猪链球菌对四环素类抗生素耐药机制的研究进展

四环素类抗生索为广谱抗生素,曾在兽医临床广泛使用.但随着该抗生素在我国的广泛使用,猪链球菌的耐药现象日益严重.猪链球菌的四环素类耐药机制主要由核糖体保护蛋白及外排泵蛋白介导.     

红霉素与四环素耐药基因在猪链球菌临床分离株中的检测

为了解临床分离的48株猪链球菌对大环内酯类药物及四环素耐药基因的分布,用微量稀释法测定48株临床分离的猪链球菌对大环内酯类、四环素、β-内酰胺类及头孢类9种抗生素的药物敏感性,建立PCR方法对耐药菌株大环内酯类耐药基因ermA/B/C、mefA/E、msrD、mphB、23S rRNA,L4,L22和四环素耐药基因tetM、tetO、tetL、tetK及与Tn916转座子相关的int和xis基因进行检测。结果表明,31株2型猪链球菌中大环内酯类药物耐药率为3.23%,17株9型猪链球菌红霉素耐药率为88.24%,泰乐菌素、磷酸替米考星、阿奇霉素的耐药率均为70.59%。48株猪链球菌对四环素均耐药,但对青霉素、阿莫西林、头孢曲松钠、氨苄西林均敏感。大环内酯类耐药基因主要以ermB为主,占75%(12/16),mefA/E、msrD占25%(4/16),16株红霉素耐药菌株中,tetM、tetO、int、xis的检出率分别为25%(4/16)、62.5%(10/16)、31.25%(5/16)和31.25%(5/16),没有检测到ermA、ermC、mphB、tetL、tetK。所有红霉素耐药菌株均未检测到23S rRNA、L4和L22突变。     

广东地区猪链球菌的耐药性特点及四环素耐药基因携带情况

猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是危害世界养猪业的重要细菌性病原菌之一,本研究旨在了解猪链球菌临床分离株的耐药性特点和四环素耐药基因的携带情况,为临床上该病的防控提供科学依据。本试验采用K-B法和CLSI推荐的肉汤微量稀释法检测猪链球菌广东分离株对18种抗菌药物的耐药性。结果显示,被检菌株对四环素类、磺胺类和氨基糖苷类抗菌药物表现较强的耐药性,尤其对四环素类药物的耐药率高达98.2%;对头孢菌素类药物比较敏感;菌株都耐受6种或6种以上的抗菌药物,其中以6和14重耐药菌株的数量最多,分别占20%和17%。本试验设计了4对引物检测四环素耐药基因携带情况,结果发现56株菌中以携带tetM基因为最多(85.71%)。结果表明tetM很可能是介导广东SS分离株对四环素产生极高耐药率的主要原因之一。     

禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因调查分析

为了更好地了解禽源沙门菌对四环素的耐药性及耐药基因分布,从不同来源的家禽样品中分离沙门菌,调查其对四环素的耐药性以及耐药菌株中8种四环素耐药基因[tet(A)、tet(B)、tet(C)、tet(W)、tet(M)、tet(D)、tet(K)和tet(L)]的携带情况.结果表明,18.8%的沙门菌分离株对四环素耐药,健康成鸡分离株对四环素的耐药性明显高于雏鸡、死胚或病禽分离株;四环素耐药株中tet(A)、tet(B)和tet(M)基因的携带比例分别为73.1%、11.5%和3.8%,说明沙门菌对四环素的耐药机制以tet(A)和tet(B)基因介导的主动外排为主.本研究首次在对四环素耐药的沙门菌中检测到tet(M)基因,说明tet(M)基因在沙门菌对四环素的耐药性方面也具有潜在的作用.     

2型猪链球菌对四环素的耐药机制

采用微量稀释法测定36株2型猪链球菌对四环素的耐药性,应用PCR扩增四环素相关耐药基因tet（M）、tet（O）、tet（K）、tet（L）、tet（Q）、tet（S）、tet（T）和tet（W）,将扩增到的耐药基因克隆、测序,并进行序列分析。结果显示,36株2型猪链球菌对四环素的耐药率为100%,MIC90高于512mg/L;其中29株扩增出tet（M）基因,6株扩增出tet（O）基因,5株同时扩增到tet（M）、tet（L）基因,同时扩增到tet（M）、tet（L）基因的菌株MIC均高于512mg/L;同源性分析结果显示,扩增到的tet（M）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～100%,tet（O）基因与GenBank中已公布序列的同源性为95%～99%。结果表明,我国大部分地区的2型猪链球菌对四环素均具有很强的耐药性,主要耐药机制是由tet（M）基因介导的核糖体保护作用。     

