鸡源凝结芽孢杆菌的分离鉴定及耐受性分析

【目的】试验旨在寻找1株性能稳定、环境耐受性强的凝结芽孢杆菌菌株,以在实际生产中发挥其替抗功能。【方法】本研究采集160日龄健康海兰褐蛋鸡的粪便样本,进行细菌分离纯化,并对分离菌进行形态学特征观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析。通过绘制该菌的生长动力曲线确定其生长规律;利用耐酸、耐胆盐试验分析该菌株的耐受性;通过单因素试验对分离菌株的培养条件进行优化。【结果】分离菌在普通培养基上长出表面粗糙、不规则的灰白色菌落,镜检为杆状、芽孢端生的革兰氏阳性菌。结合生化试验及16S rDNA基因序列分析综合鉴定该菌株为凝结芽孢杆菌,命名为NJ001。生长动力曲线表明,7～24 h为该菌株的对数生长期,24 h活菌数达到顶峰,凝结芽孢杆菌NJ001的最佳培养时间为24 h;耐受性试验结果显示,该菌株pH 3.0温育2 h存活率为59.5%,pH为4.0时存活率达到87.6%以上,对酸有较强耐受力;0.3%胆盐处理2 h存活率为54.0%,胆盐浓度升至0.5%时存活率仍有50%以上,该菌对胆盐有较强的耐受性。单因素试验结果发现,该菌的最佳培养温度为40℃,接种量2%,初始pH 7.0,摇床转速...     

牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

【目的】从奶牛瘤胃中分离具有抗氧化能力且耐受性好的芽孢杆菌,为牛源益生菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。【方法】采集3头成年荷斯坦奶牛瘤胃内容物,通过细菌分离纯化、形态观察、生化检测及16S rDNA分子检测进行鉴定,同时检测筛选菌株的超氧自由基和羟自由基清除率、耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的耐药性。【结果】从奶牛瘤胃液中共获得了12株菌,通过特异性培养基与革兰氏染色共筛选出5株芽孢杆菌(X-1～X-5)。对5株芽孢杆菌进行分子鉴定,确定X-1为热噬淀粉芽孢杆菌,X-2为短小芽孢杆菌,X-3为解蛋白芽孢杆菌,X-4为枯草芽孢杆菌,X-5为沙福芽孢杆菌。抗氧化能力检测结果显示,5株菌均具有一定的抗氧化能力,X-5菌株抗氧化能力最高,超氧自由基和羟自由基清除率分别达到73.81%和73.54%。当pH为2.5时,5株芽孢杆菌存活率均在25%以上;胆盐浓度为0.6%时,5株芽孢杆菌存活率均在60%以上,说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示,试验分离出来的大多数菌株对氧氟沙星、呋喃妥因、红霉素等高度敏感;对头孢呋辛、头孢噻肟、链霉素等耐受;对卡那霉素、环丙沙星、氨苄西林等中度敏感。...     

牛瘤胃微生物的分离鉴定与生化特性分析

【目的】通过对瘤胃液中分离所得的菌株进行研究,为益生菌制剂的制备提供基础数据。【方法】采集10头健康荷斯坦奶牛的瘤胃液,通过涂布、特性培养、纯化等步骤获得单一菌株,提取细菌DNA,进行16S rDNA的PCR扩增。通过16S rDNA基因测序鉴定后进行序列比对并构建系统发育树,确定菌株种类。对不同种类的细菌进行0～48 h的培养测定其生长特性,并进行耐酸碱和耐胆盐试验。【结果】通过涂布分离菌株得到20株分离菌,经PCR扩增后测序发现20株菌属于7种不同的菌,大致确定L7为解淀粉芽孢杆菌、K7为枯草芽孢杆菌、S7为嗜麦芽窄食单胞菌、C2为地衣芽孢杆菌、M7为马链球菌、F7为弗氏酸柠檬杆菌、T7为吉氏库特菌。通过生长曲线可以看出,7株菌分别在24～36 h达到最快生长期。M7和K7对酸有较强的耐受性,而S7、C2和F7对酸性较为敏感,C2对碱的耐受性最强,而T7对胆盐的耐受性最强,S7对胆盐最不耐受。【结论】本研究从瘤胃中分离得到的7个菌株对酸碱和胆盐具有不同程度的耐受性,以及最适生长周期。     

