饲用鸡源芽孢杆菌的鉴定及环境耐受性研究

为开发饲用芽孢杆菌用于鸡的生产,从放养的淮南麻黄鸡盲肠内分离了2个菌株,用酵母浸出粉胨葡萄糖培养基分离并纯化,采用常规生化试验、16 S rDNA鉴定为芽孢杆菌。模拟胃肠道内环境研究其耐盐、耐人工胃液和耐胆盐能力显示,这2株芽孢杆菌具有较好的耐盐、耐人工胃液和胆盐能力,可耐过机体胃肠道内环境。耐热性研究表明,这2株芽孢杆菌均能在85℃条件下生长。结果表明所分离的芽孢杆菌可以在肠道内生存,具有耐热性,有利于工业化生产。     

鸡源芽孢杆菌的分离鉴定及小鼠毒性试验研究

本试验从鸡肠道分离出 42 株菌种,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化试验,初步鉴定出 8 株为芽孢杆菌.用这 8 株菌对小白鼠进行为期 20 d 的正常量和加倍量的饲喂,结果表明,试验组小白鼠均未出现中毒现象,所选用的 8 株细菌均较安全,可作为动物微生态制剂的菌种应用.     

一株凝结芽孢杆菌的分离鉴定及益生性研究

试验旨在分离鉴定一株来源于池塘底泥的具有益生功能的凝结芽孢杆菌,并研究其益生性能。从自然池塘底泥分离得到一株产酸能力强的杆状细菌,通过生理生化特征分析和16S rDNA序列比对,鉴定分离菌为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）。该分离菌株对大肠杆菌K88、大肠杆菌K99、无乳链球菌和嗜水气单胞菌有抑制作用;在pH 2.5的模拟胃液中处理12 h存活率为71.9%;在胆盐浓度为0.3%的模拟肠液中处理12 h,存活率为84.4%。该分离菌株可有效降解亚硝酸盐,48 h降解率达到96.80%。将270只1日龄AA肉鸡分成3个处理组,日粮分别添加0（Ⅰ组）、1.0×10⁶（Ⅱ组）和1.0×10⁷ CFU/g（Ⅲ组）剂量的凝结芽孢杆菌NJ102,试验期42 d。结果显示,Ⅱ、Ⅲ组肉鸡的平均日增重和终末体重显著高于Ⅰ组（P<0.05）,料重比显著低于Ⅰ组（P<0.05）,各组间平均日采食量差异均不显著（P>0.05）。结果表明,来源于池塘底泥的凝结芽孢杆菌NJ102有一定的抗逆性和益生能力,能改善肉鸡的生长性能,具备作为微生物饲料添加剂开发的潜力。     

一株凝结芽孢杆菌的分离筛选及生物学特性研究

研究采用改良MRS培养基,从土壤中分离一株能抑制常见病原菌的产酸芽孢杆菌。该菌株对大肠杆菌(EscherichiacoliO139、E.coliK88、E.coliK99)、伤寒沙门氏菌[Salmonella typhimurium O4H(iSTO4Hi)]、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等均有较强的抑制作用,经生理生化试验和16SrDNA序列分析鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。该菌株模拟胃液处理30min后存活率为91%,耐胆盐浓度达3.0%,小鼠急性毒性试验结论为无毒无害物质。研究结果表明,该菌株可以顺利通过胃酸进入小肠后开始作用,改善肠道微生态环境,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。     

鸡芽孢杆菌的分离、鉴定及体外抑菌研究

试验从鸡的粪便中分离到8株芽孢杆菌，经过生化试验初步结果为：A1、A2、A3和A7为巨大芽孢杆菌，A4为地衣芽孢杆菌，A5、A6和A8为蜡样芽孢杆菌。采用牛津杯法测定这8株芽孢杆菌的发酵液、代谢产物和菌体对病原菌的抑菌活力，结果表明：这8株芽孢杆菌对大肠杆菌和葡萄球菌都有一定的抑制作用，其中A2、A4和A6抑菌效果较好。这8株芽孢杆菌发酵液的抑菌效果要比代谢产物要好，而其代谢产物的抑菌效果要比菌体要好。     

