5株解淀粉芽孢杆菌的益生特性及抑菌活性研究

【目的】探究5株自筛解淀粉芽孢杆菌(YN-BA1、YN-BA2、YN-BA3、YN-BA4、YN-BA5)的生长曲线、pH和胆盐耐受性、抑菌活性和抗生素敏感性等特性,为将其开发成微生态制剂应用于养殖中提供理论依据。【方法】采用比浊法测定解淀粉芽孢杆菌生长曲线,将5株解淀粉芽孢杆菌分别接种于经盐酸配制成pH为2.0、3.0、4.0和7.0的LB肉汤中培养2 h和0.3%胆盐环境中培养5 h,以评价其在人工胃肠液中的耐受性;采用琼脂打孔法测定体外抑菌活性,采用KB纸片法测定抗生素敏感性。【结果】5株解淀粉芽孢杆菌在经过0～2 h的缓慢生长和6～8 h生长速度降低后,其生长量快速上升,进入对数生长期;36 h后生长量下降,进入衰退期。5株解淀粉芽孢杆菌均具有不同的耐酸、耐胆盐能力,其中YN-BA2菌株在pH 2.0、3.0、4.0存活率分别为42.10%、51.50%和74.67%,均高于另外4株菌;在0.3%胆盐处理5 h后,YN-BA2菌株存活率为51.00%,高于另外4株菌,表明YN-BA2菌株的耐受力最高。5株解淀粉芽孢杆菌对肠炎沙门氏菌(YN-S1、YN-S2)、鸡白痢沙门菌(YN...     

地衣芽孢杆菌的分离鉴定及其抑菌活性分析

为了研究不同来源的地衣芽孢杆菌对常见致病菌的抑菌效果等生物学特性,试验采用细菌形态学、生理生化、16S rRNA基因测序、系统发育树分析、牛津杯抑菌试验等检测技术,对5株不同来源(鸡粪、羊粪、牛瘤胃内容物、猪肠内容物及土壤)的地衣芽孢杆菌进行了分离鉴定及体外抑菌活性检测。结果表明：5株分离株B₁₇(鸡粪)、B₃₀(羊粪)、B₃₂(牛瘤胃内容物)、B₃₅(猪肠内容物)和B₃₈(土壤)均可在LB固体培养基上生长,其中有3株不同来源的分离株B₃₀、B₃₅和B₃₈菌落形态相同;镜检可见分离株均为革兰氏阳性杆菌、均有近中生的孢子,符合芽孢杆菌的菌体特征;生理生化特性与芽孢杆菌相符;PCR扩增均得到约为1 500 bp的目的片段;所有分离株与GenBank中的地衣芽孢杆菌在同一簇,均鉴定为地衣芽孢杆菌;在5株地衣芽孢杆菌中,除猪源地衣芽孢杆菌B₃₅外,其余4株均有抑菌作用,羊源及牛源地衣芽孢杆菌B     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析,同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线,活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性,牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示,该菌生长4 h时进入对数生长期,20 h后生长趋于稳定,进入生长稳定期;同时该菌表现出较好的耐酸性,在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%;有较好的耐胆酸盐性,在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现,该菌的发酵产物具有抑菌活性,同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现,该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性;其抑菌活性及抑菌稳定性较好,具有耐酸碱及耐高温特性。     

鸡芽孢杆菌的分离、鉴定及体外抑菌研究

试验从鸡的粪便中分离到8株芽孢杆菌，经过生化试验初步结果为：A1、A2、A3和A7为巨大芽孢杆菌，A4为地衣芽孢杆菌，A5、A6和A8为蜡样芽孢杆菌。采用牛津杯法测定这8株芽孢杆菌的发酵液、代谢产物和菌体对病原菌的抑菌活力，结果表明：这8株芽孢杆菌对大肠杆菌和葡萄球菌都有一定的抑制作用，其中A2、A4和A6抑菌效果较好。这8株芽孢杆菌发酵液的抑菌效果要比代谢产物要好，而其代谢产物的抑菌效果要比菌体要好。     

奶牛阴道分泌物中枯草芽孢杆菌的分离鉴定及抑菌效果分析

从奶牛阴道分泌物中分离出一株细菌,经过菌落形态特征、生理生化鉴定初步判定为芽孢杆菌属;根据16S rRNA基因序列及其同源性分析结果,证实分离得到的Y4菌株是枯草芽孢杆菌,与GenBank上的枯草芽孢杆菌16S rRNA基因序列同源性为99.6%。对此菌株进行抑菌试验,发现该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌有较好的抑菌效果。该研究为将来研制益生菌制剂防治奶牛生殖道疾病提供了物质基础。     

短小芽孢杆菌B102的分离鉴定、抑菌活性及安全性试验研究

试验旨在研究短小芽孢杆菌B102的分离鉴定、抑菌活性剂及安全性.在细菌分离培养过程中,发现1种具有抑菌活性的革兰氏阳性芽孢杆菌,命名为B102菌株.在此基础上,提取B102菌体基因组DNA,进行16S rRNA PCR扩增、测序,进行序列同源性比较,建立遗传发育树.应用常规的牛津杯法、平皿药敏试纸片扩散法、小鼠饲喂试验...     