5株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌活性研究

【目的】探究5株自筛解淀粉芽孢杆菌(YN-BA1、YN-BA2、YN-BA3、YN-BA4、YN-BA5)的生长曲线、pH和胆盐耐受性、抑菌活性和抗生素敏感性等特性,为将其开发成微生态制剂应用于养殖中提供理论依据。【方法】采用比浊法测定解淀粉芽孢杆菌生长曲线,将5株解淀粉芽孢杆菌分别接种于经盐酸配制成pH为2.0、3.0、4.0和7.0的LB肉汤中培养2 h和0.3%胆盐环境中培养5 h,以评价其在人工胃肠液中的耐受性;采用琼脂打孔法测定体外抑菌活性,采用KB纸片法测定抗生素敏感性。【结果】5株解淀粉芽孢杆菌在经过0～2 h的缓慢生长和6～8 h生长速度降低后,其生长量快速上升,进入对数生长期;36 h后生长量下降,进入衰退期。5株解淀粉芽孢杆菌均具有不同的耐酸、耐胆盐能力,其中YN-BA2菌株在pH 2.0、3.0、4.0存活率分别为42.10%、51.50%和74.67%,均高于另外4株菌;在0.3%胆盐处理5 h后,YN-BA2菌株存活率为51.00%,高于另外4株菌,表明YN-BA2菌株的耐受力最高。5株解淀粉芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌(YN-S1、YN-S2)、鸡白痢沙门菌(YN...     

1株鲤鱼源植物乳杆菌的分离鉴定及其生物学特性分析

【目的】筛选具有优良益生特性的鲤源乳酸菌作为水产养殖用微生态制剂候选菌株。【方法】以鲤鱼肠道内容物及黏膜为菌株的分离来源，采用MRS培养基进行菌株分离纯化，经16S rRNA测序鉴定后，对分离菌株生长特性、产酸能力、耐酸、耐胆盐、抑菌特性、药物敏感性及安全性等生物学特性进行分析。【结果】试验成功分离到1株植物乳杆菌，将其命名为YY001，该分离株在MRS培养基上菌落形态为圆形、表面光滑、边缘整齐、呈乳白色，革兰氏染色为阳性、无芽孢、两端钝圆的短小杆菌；4 h后进入对数期生长，12 h后生长达到稳定期；具有较强的产酸能力，产酸曲线显示，0~12 h pH迅速下降，培养16 h的菌液pH达3.8；在pH 3.0和0.3%胆盐的条件下具有一定耐受性；该分离株对水产常见致病菌柱状黄杆菌、维气氏单胞菌和嗜水气单胞菌均具抑菌效果，且对柱状黄杆菌的抑菌效果最显著，抑菌圈直径达34.19 mm；药物敏感性试验结果显示，分离株对卡那霉素、链霉素和万古霉素耐药；每天一次连续1周灌胃10⁸CFU分离菌株对小鼠无毒害作用。【结论】本研究分离到的菌株YY001具有优良的生物学特性，可作为水产养殖用微生态制剂候选菌株，为后续制备鲤鱼用微生态制剂奠定基础。     