鸡肠道芽孢杆菌的分离鉴定及产蛋白菌株的筛选

本实验从鸡肠道分离出50株菌种,通过对菌种菌落培养特性、形态观察、生理生化实验,初步鉴定出8株为芽孢杆菌。通过产蛋白菌株的筛选试验筛选出1株能够分泌蛋白的芽孢杆菌,该菌株可望成为外源蛋白高效分泌表达的宿主。     

牦牛源枯草芽孢杆菌分离培养与鉴定

为得到稳定性高、抗逆性强的枯草芽孢杆菌,试验从健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,分离出4株枯草芽孢杆菌。之后进行形态学鉴定、多项生化鉴定、琼脂糖凝胶电泳试验。结果表明,革兰氏染色为蓝色棒状或杆状菌,生化鉴定符合枯草芽孢杆菌生化反应,确定为枯草芽孢杆菌,编号为BS-1,BS-2,BS-3,BS-4。通过耐胆盐、耐高温等耐受性试验,结果显示,BS-3整体耐受特性最好,在4株菌株中稳定性最高、抗逆性最强。结合试验目的,推断BS-3作为枯草芽孢杆菌益生菌制剂潜力较高。     

产纤维素酶芽孢杆菌的分离鉴定

采集健康奶牛的新鲜粪便,利用刚果红平板染色法分离筛选具有产纤维素酶活性的芽孢杆菌,并进行细菌菌落、形态和生化鉴定。结果从牛粪中分离出35株兼性厌氧的芽孢杆菌,利用刚果红鉴别培养基筛选出具有分解纤维素能力的菌株,并测定其水解圈大小,初步筛选出10株纤维素酶高产菌株,并对其进行了种属鉴定:一株为梭状芽孢杆菌,其余9株为芽孢杆菌属细菌。     

鸡消化道乳杆菌的分离及鉴定

用ＭＲＳ培养对４０日龄ＳＰＦ鸡及健康鸡的嗉囊,十二指肠,空肠,盲肠中的乳酸菌进行分离和计数。经过分离和纯化获得６种乳酸菌,一株为球菌,五株为杆菌,分别命名为ＣＸ００１,ＣＸ００２,ＣＸ００３,ＣＸ００４,ＣＸ００５和ＣＸ００６。根据生长速度,耐酸耐胆汁对肠膜粘附试验,我们筛选出两种乳杆蓖ＣＸ００４和ＣＸ００６,作为益生素候选菌种。     

鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析

通过对临床病死雏鸡的肝和心血处进行采样、分离、鉴定,获得13株致病性沙门氏菌。采用Kirby-Bauer法检测13株分离菌对10种抗菌药物的敏感性,结果表明,细菌对10种临床常用抗菌药物均表现出较高的耐药性,且均为两重或两重以上耐药,有的甚至达到对其中8种药物产生耐药性。13株分离菌对四环素的耐药率已高达100%,对复合磺胺、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、头孢唑啉和氯霉素的耐药率分别为92.3%、84.6%、84.6%、84.6%、69.2%、23.1%和7.7%;对庆大霉素和卡那霉素敏感。结果表明,沙门氏菌的耐药现象已十分严重。     