1株蜡样芽孢杆菌的分离鉴定及其生物学功能研究

试验从新鲜猪场粪便中筛选获得1株蜡样芽孢杆菌疑似菌株,进行16S rDNA分析、形态学鉴定、自动化微生物鉴定与药敏检测系统综合分析.结果 显示,蜡样芽孢杆菌疑似菌株为蜡样芽孢杆菌,命名为W21-B5,对其生物学功能进行研究,发现其具有较强的产蛋白酶和产淀粉酶功能.     

一株高效降解蚕蛹蛋白的菌株筛选与初步鉴定

筛选、鉴定能高效降解缫丝蚕蛹蛋白的菌株,用于提高缫丝蚕蛹生产食品和动物饲料的营养价值。从蚕蛹储藏车间及周围的土壤中收集细菌,经富集培养、干酪素平板初筛和发酵蚕蛹蛋白复筛,获得一株产蛋白酶活性较高的菌株,命名为CY21。该菌株在32℃、pH 7.0条件下培养60 h后所产蛋白酶的比活力可达到272.7 U/mg。通过形态学观察、经典生理生化试验以及16S rDNA序列系统发育分析,初步确定该菌株为芽孢杆菌属(Bacillus)与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)亲缘关系很近的一个菌株。     

禽源烟曲霉菌和黄曲霉菌的分离鉴定及几种中药抑菌作用研究

【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的体外抑菌活性。【结果】成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示,雏鸡出现与病鸭相似的症状,剖检可见肝脏长出灰白色结节,且病变组织出现肉芽肿病变,说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC₈₀结果显示,石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC₈₀分别为8、16、32和64μg/μL,辣蓼、白头翁和蒲公英均为128μg/μL;黄曲霉菌的MIC₈₀结果显示,石菖蒲、决明子和黄柏MIC₈₀分别为8、16和32μg/μL,苦参和辣蓼均为64μg/μL,白头翁和蒲公英均为128μg/μL。体外药敏试验结果显示,在石菖蒲浓度为16...     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及相关特性的初步研究

为了获得适应当地环境的益生菌株,从当地土壤中分离得到一株芽孢杆菌,经鉴定为蜡样芽孢杆菌.经安全性试验及抗逆性试验,研究了其在不同pH值、不同温度下的生长情况,并进行了药敏试验.结果表明,该菌无毒性,具有抗逆性,最适pH值为6～8,最适宜温度为37℃,可作为益生菌进行微生态制剂方面的进一步研究.     

抑制黄曲霉乳酸菌的筛选与鉴定

黄曲霉是玉米(Zea mays L.)青贮过程的主要污染物之一,本研究旨在从玉米青贮饲料中分离筛选出能够抑制黄曲霉菌生长的乳酸菌,为改善和提高青贮饲料品质提供优良菌种。本试验采用双层平板法,从玉米青贮饲料中筛选抑制黄曲霉的菌株,并对其进行生理生化鉴定及同源性分析,构建系统发育树,明确各菌株的分类地位。结果表明：从青贮发酵不同阶段筛选得到50株乳酸菌,其中有7株乳酸菌对黄曲霉有明显抑制作用(P<0.05),抑菌圈直径均大于3.60 cm,均为革兰氏阳性同型发酵乳酸菌,7株乳酸菌中Q39(49.40%)和Q40(49.60%)抑菌效果最好,抑菌圈直径为4.15 cm和4.17 cm,显著高于其他5株乳酸菌(P<0.05);菌株Q11,Q28,Q40,Q44与22种碳水化合物作用均呈阳性,菌株Q39和Q49与鼠李糖作用呈阴性,与松三糖反应呈弱阳性,菌株Q13相较于其他6株菌株对于碳源的利用情况较弱;经16S rDNA鉴定确定菌株Q39和Q49为植物乳杆菌,Q11,Q13,Q29,Q40,Q44为戊糖乳杆菌。菌株Q39和Q40可作为全株玉米青贮发酵的备选添加菌株。     

一株芽孢杆菌的分离鉴定及其益生潜质分析

 从健康肉鸡的粪便中分离出一株BF3芽孢杆菌,经培养特征、形态观察、生理生化试验以及16SrDNA序列分析相似度为99%,确定该菌株为枯草芽孢杆菌,对该株芽孢杆菌对肠道致病菌的拮抗作用进行研究。结果表明BF3菌株在培养过程中,可以抑制鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌的生长。拮抗作用的强弱与芽孢杆菌和致病菌的接种时间有关。先接种芽孢杆菌后接种致病菌,拮抗作用最强;芽孢杆菌和致病菌同时接种次之;先接种致病菌后接种芽孢杆菌,拮抗作用最弱。并且BF3菌株代谢产物对鸡白痢沙门氏菌和鸡大肠杆菌具有非常明显的拮抗作用。     

