牛卵母细胞体外成熟和体外受精技术

本文综述了十几年来牛的卵母细胞体外受精和体外成熟技术的研究进展，包括精子的体外获能、卵母细胞采集受成熟培养和体外受精、体外受精早期胚胎的培养等环节，并且对影响该技术的王要原因进行了分析，对体外受精在家畜育种中的应用提出了展望。     

小鼠GV期卵母细胞体外成熟及受精研究

本试验对不同培养液以及添加不同浓度的生殖激素对6～8周龄雌鼠GV期卵母细胞成熟培养效果以及肝素钠对其成熟后体外受精效果的影响进行了研究。结果表明:以TYH为基础培养液的培养方式更适合于体外成熟培养;培养液中单独添加LH或同时添加LH和FSH对昆明小鼠卵母细胞体外成熟有促进作用,但只添加FSH对卵母细胞的成熟促进作用不明显;在小鼠受精液中肝素浓度应控制在10μg/mL为宜。     

罗格列酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone, RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4～6周龄雌性小鼠卵母细胞,随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度,38.5℃、5%CO₂培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH-DA检测卵母细胞内活性氧(ROS);采用CMF2HC检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)水平;采用JC-1检测卵母细胞内线粒体膜电位;采用实时荧光定量PCR测定抗氧化相关基因的表达水平。结果显示,RSG组卵母细胞第一极体排出率相较于对照组显著提高(P<0.05);与对照组相比,RSG组ROS水平明显降低,GSH和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.05)。本研究还发现,RSG组卵母细胞中抗氧化相关基因GPX-3、CAT和SOD-2的mRNA转录水平均显著提高(P<0.05)。结果表明,在体外成熟过程中添加RSG可以提高小鼠卵母细胞成熟率,降低细胞内ROS堆积,提高细胞内GSH水平、卵母细胞线粒体功能和抗氧化基因表达水平,缓解氧化应激造成的损伤,提高卵母细胞体外成熟质量。     

影响牛卵母细胞体外成熟的因素

本文就牛体外受精的关键环节之一体外成熟,阐述了卵母细胞质量、培养基、激素、生长因子、血清、卵泡液及颗粒细胞对其的影响。     

猪卵母细胞体外成熟体系研究简述

随着胚胎生物技术的日臻完善并逐步应用于家畜的育种和繁殖领域,人们对动物胚胎工程的认识逐渐加深,一系列更深层次的胚胎生物技术越来越受到人们的重视。20世纪80年代以来,人们在家畜卵母细胞体外培养、体外受精、     

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

藏红花素对小鼠卵母细胞体外成熟能力的影响

试验旨在探讨藏红花素（crocin）的抗氧化应激作用对小鼠卵母细胞体外成熟及后续胚胎发育能力的影响。在体外成熟（IVM）培养液中添加不同浓度藏红花素（0、5、10、15、20、25、30 μmol/L）,小鼠卵母细胞在体外成熟培养12 h后,检测卵母细胞第一极排出情况、卵母细胞胞质内活性氧（ROS）和谷胱甘肽（GSH）含量,并进行体外受精（IVF）;体外受精后6 h统计受精率,24 h统计卵裂率,96 h统计囊胚率。结果显示,与对照组相比,10、15 μmol/L藏红花素显著提高了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）;当藏红花素浓度继续增加时,卵母细胞的第一极体排出率下降,30 μmol/L藏红花素显著降低了卵母细胞第一极体排出率（P<0.05）;5、10、15 μmol/L藏红花素均显著降低了卵母细胞ROS含量（P<0.05）,10、15 μmol/L藏红花素均显著提高了卵母细胞GSH含量（P<0.05）。与对照组相比,10 μmol/L藏红花素组受精率、卵裂率、囊胚率差异均不显著（P>0.05）,15、20、25、30 μmol/L藏红花素均显著降低受精率和囊胚率（P<0.05）,对卵裂率影响不显著（P>0.05）。结果表明,在小鼠卵母细胞体外成熟培养液中添加10 μmol/L藏红花素可以显著增加第一极体排出率,显著降低卵母细胞ROS含量、提高卵母细胞GSH含量,但对受精后的胚胎发育无显著影响。     

小鼠动情周期中卵母细胞的采集与体外成熟效果观察

本实验通过对３０只昆明白小鼠动情周期中的９９９枚卵母细胞的采集,结果表明：ＣＯＣ采集量与动情天数相关（Ｐ〈０．０１）。各天中ＣＯＣ值０ｄ最低。１ｄ这最高值,２ｄ、３ｄ下降,４ｄ上升;ＤＯ值民ＣＯＣ值相反;且ＤＯ的采集量极显著高于ＣＯＣ量（Ｐ〈０．０１）。对３３８枚卵母细胞的体外成熟结果表明。ＣＯＣ成熟率在１ｄ时达最高值。ＤＯ成熟率不受情期天数的影响。     

黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

氧化应激是阻碍胚胎体外发育的重要因素之一,减少氧化应激可能是提高胚胎体外培养效果的途径。本文探讨了不同浓度黄芩苷对小鼠卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育的影响,为体外抗氧化性研究及抗氧化物选择提供参考。试验选择4～6周龄雌性昆明小鼠获取GV期卵母细胞,在体外成熟培养液中分别添加不同浓度(0、20、40、60μmol/L)的黄芩苷,经37℃、5%CO₂、饱和湿度培养条件体外成熟12 h,统计卵母细胞第一极体排出率,检测卵母细胞胞质内活性氧(ROS)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量以及培养液中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化能力(T-AOC),并采集8～10周龄雄性昆明小鼠精液,进行体外受精(IVF),分别于受精后6、24、96 h统计受精率、卵裂率和囊胚率。结果表明：体外成熟液中添加40、60μmol/L黄芩苷后,卵母细胞第一极体排出率较对照组显著提高(P<0.05),且浓度为40μmol/L极体排出率显著高于60μmol/L,但对成熟后的卵母细胞体外受精率、卵裂率、囊胚率无显著性影响(P>0.05),卵母细胞胞质RO...     

影响小鼠卵母细胞体外成熟和体外受精效果的因素分析

研究卵母细胞发育程度和不同营养因子对小鼠卵母细胞体外成熟及体外受精率的影响。小鼠卵母细胞分别在含有FSH、BSA和胰岛素的培养液中体外成熟 ,在Whitten氏液中体外受精 ,比较体外成熟率、体外受精率。卵丘卵母细胞 (COC)较裸卵 (DO)的体外成熟率、体外受精率都低。FSH和胰岛素均能提高小鼠卵母细胞的体外成熟率、体外受精率。BSA可以降低小鼠卵母细胞体外受精率。GV期卵母细胞的体外受精率显著低于体外培养的排出第一极体的卵母细胞。 (P2 -cell <0 0 5 ,P受精 <0 0 5)。     

柠檬苦素对小鼠卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响

【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50 μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0 μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0 μmol/L Lim组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P＜0.05),后续试验均用20 μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20 μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P＜0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P＜0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P＜0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P＜0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P＜0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P＜0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20 μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。     

牛卵泡卵体外成熟及其受精能力的研究

本试验主要研究了牛卵泡卵体外成熟、体外受精及其受精过程的发生。从屠宰场收集800枚牛卵泡卵进行体外成熟培养,并用体外获能的精子体外受精。在用m-TCM199培养21、22、24、26、28h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为33.89％、74.16％、77.78％、86.67％、85.71％;25h后,如果继续培养,成熟的卵母细胞比例不再显著增加。卵母细胞的自身形态显著地影响其成熟效果,A、B、C级卵培养24h后分别有94.60％、55.43％、31.25％的卵母细胞达到中期Ⅱ。卵泡卵在体外滞留8h后,其成熟率(47.11％)明显地低于45min(77.92％)或4h(74.60％)。肝素和钙离子载体A 23187都能诱发牛精子获能,二者在受精效报上差异不显著(P>0.05),并且都有多精入卵现象发生。授精后6h精子进入卵内,精子入卵后2～3h头部膨大,6h后出现早期原核,最早发生卵裂是在授精后30h。     

小鼠卵细胞体外成熟培养及孤雌激活

[目的]利用小鼠卵母细胞体外成熟培养及3种激活方法（乙醇激活、氯化锶激活、乙醇-氯化锶激活）对小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。[方法]小鼠经注射孕马血清促性腺激素（PMSG）48h后,摘取卵巢获得3级未成熟卵母细胞．在成熟培养液（M199100mL＋丙酮酸钠2．2mg＋抗100IU／mL＋LH2IU／mL＋FCS10％）中对小鼠未成熟卵细胞进行体外成熟培养,获得的成熟卵母细胞分别在乙醇、氯化锶、乙醇一氯化锶不同激活剂中激活,[结果]A级卵母细胞成熟率为79％．B级卵母细胞成熟率为70％,C级卵母细胞成熟率为55％。A级卵母细胞使用氯化锶激活率可达80．0％,为最佳方法。[结论]A级卵母细胞成熟培养效果最好。孤雌激活氯化锶激活效果高于乙醇．．     

绵羊卵泡卵体外成熟的研究

本研究主要探讨了不同激素、卵母细胞形态及入培前时间对绵羊卵泡卵体外成熟效果的影响.结果表明:卵母细胞在添加FSH LH(均为10IU/mL)、HCG(4IU/mL)及不加激素的m—TCM199 10％FCS(V/V)培养液中培养24h后,达到中期Ⅱ的卵母细胞比例分别为87.68％、96.00％和42.11％;卵母细胞的形态是影响其成熟的重要因素,A、B、C三级卵培养24h后的成熟率分别为91.77％、57.10％和25.84％,入培前时间间隔为2、4、8h时,其成熟率分别为80.24％、77.42％和 77.83％,相互间差异不显著(P>0.05).     