山东省鸡源沙门氏菌的分离鉴定及毒力基因分析

本研究旨在调查山东地区鸡源沙门氏菌的流行情况及毒力基因分布。在山东地区规模化养鸡场采集病料,利用四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）进行沙门氏菌选择增菌,并对分离菌株进行纯化培养、革兰氏染色、生化试验、培养基菌落形态鉴定,利用沙门氏菌属及血清型特异性引物对分离菌进行PCR扩增鉴定,并利用PCR方法检测分离菌中33种毒力基因分布。结果显示,分离菌在LB固体培养基和麦康凯培养基上呈无色半透明、光滑且边缘整齐的菌落,镜检为革兰氏阴性、两端钝圆的小杆菌。生化试验、培养基菌落形态鉴定、沙门氏菌属及血清型特异性引物PCR扩增结果显示,共分离到25株鸡源沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌9株,鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌各8株。毒力基因检测结果显示,33种毒力基因在25株分离菌中均有检出,其中20种毒力岛基因（invJ、virK、sopA、mogA、hilA、hisJ、ssaB、ssaQ、ssiD、misL、mgtC、orf319、siiE、siiD、bcfA、pipC、sopB、araB、spoB和avrA基因）、肠毒素基因（stn基因）及菌毛毒力基因（fimA基因）检出率均为100%;2种毒力岛基因（sipA和sodC基因）及4种毒力质粒基因（spvA、spvC、spvD和spvR基因）检出率均为96%,spoE基因检出率为68%,fliC基因检出率为36%,gipA与spvB基因检出率均为32%,sseL基因检出率为4%;25株鸡源沙门氏菌中,分别携带31种（8株）、30种（1株）、29种（15株）和24种（1株）毒力基因;毒力基因gipA和spvB只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,且在鼠伤寒沙门氏菌中检出率为100%。本研究结果表明,山东地区鸡源沙门氏菌主要为肠炎沙门氏菌、鸡白痢沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌,分离菌皆携带多种毒力基因,其中gipA和spvB毒力基因只在鼠伤寒沙门氏菌中检出,可作为鼠伤寒沙门氏菌鉴定的备选基因之一。     

鸡滑液囊支原体的分离鉴定及病理组织学观察

为了解宁夏及其周边不同地区蛋鸡场中的鸡滑液囊支原体的种类及其致病力,采用改良Frey氏鸡滑液囊支原体培养基,从疑似感染鸡滑液囊支原体的不同蛋鸡群中分离出病原株,设计鸡滑液囊支原体vlhA基因特异性引物,对分离到的病原进行基因序列扩增并测序,使用MEGA6.0软件中的邻接法(Neighbor-joining,NJ)构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析,采用从临床症状最明显的鸡体分离的菌株进行动物感染试验,制作石蜡切片,HE染色,病理组织学观察。结果表明,所分离到的病原菌均为鸡滑液囊支原体,部分菌株之间极其相似;鸡滑液囊支原体不仅可以使鸡只关节肿胀、生长缓慢,也可引起鸡只的肝脏轻微肿大,肝细胞部分坏死、间质增生;脾脏结缔组织增生,出血。     

鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药物敏感性分析

为了解当前广西鸡源致病性沙门氏菌的优势流行菌株及耐药情况,掌握其最新流行特点,本试验采集疑似病鸡的组织病料,对沙门氏菌进行增菌和分离培养,运用VITEK System ATB Expression法ID 32E肠杆菌鉴定试剂条对分离菌株进行生化试验鉴定,应用玻片凝集试验进行血清型鉴定,采用ATB VET药敏试剂条对30种肠杆菌抗菌药物进行药物敏感性试验。结果显示,从310份疑似鸡病料中分离鉴定出34株致病性沙门氏菌;这些分离菌株中有A群1株、C2群1株、B群15株和D群14株,另有3株未定型,其中以B群鼠伤寒沙门氏菌和D群鸡白痢沙门氏菌为优势菌株;34株分离株均对美洛培南、亚胺培南、大观霉素和安普霉素敏感,对氯霉素、卡那霉素、庆大霉素的耐药率小于10%,对阿莫西林、链霉素、氟甲喹、噁喹酸、磺胺甲噁唑、四环素和呋喃妥因耐药率介于50%和90%之间,而对青霉素、苯唑西林、夫西地酸、利福平和甲硝唑的耐药率达到100%,并且存在多重耐药现象。结果表明,鸡源致病性沙门氏菌的流行菌株具有一定的地域性,当前广西以鼠伤寒沙门氏菌和鸡白痢沙门氏菌为主,流行菌株耐药性严重,应高度关注。     