雏鹅感染烟曲霉鉴定与病理组织学观察

为确定荣昌3个养鹅场雏鹅感染的真菌种类,本研究采集病死雏鹅肺脏病变组织样本进行病原分离,对分离的真菌进行了形态学鉴定和ITS2序列PCR扩增及测序分析。结果显示:分离的真菌菌落颜色、菌丝结构、孢子无性繁殖方式均符合烟曲霉的特征,ITS2序列与GenBank的烟曲霉AF454113、AF454114、AY660923菌株同源性均为100%。分离菌株雏鹅回归试验显示,感染雏鹅气囊有真菌结节,肺泡壁增厚,毛细血管淤血,支气管管腔有脓性纤维蛋白或粘液,肝细胞变性坏死,淋巴细胞浸润等病变。肺脏主要表现为非典型肺炎,肝脏主要表现为实质性肝炎。本研究为临床诊断曲霉病提供了实验依据。     

一株抑菌芽胞杆菌的分离鉴定及产细菌素性能检测

采用常规微生物学方法从新鲜鸡粪中分离得到1株抑菌效果较好的菌株BX-6。结合菌落形态特征、生理生化特性及菌株特异性序列分析等手段,确定其分类归属,并采用管碟法对所产细菌素的抑菌特性进行了检测。结果表明,菌株BX-6为枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）。菌株在发酵过程中产生一定量的H2O2类抑菌物质,其所产细菌素具有较好的热稳定性、pH值耐受性,对大部分蛋白酶敏感,对鸡白痢沙门氏菌C79—13、鸡大肠杆菌01和金黄色葡萄球菌C56011有较好的抑菌效果,具有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

高产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及产酶特性研究

为了从腐殖质土壤中筛选得到高产纤维素酶菌株,本试验进行了产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其产酶特性研究。首先用羧甲基纤维素钠(CMA-Na)培养基初步分离产纤维素酶菌株,再经过酶活复筛得到一株高产纤维素酶菌株B17。经过形态学和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),并对其发酵产酶条件和酶学性质进行初步研究。试验结果表明,菌株B17的最佳发酵条件为:培养时间3 d、发酵温度35℃、初始pH为6.0,该条件下测得CMC酶活达85.48 U/mL、FPA酶活达59.85 U/mL。酶学性质研究表明:菌株所产纤维素酶最适反应条件为温度50℃、pH为6.0,且具在30～60℃、pH为4.0～7.0范围均具有较高酶活。以上结果表明,本研究所得菌株B17具有较高的开发价值,可应用于农作物秸秆饲料的生产。     

抗香蕉枯萎病菌F2-14菌株的鉴定及其抑菌机理初探

香蕉枯萎病已严重威胁着全球香蕉产业的发展,生物防治是防控香蕉枯萎病的重要途径之一。本研究通过抗香蕉枯萎病活性筛选,得到一株具有高拮抗活性的菌株F2-14。通过生理生化特性、形态特征和基因组ANI值分析,将菌株F2-14归属为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。将菌株F2-14基因组序列与各数据库进行比对分析,表明菌株F2-14基因组中具有产生几丁质酶、葡聚糖酶、蛋白酶等的基因,还含有编码杆菌溶素、儿茶酚型嗜铁素、丰原素、表面活性素等7种抗生素的基因簇。菌株F2-14具有广谱抗真菌活性,且能通过产生次级代谢物致使Foc TR4病菌的细胞壁破裂和细胞膜受损,从而达到抑制Foc TR4病菌的生长。综上所述,贝莱斯芽孢杆菌F2-14菌株在植物抗病方面有着较好的农业应用潜力。     

犬副流感病毒D121004株的分离鉴定及其F基因遗传进化分析

为了给犬副流感病毒(CPIV)疫苗研制提供支持,无菌采集有呼吸道症状病死犬的脑和肺脏样品,处理后接种Marc-145细胞,通过RT-PCR、红细胞吸附试验,对盲传3代的细胞培养液进行鉴定,成功分离到1株CPIV。该病毒能使Marc-145细胞出现细胞病变,且具有吸附鸡红细胞的能力,将其命名为CPIV-D121004株。对该毒株的F糖蛋白全基因进行克隆及核苷酸同源性分析并构建遗传进化树,发现分离株的F基因较为保守,未出现大的遗传变异。今后需要对分离株的免疫原性进行研究,以探究其作为候选疫苗株的潜力。