胸膜肺炎放线杆菌对四环素类抗生素的耐药分析及相关基因检测

四环素类药物是在兽医临床中常用的一类抗生素,为了解胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)对四环素类抗生素的耐药情况,本研究对从临床分离鉴定的85株APP进行了四环素类抗生素临床耐药情况和相关基因的分析和检测。应用药敏纸片法进行药敏试验,结果:APP对四环素的耐药率较高为76.5%,其次为金霉素54.1%、美他环素48.2%、多西环素45.9%、土霉素28.2%、米诺霉素25.9%、替加环素22.3%。采用PCR方法对四环素类10种耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL1和tetL2进行检测,结果:tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetG、tetH、tet1、tetL2、tetL1耐药基因的扩增阳性率分别为78.8%、41.2%、15.3%、8.2%、21.2%、15.3%、43.5%、24.7%和30.6%,而tetL1扩增则全部阴性,未检出其耐药基因。本研究结果为四环素类抗生素在猪传染性胸膜肺炎临床上的应用和新药研发提供了一定的理论依据。     

猪链球菌2型湖南分离株多重耐药性及相关耐药基因研究

基因突变和基因转移是细菌耐药性产生和存在的重要内因,检测与抗生素耐药性相关的基因具有重要的意义.试验选取25份猪链球菌2型湖南分离株对16种抗生素进行药敏试验,检测菌株耐药性;选出了23株有红霉素抗性的菌株,用PCR检测其erm(B)基因.结果显示,猪链球菌湖南分离株对红霉素、四环素、万古霉素和克林霉素具有高耐药性,在23株红霉素抗性菌株中有18株存在erm(B)基因,由erm(B)基因产生的红霉素耐药菌株占到其中的78.3%.因此,erm(B)基因是链球菌2型湖南分离株对红霉素耐药的主要抗性决定基因.     

猪链球菌广西分离株耐药性分析

采用药敏纸片扩散法对32株猪链球菌广西分离株进行12种临床常用抗生素耐药性试验分析,结果表明:广西区内猪链菌分离株耐药性非常普遍,而且耐药谱广,所有分离株对阿莫西林均具有耐药性,耐药率为100%;对强力霉素、壮观霉素、林可霉素、罗红霉素具有高度耐药性,耐药率分别为96%、89%、89%、84%,分离株对3种以上抗生素都具有耐药性,其中有3株对试验的12种抗生素都具有耐药性,表现为多重耐药性(M DR)。     

广东地区水禽源大肠杆菌对四环素的耐药性及耐药基因检测

采用琼脂二倍稀释法测定256株水禽大肠杆菌分离株对四环素类药物的敏感性,并通过PCR方法调查分离株携带耐药基因tet A、tet B、tet C和tet M的情况。药敏试验结果表明256株水禽大肠杆菌分离株对四环素和多西环素耐药率分别为92.2%和77.3%。在237株大肠杆菌四环素耐药株中,tet A、tet B、tet C和tet M的携带率分别为49.8%、57.8%、49.4%和40.1%,仅8.0%的耐药株没有检测到4种耐药基因。结果表明:tet A、tet B、tet C和tet M广泛存在于水禽源大肠杆菌中。tet A和tet B对水禽源大肠杆菌四环素耐药株的产生起重要作用,主动外排作用是大肠杆菌对四环素产生耐药性的主要机制。     

247株猪源沙门菌对四环素类药物耐药性和耐药基因的检测分析

为探究猪源沙门菌分离株对四环素类抗菌药物耐药性及四环素耐药基因(tet)的流行与分布情况,从7省的合作猪场采集病死猪肝脏、肺脏、肠道作细菌分离,利用沙门菌属特异性侵袭基因(invA)和16S rDNA扩增、测序等方法进行鉴定,并用微量肉汤稀释法测定沙门菌分离株对四环素类抗菌药物的敏感性,PCR方法测定tet基因,以及ERIC-PCR方法分析猪源沙门菌之间的相关性和遗传关系。从823份病料中分离鉴定出247株猪源沙门菌,分离率为30.01%。药敏结果显示,对多西环素、土霉素的耐药率分别为87.45%和94.74%。PCR检测发现,分别有62,66,3株单独携带tetA、tetB、tetC基因;分别有38,8,4,7,1株菌同时携带两种不同的tet基因(tetA+B、tetA+C、tetA+D、tetB+C、tetC+D);分别有9,6,1,6,1,4,3株菌同时携带3种不同的tet基因(tetA+B+C、tetA+B+D、tetA+B+M、tetA+C+D、tetA+D+M、tetB+C+D、tetB+C+M);分别有6,2株菌同时携带4种不同的tet基因(tetA+B+C+D、tetA+C+D+M);没有检测到单独携带tetD、tetM以及同时携带5种tet基因的菌株。接合试验表明,tetM可与tetA或tetC共同在沙门菌与大肠杆菌间转移,导致菌株多西环素抗性水平转移。试验菌共分为A~δ共30个ERIC型,tet基因分布于不同ERIC型菌株中,表明其在试验菌株间水平扩散。本试验首次在猪源沙门菌中发现了编码核糖体保护蛋白的四环素类耐药基因tetM。猪源沙门菌对四环素类药物耐药严重,对多西环素、土霉素具有普遍耐药性,tetA、tetB基因在7省猪源沙门菌中流行最广泛,分离菌对四环素类药物的普遍耐药性与单个或多个tet基因的普遍存在密切相关。     

