鹅细小病毒LH株的分离鉴定

采用鹅胚接种方法从南京六合具典型鹅细小病毒病病变的死亡雏鹅体内分离到1株鹅细小病毒(LH 株).在电镜下观察到该病毒液具细小病毒样粒子;8 日龄健康易感雏鹅人工感染后100%发病、死亡,且具有典型鹅细小病毒病临床症状和剖检特征.在琼脂扩散试验中,用感染鹅胚液制备的待检沉淀抗原,能与鹅细小病毒阳性血清发生特异性反应.应用针对GPV VP3特异性引物对LH毒液进行PCR检测,扩增出的片段为1.6 kb,与目的条带大小相符.序列分析发现,扩增产物与已发表的GPV的VP3片段相比较,同源性达99%以上,表明所分离到的LH株是一株鹅细小病毒.     

一株水貂细小病毒分离与鉴定

山东某水貂养殖场发病,经症状与组织病变观察,并结合当地流行病学调查及该养殖场免疫情况初步诊断为水貂细小病毒感染,故采集患病水貂的粪便及病变组织进行实验室诊断.将病料按常规方法处理后提取DNA,经PCR检测获得阳性目的片段为600bp,证明该养殖场为水貂细小病毒感染,进而应用F81细胞进行该病毒的分离培养与鉴定.结果显示,将该培养物盲传3代后,可见典型的水貂细小病毒样细胞病变,并经PCR鉴定为阳性;红细胞凝集谱测定结果显示该细胞毒只可凝集猪红细胞;同时应用对流免疫电泳证明该细胞毒与水貂细小病毒阳性血清出现沉淀线;毒力测定其TCID50与HA效价分别为10-5.68/0.1ml与1:256;最后将细胞培养物接种健康易感水貂,接种后4d出现典型水貂病毒性肠炎的症状与组织病变.因此,实验最终确定该养殖场为水貂细小病毒感染,且成功分离了该毒株.     

犬细小病毒的分离与鉴定

采用细胞培养法对疑似犬细小病毒的粪便和内脏进行了分离和鉴定,并对分离到的病毒进行生物学特性鉴定和动物回归试验。结果共分离到3株CPV,分离株在猫肾细胞F81产生明显细胞病变,血凝效价达1∶27～1∶210,细胞病变能被犬细小病毒阳性血清所抑制,接种幼犬后,分离株3可以引起试验犬发病死亡。     

犬细小病毒的分离与鉴定

从临床表现体温升高、呕吐、血样腹泻、脱水等疑似细小病毒 (Canine Parvovirus,CPV)感染的病犬中 ,采取粪样 8份。应用狗肾传代细胞 (MDCK)增毒 ,其中 6号病料 (CPV6 )在 MDCK细胞上产生脱落、变形、游离等细胞病变 ,且细胞感染性试验发现 ,CPV6对 MDCK的感染性强于对猫肾传代细胞 (CRFK )的感染性 ;核酸型试验证明 ,CPV6毒株的代谢可被 5 -溴脱氧尿核苷 (FUDR)所抑制 ,其核酸属于 DNA型 ;所分离的病毒培养物能凝集猪、猴、马、猫的红细胞 ,凝集效价达 2 6 ～ 2 8,并能被已知犬细小病毒阳性血清所抑制 ,但不能凝集牛、犬、绵羊、兔、小鼠和鸡的红细胞 ;电镜观察病毒粒子外观呈圆形或六边形 ,直径约 2 0～ 2 3nm ;该病毒耐酸、耐热、耐乙醚 ;动物致病性试验表明 ,经口服 1m L ,试验组幼犬第 7天发病 ,采集病犬粪样做 HA试验为阳性反应 ,其凝集猪红细胞的特性能被犬细小病毒阳性血清所抑制。     