1株牦牛瘤胃源无色杆菌的鉴定及生物学特性评价

【目的】对分离得到的1株牦牛瘤胃源菌株进行鉴定和生物学特性分析,开发新型动物源益生菌。【方法】通过显微镜和菌落观察试验菌株的形态学特征,采用VITEK2微生物生化自动鉴定仪鉴定其生化特性,并对其16S rDNA进行PCR扩增、相似性比对和遗传进化树构建。进一步对其生长性能、产酸能力、自凝聚、疏水性、溶血性和耐药性、耐酸耐胆盐及胃肠环境适应性等生物学特性进行研究。【结果】试验菌株经过形态学、分子鉴定和16S rDNA扩增鉴定为无色杆菌（Achromobacter）,命名为无色杆菌YKS2。该菌株2 h进入对数生长期,持续增长至20 h后开始出现平台期并缓慢下降。发酵48 h后pH未降低,说明该菌株不具产酸性能;自凝聚力为28.7%,表面疏水性在氯仿中达到77.1%,其他溶剂均>60.0%,平均达到60%以上,表明细菌有一定的黏附能力;在血琼脂平板培养48 h后未出现溶血环;通过K-B法测试了对14种抗生素的敏感性,发现其对常见的12种抗生素敏感;在pH 2.0的培养基中不能存活,在pH 4.0的培养基中存活率为61.4%;对0.1%和0.3%胆盐培养基有较高的耐受;在人工胃液重悬后培养3 h的细菌存活率为78.18%,在人工肠液中处理4、8 h后,与对照组相比,菌落数极显著增长（P<0.05）,说明YKS2菌株能够耐受一定程度的人工肠液。【结论】牦牛瘤胃源YKS2菌株为肠杆菌科无色杆菌亚种,无溶血、产酸及耐强酸特性,非耐药菌株,增殖性能较好,具有耐胆盐、耐胃肠液、自凝聚及表面疏水特性,可作为一种候选益生菌菌株进行进一步的评价和研究。     

猪源性芽孢杆菌的筛选与鉴定

为从滇南小耳猪的粪便中分离筛选到有良好益生特性的芽孢杆菌,笔者首先从猪粪样中高温初筛芽孢杆菌,分离纯化后再进行耐酸、耐胆盐、耐高盐、抑制致病菌等实验,利用生理生化特征和16S rDNA的序列分析技术对菌株进行菌种鉴定。从滇南小耳猪粪便中所分离到的1、6、7号菌株为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌,具有耐酸、耐胆盐、耐高盐、抑制有害菌生长等特性,对当地埃希氏大肠杆菌有一定抑制作用。本实验所筛选到的3种芽孢杆菌具有进一步开发为益生菌的可能性,为进一步研究该类细菌的生物学特性等奠定了基础。     

一株地衣芽孢杆菌的体外益生作用研究

本研究对从腊肉中分离得到的13株芽孢杆菌进行筛选，选择对大肠杆菌K88、K99具有最强抑制效果的一株菌，进行下一步的耐酸耐胆盐的试验，结果表明，筛选得到的这株芽孢菌能够很好地耐酸耐胆盐，用16SDNA基因片断的PCR扩增与序列分析，该菌株YB6与地衣芽孢杆菌的同源性为98％。本试验为动物饲用益生菌产品的开发和推广应用打下基础。     

1株马乳酒样乳杆菌的分离鉴定及益生特性研究

【目的】从新疆克州地区传统发酵马奶酒中分离既有抗菌活性又有抗氧化活性的乳酸菌,继而获得能用于微生态制剂开发的优良菌株。【方法】采用MRS固体培养基进行乳酸菌分离培养,筛选优势菌株,观察菌体形态学特征,并通过16S rRNA基因序列分析进行分子鉴定。研究菌株的生长曲线、产酸能力、耐酸能力、耐胆盐能力和抑菌能力,通过检测菌株耐H₂O₂能力及菌株发酵液、无细胞提取物、菌体混悬液的DPPH自由基清除率、超氧阴离子清除能力、羟自由基清除能力等相关指标来评价菌株体外抗氧化功能,并通过药敏试验和小鼠饲喂试验评估菌株的安全性。【结果】试验筛选出1株菌落形态圆形、白色半透明、边缘不整齐的革兰氏阳性菌,将其命名为JK-24,经16S rRNA克隆测序鉴定该菌株为马乳酒样乳杆菌(Lactobacillus kefiranofaciens)。在6～18 h,D_{600 nm}值增长速度较快,进入对数生长期,JK-24发酵液pH下降明显;JK-24在pH 2.5～6.5范围内均能生长,能耐受0.3%胆盐;发酵液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分...     

