精浆对猪精子冷冻效果影响的研究

为优化猪精子冷冻技术,提高解冻后精子的活力和受精能力,本试验分别以含精浆浓度为10%、20%和30%的冷冻保护剂处理精子,以冷冻前、解冻后精子活力和质膜完整性,解冻后精子进行体外受精(IVF)的卵裂率和囊胚率等作为检测指标,同时以含有卵黄的Tris-柠檬酸－葡萄糖(Tris-citric acid-glucose,TCG)冷冻基础液作为对照研究精浆对猪冷冻精子的保护作用。结果显示,在含有10%精浆浓度的稀释液中,冷冻前质膜完整性,解冻后精子活率、质膜完整性、IVF囊胚率相对于对照组均显著提高(P<0.05);当含有10%精浆的冷冻精液解冻后用于人工授精时,与配母猪妊娠率、窝产仔数、窝产活仔数等仍显著低于鲜精授精组(P<0.05)。上述结果表明,含10%精浆的冷冻保护剂能提高精子的冷冻后活力和IVF胚胎发育率,但用于人工授精配种与鲜精相比还有一定差距。     

精浆中主要细胞因子对精子质量的影响

精浆中发现的细胞因子有IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-11、IL-12,TNF-α,INF-γ,G-CSF、M-CSF。其中IL-1能降低顶体反应率和冻融精子存活率。IL-2对精子顶体酶和一氧化氮合酶有明显抑制作用。IL-8能引起白细胞聚集而释放超氧化物。IFN及TNF-α可以影响精子的活力和前向运动速率。本文就几种细胞对精子品质的影响作简要综述。     

CLC对冷休克和冻融猪精子活力及线粒体膜电位的影响

来自3头公猪的混合精液(n=5)用于本次试验。试验用β-环糊精胆固醇包合物(CLC)作为冷冻保护剂,分对照组和0.75,1.5,3.0g/L CLC等3个试验组,检测冷休克及冻融精子的活力及线粒体膜电位。结果显示:用CASA分析,添加1.5g/L CLC的试验组精子活力显著好于其他试验组(P<0.05);利用JC-1对精子进行荧光染色分析,在4,17,-196℃下添加1.5g/L CLC的试验组精子线粒体膜电位显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:在稀释液中添加CLC能提高冻融后精子的活力和减少线粒体的损伤。     

稀释液中添加海藻糖对猪冷冻精液质量参数和活性氧的影响

本试验旨在探讨海藻糖对猪精子冷冻效果以及精子内活性氧(ROS)的含量影响。试验分对照组和4个海藻糖处理组(0.025,0.05,0.1和0.2 mol/L)。精子冷却后,添加0.1 mol/L海藻糖处理组精子活力显著(P<0.05)高于对照组,而精子内和稀释液中各组间ROS发生量都没有显著的差异。精子冷冻解冻后,添加0.05 mol/L海藻糖处理组的精子活力显著(P<0.05)高于对照组;添加0.05 mol/L和0.1 mol/L海藻糖处理组的精子生存率显著(P<0.05)高于对照组;添加0.1 mol/L海藻糖处理组顶体完整的精子百分比显著(P<0.05)高于对照组;4个海藻糖处理组膨胀精子百分比都显著(P<0.05)高于对照组;添加0.025 mol/L海藻糖处理组ROS水平显著(P<0.05)低于对照组。结果表明:海藻糖对精子冷冻保存是有益的,且能抑制精子内ROS的发生,但它的作用机制有待于进一步的研究。     

冷冻处理对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响

为了检测冷冻处理对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化(PTP)水平的影响,试验将采用手握法采集的精液作为试验材料,对精子进行不同时间的冷冻处理,解冻后进行间接免疫荧光处理,对冻融精子PTP水平进行研究。结果表明:冷冻处理的精子PTP水平变化不明显;冷冻处理后的精子PTP位点仍然主要集中在精子颈部,这与未经处理的精子大体一致,不同的是冷冻处理组磷酸化程度加深,而且随着时间的延长精子尾部出现微弱的磷酸化位点。     