猪圆环病毒河南株的分离与鉴定

[目的]为研究猪圆环病毒的分子生物学特征和发病机理奠定基础。[方法]通过无菌操作采集病猪的脾脏和淋巴结,经胰蛋白酶消化处理后接种PK-15细胞,对病毒进行分离和纯化,并通过间接免疫荧光试验对其进行检测。[结果]断奶期的发病猪被毛粗糙、消瘦、精神沉郁、食欲不振,以5~10周龄猪的症状最明显。猪生长发育明显受阻,甚至导致死亡。从病料中和细胞中扩增出约540 bp特异性片段。淋巴结、脾组织细胞核内均有大量无囊膜的病毒粒子,直径约17 nm,呈球状,符合PCV病毒粒子特征。第6代细胞病毒液经间接免疫荧光检测可见PCV特征的荧光斑,而胞浆中无荧光斑,表明毒株有感染性。[结论]该试验中分离的病毒被鉴定为猪圆环病毒。     

猪细小病毒灭活疫苗NJ株毒种分离及鉴定

为防控猪细小病毒病,进行了猪细小病毒灭活疫苗毒种研究。将南京某猪场初产母猪流产胎儿的脾、肺等组织病料处理后接种ST细胞培养,获得了1株猪细小病毒强毒,将分离毒株适当稀释接种ST细胞,经3轮蚀斑纯化获得1株纯净的猪细小病毒NJ株(PPV-NJ株),作为疫苗毒株。将NJ株接种ST细胞培养连续传15代,每代次病毒效价均不低于1 ml 107.25TCID50、血凝素效价不低于29。选择第5代病毒液,灭活后与矿物油佐剂混合乳化制成灭活疫苗,以不同剂量分别免疫豚鼠和后备母猪,用血凝抑制试验(HI)和ELISA检测抗体效价。分别用剂量0.125 ml、0.250 ml和0.500 ml疫苗免疫豚鼠28 d后,各免疫组HI抗体效价均高于28,0.5 ml组HI抗体效价高达211,ELISA抗体均显示阳性(OD630≥0.32),分别用剂量0.5 ml、1.0 ml和2.0 ml疫苗免疫后备母猪后,HI检测结果显示,3个剂量组免疫后1周HI抗体效价高于26,3周后达峰值,至免疫后4个月略有下降,2.00 ml剂量组HI效价最高(211.75)。ELISA检测结果显示,各剂量组在免疫后1周均转阳(OD630≥0.32),免疫后4～18周均维持较高水平。HI抗体效价和ELISA抗体水平与免疫剂量均呈正相关性。结果显示,利用NJ株病毒制备的灭活疫苗具有抗体产生快、效价高等特点,显示出良好的疫苗开发前景。     

丹东地区鹅细小病毒的分离与鉴定

从小鹅瘟爆发的病例中分离出鹅细小病毒（GPV）,经电镜观察、琼脂扩散试验、病毒中和试验、抗血清保护试验鉴定为鹅细小病毒。回归试验结果表明,该病毒的潜伏期为8天,病程为1～3天,病死率达100%。     

犬细小病毒AT-7株的分离与鉴定

通过采集疑似感染细小病毒(CPV)犬粪便,采用同步培养法接种胎猫肾细胞(FK81)进行病毒分离鉴定.通过PCR检测、HA试验、电镜观察、PEG纯化,获得1株犬细小病毒,并命名为AT-7株.感染的F81细胞48 h后出现明显的细胞病变;在感染的F81细胞中扩增出CPV基因的特异性片段;病毒液可凝集猪红细胞,血凝价为1:128,血凝性能被特异性抗体抑制.     

广西猪伪狂犬病病毒GXA株的分离鉴定

从广西某猪场大批死亡的新生仔猪分离1株病毒，该病毒株在PK-15出现细胞病变，在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子，细胞培养物接种家兔出现伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的DNA作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒gp50基因中433-651之间217bp长的特异性片段。分离的病毒为猪伪狂犬病病毒，并将其命名为猪伪狂犬病病毒GXA株。     