猪链球菌对红霉素耐药性的研究

从发病猪体内分离、鉴定猪链球菌，采用肉汤稀释法和纸片琼脂扩散法筛选对红霉素耐药的猪链球菌，用双纸片法确定耐药株的耐药表型，通过聚合酶链反应检测对红霉素耐药的基因ermb/mefA。猪链球菌对红霉素的耐药表型为cMLS表型，即同时对克林霉素耐药。在3株红霉素耐药株中扩增到ermb基因，其余未能检测到ermb或mefA基因。     

河南省猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况，本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定，并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定，对其中的2型猪链球菌进行了药敏试验。结果显示，试验共鉴定出189株猪链球菌，流行的猪链球菌的血清群主要以D群为主，其次是G群和C群；优势的血清型是2型、7型、9型和1型。其中87株为2型猪链球菌，超过90%的2型菌株对β-内酰胺类（青霉素G、阿莫西林和头孢菌素类）、氯霉素、万古霉素、环丙沙星敏感，超过40%的2型菌株对多西环素、四环素、红霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、克林霉素、链霉素、米诺环素产生耐药性。以上结果为指导猪场使用敏感药物及时控制疫情、选择血清型相符的疫苗进行预防及减少损失提供参考依据。     

猪链球菌2型JX分离株的生物学特性

从临床表现为脑膜炎、关节炎及败血症的发病猪分离到2株细菌，分别命名为JX02和JX03，经鉴定其形态、染色及培养特性均符合链球菌的特点，具α或β溶血，生化试验结果不稳定。用猪链球菌2型、1型和9型抗血清进行凝集试验，结果2株菌均能与猪链球2型抗血清凝集，其中1株菌对小鼠和家兔均有致病性，另1株菌只能致死家兔。PCR均能扩增2株菌的主要毒力因子基因。表明发病猪的病原不同于以往的C群链球菌，不是马链球菌兽疫亚种，而是属于R群的猪链球菌。     

猪链球菌2型分离株对野生斑马鱼的致病性

以野生斑马鱼为模式动物,对6株mrp＋epf＋sly＋猪链球菌2型（SS2）分离株进行致病性比较。斑马鱼经腹腔接种不同稀释度的SS2分离株,连续观察5d,Kaplan-Meier生存曲线分析并统计半数致死量（LD50）。结果显示,6个分离株对斑马鱼的LD50在10^5cfu-10^6cfu之间,临床株与非临床株的毒力差异不显著（P〉0.05）。从攻毒后死亡的鱼腹腔和脑可分离到SS2,并伴有腹腔出血及肝、肠、脑部炎性病变。表明SS2可感染斑马鱼,为进一步研究SS2的体内感染机制及毒力因子功能等奠定了基础。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10⁸ CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%（4/11）。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。     

红霉素体外诱导猪链球菌耐药机制研究

2004年在病猪体内分离到一株猪链球菌,通过平板扩散法和微量稀释法药敏试验表明这株链球菌对红霉素敏感。采用这株猪链球菌进行体外诱导试验,在低浓度药物组第165代和高浓度药物组第180代的菌液对红霉素M IC值均达到中介水平。它们的耐药表型均为内在型,而且都扩增到了ermB耐药基因。其中180代菌的23S rRNA碱基1387位A突变成G;它们的核糖体蛋白L4,165代菌碱基104位、585位和633位,分别T突变成C、A突变成G和A突变成G,180代菌碱基283位和651位,分别A突变成G和T突变成G;核糖体蛋白L22,165代和180代菌碱基109位和468位,分别C突变成A和T突变成A,并且165代菌碱基还在426位G突变成A。这些碱基的突变可能是引起猪链球菌对红霉素耐药的原因之一。     

猪链球菌对大环内酯类药物耐药性研究进展

随着养猪业的迅速发展,猪链球菌病也在世界范围内广泛传播。大环内酯类药物在养猪业中的广泛应用也使其耐药性随之产生,国内外猪链球菌对大环内酯类的耐药性较严重,耐药率达50%以上。目前国内外已报道的猪链球菌对大环内酯类耐药基因包括ermA、ermB、ermC和mefA,其中最常见的是ermB基因编码的内在型（cMLSB）耐药。大环内酯类耐药性特点表现为多重耐药株（MDR）占很大比例且与菌株血清型之间可能存在相关性。耐药基因erm及mef均为获得性耐药基因,位于转座子内,或由质粒携带,可在细菌间广泛传播。合理使用抗菌药物,加强耐药性监测,开发新药以及疫苗等对于减缓耐药性的产生和传播具有十分重要的意义。