谷氨酰胺替代部分甘油对冻融猪精子获能和体外受精能力的影响

本试验旨在探索用谷氨酰胺（Gln）替代部分甘油对冻融猪精子体外获能和受精能力的影响,试验分为6组：3%甘油对照组和5个处理组（Ⅰ~Ⅴ组：2%甘油＋谷氨酰胺（0、20、40、80和100 mmol/L））。对冻融松辽黑猪精子的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、鱼精蛋白水平、获能及体外受精等指标进行了检测。结果显示,用谷氨酰胺替代部分甘油均对冻融精子质量有一定的改善作用,改善的程度受谷氨酰胺浓度的影响。与对照组相比,Ⅰ组精子的质量参数均显著下降（P<0.05）;与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子活力、顶体完整性和活率显著提高（P<0.05）,Ⅲ组精子线粒体膜电位显著提高（P<0.05）,Ⅴ组精子活力、质膜完整性、顶体完整性、活率和线粒体膜电位均显著提高（P<0.05）。说明用谷氨酰胺替代部分甘油对精子质量具有很大的影响,且当谷氨酰胺为100 mmol/L时可得到更高质量的精子,因此,后续试验使用浓度为100 mmol/L的谷氨酰胺进行研究。与对照组相比,2%甘油＋100 mmol/L谷氨酰胺处理组精子鱼精蛋白缺失率显著下降（P<0.05）,精子获能无显著差异（P>0.05）,但胚胎卵裂率显著提高（P<0.05）。综上所述,谷氨酰胺可作为一种新型冷冻保护剂替代部分甘油来提高猪精液的质量,并降低甘油对猪精液的毒性作用,为猪精液的冷冻保存及商业化生产提供技术支撑。     

鸵鸟卵黄低密度脂蛋白对猪精子冻后品质的影响

在家畜精液冷冻中,卵黄被广泛应用,且其中的低密度脂蛋白(LDL)对精子起主要保护作用。本研究利用含6%、7%、8%和9%鸵鸟卵黄LDL配制的稀释液制作猪细管冷冻精液,分析鸵鸟卵黄LDL对冷冻-解冻后猪精子质量参数的影响。结果表明:在含不同浓度鸵鸟卵黄LDL的稀释液中,8%LDL的稀释液冷冻效果最好,冻后精子活率平均可达52.13%,显著高于其他组(P<0.05);精子顶体完整率平均为58.33%,质膜完整率为72.38%,与其他处理组相比差异显著(P<0.05)。但与鸡蛋卵黄LDL和鸽子蛋卵黄LDL处理组相比,鸵鸟卵黄LDL处理组冷冻-解冻后猪精子质量参数相对较低。本研究表明,虽然鸵鸟卵黄LDL在冷冻过程中对猪精子具有一定的保护作用,但相对于鸽子蛋和鸡蛋卵黄LDL效果并不理想。     

稀释液中添加PCS对冷冻保存过程中山羊精子质量的影响

笔者以绒山羊为试验动物,在卵黄稀释液中添加胆固醇硫酸脂(PCS),研究了在冷冻过程中PCS对精子质量的影响.添加PCS共设计了0.15,0.10,0.50 g/100 mL的添加量,总体分析以0.10 g/100 mL添加量为最佳,EY试验组显著好于EY对照组.其中,EY组解冻后精子活率、膜完整率、顶体完整率分别是34.94%、39.17%、75.24%;EY对照组分别是28.74%、30.70%、64.70%.     

稀释液中添加棉子糖对冻融后绵羊精液品质的影响

本试验目的是研究稀释液中添加不同浓度的棉子糖对冻融后绵羊精液品质的影响。选用10只健康乌珠穆沁种公羊,采集精液经检验合格在37 ℃下混匀,精液样品平均分成5份,用含有0、5、10、15、20 mmol/L的不同浓度棉子糖稀释液稀释。采用0.25 mL细管法冷冻,将冷冻后的细管精液置于37 ℃水浴锅中解冻15 s后进行相关指标评价及酶(SOD、GSH、MDA、GSH-Px和CAT)的测定。结果表明,当棉子糖的添加量为15 mmol/L时精子活率显著高于对照组(P＜0.05),畸形率显著低于对照组(P＜0.05),弯尾率显著高于对照组(P＜0.05),SOD活力显著提高(P＜0.05),MDA也显著低于对照组(P＜0.05)。     

冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂对梅花鹿冻融精子质量的影响

【目的】探究在冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂代替10%卵黄对梅花鹿精液冷冻保存效果的影响,为梅花鹿人工授精体系的完善提供参考。【方法】采用电刺激法采集梅花鹿精液,以精液冷冻稀释液中分别添加1%、2%、3%、4%和5%大豆卵磷脂代替10%卵黄作为试验组,添加20%卵黄作为对照组,分别进行各组精液冷冻保存。5 d后,进行精液解冻,检测解冻后各组精子的活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、存活时间,筛选合适浓度的大豆卵磷脂。选取4～5岁健康雌性梅花鹿,肌肉注射300 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)和0.4 mg氯前列醇钠进行同期发情处理,发情后第20 h用20%卵黄组与筛选出的大豆卵磷脂组冻精进行人工输精,输精后30 d使用B超检测仪检测妊娠情况,统计妊娠率。【结果】与对照组相比,1%大豆卵磷脂组冻融后的精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率及线粒体活性均显著提高(P<0.05);随着稀释液中大豆卵磷脂浓度的增加,其冻融后精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率以及线粒体活性呈下降趋势,精子存活时间也随浓度的增加而减少。1%大豆卵磷...     

不同蛋白质水平下种公猪精液品质与血液生化指标的相关性研究

通过对成年健康大约克公猪饲喂不同能量、蛋白质含量的饲料,研究不同能量、蛋白质含量条件下血液生化指标(包括内分泌激素和其他血液指标)与精液品质的相关性。结果表明:在本次试验中,能量对精液品质和血液生化指标的影响差异不显著(P>0.05);hTsh浓度与精子活率存在相关性且受蛋白质水平的影响;ALB浓度与精子密度的相关系数随着蛋白质水平的升高约有下降,但它与精子畸形率的相关系数却上升。     

海藻糖替代部分甘油对延边黄牛冻融精子质量的影响

【目的】探讨是否可以通过补充海藻糖来降低冷冻保护剂中甘油的浓度,从而提高冻融精子的质量。【方法】分别用6%甘油(Ⅰ组)及3%甘油+0、50、100和150 mmol/L海藻糖(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组)处理精子,用精子-微生物动(静)态图像检测分析系统(CASA)检测冻融精子的活力、质膜完整性和顶体完整性及动力学相关参数,筛选出最佳海藻糖处理浓度用于后续试验。通过Western blotting方法检测精子蛋白酪氨酸磷酸化水平评价精子获能状态,Hoechst 33342/PI/JC-1联合染色法检测精子的活率及线粒体膜电位,色霉素A₃(CMA₃)染色法检测精子DNA的完整性,部花青540(M540)和Yo-Pro-1染色检测精子膜脂质紊乱水平。【结果】与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子的活力、质膜完整性、顶体完整性以及曲线速度(VCL)和直线率(STR)均显著下降(P<0.05),Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组组精子的活力、VCL、直线速度(VSL)、平均路径速度(VAP)、直线性运动(LIN)和STR均显著升高(P<0.05)。因此,后续试验选用100 mmol/L海...     

牛磺酸对种公猪精液品质、血清激素含量及精浆抗氧化能力的影响

本试验旨在研究牛磺酸(Tau)对种公猪性欲、精液品质、血清激素含量及精浆抗氧化能力的影响。选用24头年龄、体重相近的健康成年大约克夏种公猪,随机分为4个组,每组6个重复,每个重复1头猪。各组分别饲喂牛磺酸添加水平为0(对照组)、2、4、6 g/kg的饲粮,试验期90 d,分为1~45 d和46~90 d 2个阶段。结果表明:1)试验46~90 d时,添加6 g/kg牛磺酸显著提高了种公猪的性欲(P0.05)、采精量(P0.01)、精子活力(P0.05),4 g/kg牛磺酸改善了精子密度和精子畸形率(P0.05);2)与对照组相比,6 g/kg牛磺酸水平组极显著提高了种公猪血清促黄体素(LH)含量(P0.01),显著提高了睾酮(T)含量(P0.05);3)试验46~90 d时,6 g/kg牛磺酸显著降低了种公猪精浆丙二醛(M DA)含量(P0.05),显著提高了超氧化物歧化酶(SOD)活力(P0.05),4 g/kg牛磺酸显著提高了谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力(P0.05)。由此可见,饲粮中长期添加牛磺酸可以调控种公猪血清激素含量,增加精浆抗氧化能力,进而增强种公猪性欲,提高种公猪精液品质,本试验条件下牛磺酸适宜添加水平为6 g/kg。     

日粮能量、蛋白水平对辽宁绒山羊精液品质的影响

本试验以辽宁绒山羊种公羊为对象研究了日粮能量、蛋白质水平对种公羊精液品质的影响.采用单因子随机试验设计,将18只成年种公羊按照采精量、产绒量和年龄平均分为3组,每组6只.日粮设两种蛋白质水平(360 g和310 g),能量设两个水平(19 MJ和16 MJ),组合成3种饲粮:高能量高蛋白组(HEHP)、高能量低蛋白组(HELP)和低能量低蛋白组(LELP).3组种公羊分别随机对应3种饲粮.结果表明,日粮蛋白质水平显著影响采精量、密度、有效精子数和冻精产量,日粮能量水平对采精羊百分率有显著影响,日粮能量和蛋白质水平对鲜精活力和冻精活力无显著影响,高能量高蛋白组的精子产量、采精羊百分率、精子活力最高.种公羊配种期日粮能量蛋白质的适宜水平分别为19 MJ和360 g.     