无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的初步探讨

主要探讨无卵丘水牛卵母细胞体外成熟的可行性,以便为研究卵母细胞成熟机理提供模型。无卵丘的水牛卵母细胞随机分为5组,然后分别进行直接成熟培养（M1）,与卵丘细胞单层共培养（M2）,用未扩展的卵丘细胞块包围培养（M3）,与扩展的卵丘细胞团共培养（M4）和用卵巢组织包围培养（M5）。无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟培养24 h后检查第一极体（PB1）排出率,随后对这些卵母细胞进行孤雌激活,评定其成熟质量。结果发现,M4组的第一极体排出率明显高于M1组和M5组,其它各组间没有显著差异（P〉0.05）;M5组的孤雌激活卵裂率显著低于M1组和M4组（P〈0.05）,而与M2组和M3组没有显著差异（P〉0.05）,但M3和M4两组的囊胚发育率显著高于M1组和M5组（P〈0.05）。这些研究结果表明：（1）未扩展卵丘细胞包围法和扩展卵丘细胞团支撑法可促进无卵丘水牛卵母细胞的体外成熟,但与卵丘细胞单层共培养没有作用;（2）卵巢组织包围培养不利于水牛卵母细胞的体外成熟。     

不同收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

试验旨在研究不同卵母细胞收集方法及添加半胱氨酸、肝素钠对黄牛卵母细胞体外成熟及体外受精的影响。以黄牛为研究对象,采用两种方法（抽卵法和割卵法）抽取卵泡中的卵母细胞,比较两种方法获取的卵母细胞成熟率,结果发现,抽卵法获得的卵母细胞成熟率显著高于割卵法（P<0.05）。将获取的卵母细胞分为4组：A组（对照组,只添加基础成熟培养液）、B组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸）、C组（基础成熟培养液+20 μg/mL肝素钠）、D组（基础成熟培养液+200 μmol/L半胱氨酸+20 μg/mL肝素钠）,结果发现,D组的卵母细胞成熟率显著高于A、B、C组（P<0.05）,B、C组间卵母细胞成熟率无显著差异（P>0.05）,但两组卵母细胞成熟率均显著高于A组（P<0.05）;A组卵母细胞卵裂率均显著低于B、C、D组（P<0.05）,B、C、D组间卵母细胞卵裂率无显著差异（P>0.05）;D组囊胚率显著高于其他3组（P<0.05）。结果表明,抽卵法获得卵母细胞效率显著高于割卵法,肝素钠及半胱氨酸对黄牛卵母细胞体外成熟和体外受精都有促进作用,且同时添加两种物质对体外成熟的效果更佳。     

山羊卵母细胞体外成熟体系研究进展

卵母细胞体外成熟(IVM)是山羊胚胎体外生产的关键步骤,其对山羊体外生产胚胎的数量和质量均具有非常重要的意义。此外,IVM还可以满足胚胎工程技术如体细胞核移植、转基因动物生产对卵母细胞的大量需求。然而,由于山羊卵母细胞体外成熟研究起步较晚,与牛、猪等家畜相比仍然存在不小的差距,存在诸如体外成熟率低、胚胎质量不佳、培养体系可重复性低等问题。因此,分析山羊卵母细胞体外成熟的主要影响因素,提高山羊卵母细胞体外成熟率,建立山羊卵母细胞体外成熟稳定培养体系,就成为了近年来山羊胚胎体外生产的研究重点。论文综合国内外学者近年的相关研究,对可能影响山羊卵母细胞体外成熟效率的各种因素进行了综述分析,同时对山羊卵母细胞体外成熟现存问题进行了分析,以期为建立山羊卵母细胞体外成熟体系提供理论支持。     

猪卵泡卵母细胞的体外成熟与体外受精

本试验对猪卵泡卵母细胞不同体外成熟培养时间、不同精子获能时间、不同精卵共孵育时间对体外受精的影响进行了研究。结果表明,体外成熟培养44 h左右,精子获能时间在1～2 h之间,精卵共孵育时间在6～8 h之间,受精后卵裂率最高。     

昆明小鼠卵母细胞体外成熟培养条件优化

对不同的培养液（M199、mDPBS、TYH）和培养液添加物对小鼠C级卵母细胞体外发育和成熟的影响进行了研究。结果表明,mDPBS培养液的培养效果（GVBD：19．8％,PBI：12．3％）好于（P〈0．05）M199培养液（GVBD：13．3％,PBI：8．9％）和TYH培养液（GVBD：12．3％,PBI：7．4％）;mDPBS中添加丙酮酸钠和FCS（GVBD：100％,PBI：86．3％）明显优于（P〈0.01）单纯添加丙酮酸钠（GVBD：42．9％,PBI：23．8％）,也明显优于（P〈0．01）添加丙酮酸钠＋BSA（GVBD：63．2％,PBI：53．8％）;就A、B和C级3种卵母细胞相比,C级卵母细胞的成熟发育最佳,GVBD的发生率为100．0％,PBI的排出率为86．2％。