内蒙古锡林郭勒牧区自然放养家畜肠道中乳酸菌的分离鉴定与潜在益生特性的筛选

乳酸菌是动物肠道内重要的生理性菌群,本研究以内蒙古锡林郭勒盟牧区自然放养的牛、马、山羊和绵羊为研究对象,对其肠道中的乳酸菌进行分离和16S rRNA鉴定,并对38株罗伊氏乳杆菌进行耐酸性、模拟胃肠液转运和胆盐耐受性试验。乳酸菌分离鉴定结果显示共分离到乳酸菌纯培养物96株,包括双歧杆菌属、肠球菌属、乳杆菌属和链球菌属四个菌属,其中乳杆菌属数量最多,为所有分离株的82.29%;乳杆菌属中罗伊氏乳杆菌所占比例最大,为48.10%。益生特性筛选试验结果显示菌株IMAU10240、IMAU10230和IMAU10256具有良好的耐酸、耐胃肠液和胆盐特性,可作为潜在益生菌进行进一步的益生功能研究。     

一株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌性研究

本试验旨在研究自筛解淀粉芽孢杆菌DHN04的生长曲线、人工胃肠液、pH及猪胆盐耐受性，并研究其抑菌特性及抗生素敏感性。试验采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定人工胃肠液耐受性、耐酸性和耐胆盐等特性，牛津杯法测定抑菌活性，药敏试片测定抗生素敏感性。结果表明，解淀粉芽孢杆菌DHN04在经过4~6 h的缓慢生长期后，进入对数生长期，12~24 h为该菌的稳定生长期；在人工胃液和人工肠液中保持3 h后存活率分别为55.55%和53.33%；pH 2.0时该菌存活率为14.14%，随着酸性的减弱，存活率逐渐上升，在pH 7.0时存活率可以达到93.85%；随着胆盐浓度增加，解淀粉芽孢杆菌的存活率逐渐下降，相同的胆盐浓度，24 h的存活率低于3 h。解淀粉芽孢杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及四联球菌均具有一定的抑制作用；对抗生素阿莫西林耐药。综上，解淀粉芽孢杆菌能够快速活化，对人工胃肠液、胆盐及pH的耐受性良好，对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等具有一定的抑制作用，对阿莫西林耐药。因此，解淀粉芽孢杆菌DHN04可作为一种潜在的益生菌菌株应用于畜禽养殖生产。     

1株植物乳杆菌的生物学特性及体外抑菌活性研究

【目的】试验旨在研究植物乳杆菌GX20200417-1菌株的生物学特性及体外抑菌活性,探讨其在生产中应用的可能性。【方法】将植物乳杆菌GX20200417-1菌株接种至不同pH和含不同浓度胆盐的PBS,以及人工胃肠液中,使用菌落计数分析其对酸、胆盐和人工胃肠液的耐受性。使用牛津杯法检测GX20200417-1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及沙门氏菌的抑菌能力;通过与霉菌毒素共培养后使用ELISA方法研究GX20200417-1菌株对霉菌毒素的降解能力,并饲喂小鼠进行安全性试验。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1菌株能够耐受pH 2.0及0.3%胆盐,并在人工胃肠液中有至少1×10⁴ CFU/mL的活菌数;GX20200417-1菌株发酵上清液对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用,对玉米赤霉素及黄曲霉毒素均有降解作用,但对呕吐毒素无降解作用;灌服GX20200417-1菌株后小鼠安全、无毒副作用。【结论】植物乳杆菌GX20200417-1菌株具有优良的益生特性,在畜禽生产中有一定的开发潜力。     