不同添加剂及剂型对猪冷冻精液品质的影响

试验旨在研究咖啡因、维生素E、超氧化物歧化酶(SOD)及剂型对猪冷冻精液品质的影响。采用添加了不同浓度咖啡因、维生素E、超氧化物歧化酶(SOD)的冷冻稀释液和3种剂型的冻精管进行精液冷冻。3种添加剂对冻精解冻后的精液品质都有一定的促进作用,试验中其添加最适浓度分别为:咖啡因为0.2 mg/mL,维生素E为0.4 mg/mL,SOD为300 IU/mL;0.25mL剂型的冻精解冻后精子品质最好。咖啡因、抗氧化剂及冻精管剂型对冷冻精液的效果有一定的影响。     

Influence of Boar Seminal Plasma on the Distribution of Spermatozoa in the Genital Tract of Gilts

The main purpose of the present study was to investigate whether boar seminal plasma affects the transport of spermatozoa in the genital tract of oestrous pigs or not, with special reference to the sperm transport into the oviducts. Altogether 17 gilts were used in three experiments.Experiment I. In nine gilts one uterine horn was injected surgically with 10¹⁰ spermatozoa suspended in seminal plasma and the other uterine horn with 10¹⁰ spermatozoa suspended in TESNaK-glucose buffer solution. The sperm deposition was performed under general anaesthesia. The gilts were slaughtered 1–2 or 4–6 h after insemination. The genital tract was removed and the numbers of spermatozoa determined in oviducts and in uterine horns.Experiment II. The insemination doses were prepared exactly as in Experiment I. Approx. 24 h before insemination Polyvinylchloride cannulas were inserted into the uterine lumen of the horns, drawn via the midventral incision at linea alba subcutaneously to cutaneous incisions ventral to the vulva opening. One cannula was placed in each uterine horn. At standing heat the insemination doses were slowly injected through the cannulas. The gilts were slaughtered 1 h after insemination and the numbers of spermatozoa within the genital tract were counted.Experiment III. In three gilts under general anaesthesia the uterine horns were ligated 10 cm from the uterotubal junction. The semen doses (containing 2 × 10⁹ spermatozoa), prepared as in Experiment I, were deposited into the uterine horns anterior to the ligatures through a cannula. The gilts were slaughtered 1 h after insemination, and the numbers of spermatozoa within the oviducts and ligated part of the uterine horns were counted.In all three experiments more spermatozoa were, on average, recovered in the oviducts connected to uterine horns inseminated with spermatozoa suspended in seminal plasma. In Experiments I andII this was the case for 10 of 14 gilts and in Experiment III for all the three gilts. It is therefore suggested that boar seminal plasma pro¬motes sperm transport into the oviduct of oestrous pigs. The back¬ground mechanism for this is discussed.     

鸵鸟卵黄对猪精子冷冻后质量的影响

为了提高猪冷冻精液品质和精子抵抗低温打击的能力,本研究以5%、10%、15%、20%和25%等不同浓度的鸵鸟卵黄作为冷冻保护剂,以20%的鸡蛋卵黄和20%的鸽蛋卵黄为对照,将冷冻-解冻后的精子活率、质膜完整率和顶体完整率作为评价指标,分析鸵鸟卵黄对猪精子的抗冷冻保护作用。结果表明：稀释液中添加20%鸽蛋卵黄时,精子活率、顶体完整率和质膜完整性分别为52.11%、55.62%和54.94%,显著高于其他组（P〈0.05）。虽然稀释液中添加15%鸵鸟卵黄时,冷冻-解冻后精子活率、顶体完整率和质膜完整率显著高于5%、10%、20%和25%鸵鸟卵黄组,但仍然显著低于稀释液中添加20%鸽蛋卵黄处理组。本研究表明,鸵鸟卵黄在冷冻过程中对猪精子具有一定的保护作用,但相对于鸽子蛋和鸡蛋卵黄效果并不理想。