Isolation,Identification and Analysis of Serotype and Antibiotic Susceptibility of Pathogenic Salmonella from Chickens

To investigate the situations of predominant strain and antibiotic resistance of pathogenic Salmonella from chickens in Guangxi Zhuang Autonomous region, Salmonella was pre-enriched and isolated from tissues of clinical suspected chickens, and the Salmonella isolates were identified by biochemical test using ID 32E System for the identification of Enterobacteriaceae of VITEK System ATB Expression, serotypes were determined by slid agglutination test, antibiotic susceptibility was analyzed by ATB VET Susceptibility Test Strip of Enterobacteriaceae antibiotics.The results showed that 34 Salmonella strains were obtained from 310 clinical samples, of which 1 strain belonged to A serogroup, 1 to C2 serogroup, 15 to B serogroup, 14 to D serogroup and 3 to untyped serogroup, and S.typhimurium of B serogroup and S.pullorum of D serogroup were the predominant serotypes.All Salmonella isolates were sensitive to meropenem, imipenem, spectinomycine and apramycine, and the resistance rates to chloramphenicol, kanamycine and gentamicine were less than 10%, and the resistance rates to amoxicillin, streptomycine, flumequine, oxolinique, sulfamethizol, tetracycline and nitrofurantoine ranged between 50% and 90%, while the resistance rates to penicilline, oxacilline, fusidique, rifampicine and metronidazole reached to 100%.The results indicated that the serotype distribution of pathogenic Salmonella from chickens exhibited regional characteristics, and S.typhimurium and S.pullorum were the predominant serotypes in Guangxi Zhuang Autonomous region, and antibiotic resistance of Salmonella isolates was very serious which should be highly concerned.     

河南省鸡源结肠弯曲杆菌的分离鉴定及耐药性分析

[目的]掌握河南省鸡源结肠弯曲杆菌的分布和对抗菌药物的耐药情况。[方法]从养殖场抽取鸡泄殖腔拭子460份进行结肠弯曲杆菌分离培养,采用PCR、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析。[结果]共分离结肠弯曲杆菌42株,分离率为9.13%;分离的结肠弯曲杆菌对环丙沙星、萘啶酸、阿奇霉素耐药严重,耐药率分别为95.24%、90.48%、71.43%。[结论]河南省鸡源结肠弯曲杆菌耐药情况较为严重,应规范使用抗菌药物。     

鸡源绿脓杆菌的分离鉴定及药敏试验

为确诊引起秦皇岛某鸡场细菌性疾病的主要病原菌,分析其耐药情况,为临床用药和治疗提供依据,本试验对送检的病死鸡肝脏中分离得到的4株菌进行形态特征观察、生化鉴定、免疫荧光染色观察、细菌16S rRNA基因PCR扩增与测序分析及药敏试验.结果显示,4株分离菌均为革兰氏阴性、带绿色荧光的短杆菌,PCR扩增出的特异性条带与预期大小相吻合,确定为绿脓杆菌.药敏试验结果显示,分离株对庆大霉素、阿米卡星、大观霉素、头孢他啶、头孢曲松、左氧氟沙星、恩诺沙星、氟苯尼考、多黏菌素B和磷霉素高度敏感,对四环素和强力霉素中度敏感,而对新霉素、头孢噻肟、头孢噻吩、阿莫西林、氨苄西林、红霉素、复方新诺明和磺胺甲氧异唑耐药.提示,该分离菌对常用抗生素耐药情况严重,养殖场应根据药敏试验结果选择敏感药物进行合理用药.     

