),而PGFS在24 h添加浓度为10^-12 mol/L E₂时与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。试验结果表明,E₂对培养的奶牛输卵管上皮细胞PGES和PGFS mRNA的表达有促进作用,说明雌激素E₂对前列腺素酶PGES和PGFS mRNA的表达具有调控作用。     

鸡Bcl—2基因的克隆及其对卵泡闰细胞凋亡的影响

将鸡的Bcl-2基因克隆到真核表达载体JLV，构建了重组质粒JLVB。0．2μg／孔JLVB重组质粒经脂质体介导转染卵泡颗粒细胞，应用流式细胞术等方法分析了转染Bcl-2基因后原代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。与对照组相比，转染后的传代细胞分裂速度较快（P＜0．01），凋亡比率较低，G2／M＋S期细胞比例极显著高于对照组（P＜0．01）。这些结果表明，Bcl-2基因具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用，这种作用是直接的。在转染时间为12h、DNA量为0．3μg/孔的条件下，较好的脂质体介导用量的1．2μL／孔。     

前列腺素D2与F2α对绵羊黄体退化的影响及其机理研究

旨在研究前列腺素（prostaglandins,PGs）D₂与F_2α对绵羊黄体（corpus luteum,CL）组织形态、生殖激素及其关键基因与受体表达的影响,并解析其在黄体退化中的相互关系及机理,为保证母畜连续性繁育提供新的理论依据。将16只哈萨克绵羊随机分成4组,在发情周期的黄体期分别子宫肌内注射PGD₂、PGF_2α、PGD₂+PGF_2α及等量生理盐水（对照组）,采用HE染色结合物理拍照对比处理前后黄体组织形态变化,ELISA法检测外周血清中P₄、E₂、PGD₂和PGF_2α浓度变化;并利用qRT-PCR和Western blot检测关键合成酶基因HPGDS、PGFS及其受体DP1、CRTH2、FP的mRNA和蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,发现PGD₂+PGF_2α组中黄体退化效果最明显,随后依次是PGF_2α组明显大于PGD₂组。ELISA结果显示,随着处理后时间的推移,不同试验处理组中,P₄浓度均呈显著下降趋势（P<0.05）,其中在PGD₂+PGF_2α组中该变化趋势最显著（P<0.05）;但E₂、PGD₂和PGF_2α浓度均呈现不同差异性变化,其中,PGD₂+PGF_2α组中PGD₂和PGF_2α浓度呈显著下降（P<0.05）,PGF_2α组中E₂浓度呈显著升高（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著下降（P<0.05）,PGD₂组中E₂浓度呈显著下降趋势（P<0.05）、PGD₂浓度呈显著升高趋势（P<0.05）。qRT-PCR和Western blot结果显示,与对照组相比,PGD₂+PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量显著下调（P<0.05）,PGFS、CRTH2及FP mRNA和蛋白表达量显著上调（P<0.05）;PGF_2α组中HPGDS mRNA和蛋白表达量呈显著下调（P<0.05）,其它基因mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）;PGD₂组中HPGDS、DP1、PGFS及FP mRNA和蛋白表达量呈显著上调（P<0.05）。同时,在不同受体基因表达量检测时,发现PGD₂组中DP1受体表达量显著高于CRTH2受体（P<0.05）,而PGF_2α组中CRTH2表达量则显著高于DP1（P<0.05）。综上,PGD₂无论单独使用还是结合PGF_2α使用,均能够促进CL的退化,尤其是二者结合时有明显的协同促溶效应,其作用机制可能与其体内激素水平、关键合成酶及受体类型的表达有关,这为全面认识哺乳动物CL退化的调控机制奠定了基础,也为进一步优化高效繁殖技术（尤其是PGs方案）提供了新的思路。     

维生素D3的免疫功能及其对家禽免疫细胞和免疫因子的调节

维生素D3是一种新的神经内分泌-免疫调节剂,主要表现为对单核/巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、胸腺细胞的增殖分化及细胞功能具有重要影响。维生素D3与T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞分泌抗体、淋巴因子、补体和单核因子等功能紧密相关。但关于维生素D3对家禽免疫细胞、免疫因子调节的研究甚少。本文就维生素D3的免疫功能及其对家禽T淋巴细胞、抗原呈递细胞(APC)和免疫因子调节的研究现状和展望作一综述。