1株黄曲霉颉颃菌的鉴定及其抑菌活性成分分析

【目的】筛选黄曲霉颉颃菌,探究其最佳培养条件及有效抗菌成分,为实际生产中应用生物防治方法抑制黄曲霉污染提供新的理论依据。【方法】通过平板对峙法及分子生物学鉴定方法对待测菌株进行筛选鉴定。以抑菌率作为衡量标准,判断所得黄曲霉颉颃菌的最佳培养温度、培养时间、接种量、转速、pH及装液量。通过硫酸铵沉淀法从颉颃菌无菌发酵上清液中提取蛋白,观测粗提物对黄曲霉菌丝生长的影响。通过离子交换色谱和凝胶过滤色谱进一步纯化粗提蛋白,并进行质谱测序及序列对比分析,筛选鉴定颉颃菌产生的有效抑菌成分。【结果】筛选到1株解淀粉芽孢杆菌B10(菌种保藏号CCTCCNO:M2018353)。最佳培养条件为温度40℃,培养时间36 h,接种量3%,转速120 r/min, pH 6.0,装液量30 mL,最大抑菌率可达46.56%。其粗提蛋白能有效抑制黄曲霉生长,破坏菌丝正常形态,并从中筛选出几丁质结合蛋白、壳聚糖酶、葡聚糖酶等8种可能的有效抑菌成分。【结论】本试验分离鉴定出1株抑制黄曲霉正常生长发育的解淀粉芽孢杆菌B10,其产生的多种蛋白成分对黄曲霉有显著抑菌活性。     

地衣芽孢杆菌发酵条件优化和抑菌活性测定

【目的】探究不同培养及发酵条件对地衣芽孢杆菌19148抑菌作用的影响及地衣芽孢杆菌19148的耐药性。【方法】设计单因素试验,分别在不同温度、酸碱度、金属离子、摇床转速、发酵时间和接种量的条件下培养地衣芽孢杆菌19148菌液,将培养后的菌液离心、过滤制成无菌滤液,并通过牛津杯抑菌试验探究无菌滤液对大肠杆菌K88、鼠伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌1882的抑制能力。通过药敏纸片法探究地衣芽孢杆菌19148对27种抗菌药的耐药性。【结果】地衣芽孢杆菌19148在4和75 ℃下生长受到抑制,25、37和45 ℃能正常生长,其中在37 ℃抑菌活性最好。在pH 5.0~9.0的条件下能正常生长,在pH为6.0条件下抑菌活性最好,对铜离子不耐受,但对镁离子表现出了良好的耐受性,且不同浓度镁离子处理组间抑菌活性无显著差异（P＞0.05）。体外发酵试验中,地衣芽孢杆菌19148在3%种子液接种量、150 r/min发酵28 h时,体外发酵的抑菌活性最好。耐药性评价试验结果显示,地衣芽孢杆菌19148对青霉素、四环素、头孢他啶、呋喃唑酮和多黏菌素B 5种抗菌药中介,对头孢哌酮和红霉素等其他22种抗菌药敏感。【结论】地衣芽孢杆菌19148具有较好的稳定性,能应用于工业发酵饲料生产,对抗菌药不具有耐药性。     

响应面法优化牛至粉发酵工艺及其抑菌能力研究

【目的】采用复合菌发酵牛至粉,以期提升其营养品质。【方法】以牛至粉、玉米粉和豆粕粉为底物,以抑菌能力作为评价指标,依次利用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心复合试验等方法对复合益生菌固态发酵牛至粉的工艺条件进行优化,并测定发酵牛至粉的抑菌能力、pH、乳酸含量、抗氧化能力、蛋白含量和挥发油含量。【结果】发酵时间、发酵基质水分含量和乳酸菌接种量是影响发酵的主效应因素,优化后最佳发酵工艺为：发酵底物组成比例为牛至粉：玉米粉：豆粕粉=4：1：5,枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和酵母菌接种量均为5×10⁶ CFU/g,乳酸菌接种量为1.87×10⁷ CFU/g,发酵温度为25℃,发酵时间为130 h,水分含量46.7%。在此条件下,发酵牛至粉组合物对大肠杆菌抑菌率达99.98%。较未发酵牛至粉而言,发酵组合物pH显著降低（P<0.05）,抗氧化能力显著提高（P<0.05）,水溶蛋白和酸溶蛋白均显著提高（P<0.05）,百里香酚和香芹酚的含量显著提高40%以上（P<0.05）。与未发酵牛至粉相比,发酵牛至粉对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌和副溶血弧菌的抑菌能力均显著提高（P<0.05）。【结论】响应面法优化牛至粉发酵工艺后,其有效成分百里香酚和香芹酚的含量均显著提高40%以上,且抑菌能力和营养品质均显著提高。