Isolation,Identification and Drug Susceptibility Test of Pseudomonas aeruginosa in Chickens

In order to detect the main bacterial pathogens and analyze the drug resistance for providing therapeutical guidance for drug administration,4 stains were isolated from death chickens of a breeding chicken farm in Qinhuangdao area.All 4 isolates were identified by morphological characteristics,biochemical test,immunofluorescent staining,amplification of 16S rRNA genes by PCR,sequence analysis and drug susceptibility test.The results showed that all 4 isolates were gram-negative,bacillus brevis with green fluorescent,and the sequence of 16S rRNA gene of isolates were analyzed and test results showed that specific amplified band was consistent with the expected size.The isolated bacteria were identified to be Pseudomonas aeruginosa.Results of drug susceptibility test indicated that the bacterial isolates were highly sensitive to gentamycin,amikacin,spectinomycin,ceftazidine,ceftriaxone,levofloxacin,enrofloxacin,florfenicol,polymyxin B and fosfomycin,intermidiate sensitive to tetracycline and doxycyclin,resistant to neomycin,cefotaxime,cephalothin,amoxicillin,ampicillin,erythromycin,trimethoprim-sulfamethoxazole and oxygen sulfamethoxazole isoxazole.The results suggested that the resistances of Pseudomonas aeruginosa isolates to commonly used antibiotics were serious.So antibiotics should be reasonably selected based on the result of drug susceptibility test in this farm.     

牛源抗氧化芽孢杆菌的分离鉴定及生物特性研究

【目的】从奶牛瘤胃中分离具有抗氧化能力且耐受性好的芽孢杆菌,为牛源益生菌作为抗氧化添加剂使用提供理论依据及参考。【方法】采集3头成年荷斯坦奶牛瘤胃内容物,通过细菌分离纯化、形态观察、生化检测及16S rDNA分子检测进行鉴定,同时检测筛选菌株的超氧自由基和羟自由基清除率、耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的耐药性。【结果】从奶牛瘤胃液中共获得了12株菌,通过特异性培养基与革兰氏染色共筛选出5株芽孢杆菌(X-1～X-5)。对5株芽孢杆菌进行分子鉴定,确定X-1为热噬淀粉芽孢杆菌,X-2为短小芽孢杆菌,X-3为解蛋白芽孢杆菌,X-4为枯草芽孢杆菌,X-5为沙福芽孢杆菌。抗氧化能力检测结果显示,5株菌均具有一定的抗氧化能力,X-5菌株抗氧化能力最高,超氧自由基和羟自由基清除率分别达到73.81%和73.54%。当pH为2.5时,5株芽孢杆菌存活率均在25%以上;胆盐浓度为0.6%时,5株芽孢杆菌存活率均在60%以上,说明菌株具有良好的耐受性。药敏试验结果显示,试验分离出来的大多数菌株对氧氟沙星、呋喃妥因、红霉素等高度敏感;对头孢呋辛、头孢噻肟、链霉素等耐受;对卡那霉素、环丙沙星、氨苄西林等中度敏感。...     

鱼源蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为探究鱼源蜡样芽孢杆菌的致病性和耐药性及指导科学用药,本试验采用形态学观察、生理生化特性分析、16S rDNA基因扩增及系统进化树构建等方法鉴定分离菌,人工感染试验确定分离菌的致病性,耐药基因检测和药敏试验确定菌株耐药性。结果显示,分离菌株形成边缘不规则、不光滑的乳白色菌落,为需氧型革兰氏阳性菌。葡萄糖、硝酸盐、明胶液化等生化反应为阳性,木糖、阿拉伯糖、甘露醇等生化反应为阴性。16S rDNA基因片段长度为1 457 bp,在系统发育树中,分离菌与蜡样芽孢杆菌RTR菌株亲缘关系最近,与蜡样芽孢杆菌的同源性均达到99%以上,从而综合判定分离菌株为蜡样芽孢杆菌。人工感染试验发现,分离菌株对黄颡鱼有一定的致病性。耐药基因检测结果显示,分离菌株中检测出Sul1和Sul2两种耐药基因。药敏试验发现,该菌株对庆大霉素、哌拉西林、米诺环素等敏感,对头孢哌酮中度敏感,对青霉素、头孢曲松、氨苄西林等耐药。本试验结果为有效防控蜡样芽孢杆菌感染的疾病提供了科学参考资料。