雏番鸭细小病毒病病毒分离鉴定

采集以腹泻、呼吸困难及主要症状的雏番鸭肝、脾病科，接种14d龄非免疫番鸭胚，80%胚在3～7d死亡，胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞72h可见细胞圆缩、聚团等变化。收集尿囊液及细胞培养物，以番鸭细小病毒（Muscovy duckling parvovirus,MDPV)阳性血清进行聚苯乙烯乳胶凝集，病料培养物均呈阳性反应，提取病料接种的尿囊液及细胞基因组DNA，用自行设计引物PCR扩增到与设计相符的600bp片段，经酶切鉴定，结果表明克隆到的片段为雏番鸭细小病毒特异性片段，从而初步证明分离到的病毒为雏番鸭细小病毒。     

犬细小病毒CPV-JZ2021株的分离鉴定及遗传进化分析

为研究犬细小病毒的生物学特性和遗传进化情况,从湖北馨爱宠物医院有限公司收集疑似病犬的粪便,无菌处理病料后接种猫肾细胞(CRFK)进行病毒的培养,至出现明显的细胞病变.通过PCR扩增、电镜形态学观察、间接免疫荧光检测、血凝试验等进行病毒鉴定,结果表明,成功分离出一株犬细小病毒,并命名为CPV-JZ2021.该病毒的血凝效...     

二株江西地区猪伪狂犬病病毒的分离与初步鉴定

从江西省两猪场流行病学、临诊症状及病理变化差异较大的仔猪病例中分离到两株有囊膜的正二十面体病毒（命名为ＧＮ９８０１和ＧＮ９８０２）,经鉴定均为伪狂犬病病毒。ＧＮ９８０１毒株对猪的致病性及致鸡胚成纤维细胞的病变作用均比ＧＮ９８０２毒株强。     

果子狸细小病毒的分离与鉴定

用F81细胞从河南送检的患有肠炎的果子狸粪便样品中分离出一株病毒，经形态学、理化学、生物学和分子病毒学实验鉴定是一株CPV-2a的突变株。此毒株在F81细胞上生长，能产生CPV感染的特征性细胞病变，细胞肿胀、变圆、破碎、脱落；病毒粒子二十面体立体对称，直径为20～24nm；无囊膜，能抵抗氯仿的处理，耐酸，耐热，但能被5-IUDR抑制。可凝集猪红细胞，不凝集鸡、豚鼠、大鼠、兔、人“O”型红细胞，能被抗CPV抗体所抑制。设计特异性细小病毒引物扩增VP2基因的两个片段，并进行测序，分析结果表明，该毒株是在CPV-2a的基础上其VP2的第297位氨基酸发生A→S突变，第300位氨基酸发生G→S突变，第301位氨基酸发生T→A突变。该毒株暂定名为PV／GZL/H／1／02。该病毒能感染犬。     

猪2型圆环病毒福建株的分离与鉴定

根据猪圆环病毒GenBank中登录的猪圆环病毒2型(PCV2)特征,设计引物对福建省某地疑似PCV2感染病例进行检测。对阳性病料进行猪圆环病毒分离鉴定,得到一株PCV2,命名为FJ11株。     

猪流行性腹泻病毒的分离培养与鉴定

上海市农业科学院畜牧兽医研究所在上海郊区分离到一株猪流行腹泻病毒，以人工攻毒发病猪的小肠粘膜无菌处理后接种已长成单层的ＶＥＲＯ传代细胞，并在维持液中加入胰酶５０μｇ／ｍＬ和２％的小牛血清。     

河北省某场母猪死胎“猪细小病毒”的分离与鉴定

从河北省某场的母猪流产的死胎中分离到三个病毒株(HH—1、HH—2、HH—3)。均能在PK—15细胞上增殖、继代,引起明显的细胞病变效应,并产生血凝素,凝集豚鼠红细胞,这种血凝性能被抗猪细小病毒血清所抑制。并通过免疫电镜证明,分离株病毒颗粒,具有猪细小病毒的形态持点。故可认为,我们分离到的病毒株,均系猪细小病毒,为省内首次报道。此外,对从现场采集的有死产或不孕史的母猪血清23份做血清学检查,其抗猪细小病毒阳性检出率高达91.3%。从而说明该场初产母猪的异常产仔的原因,显然与猪细小病毒感染有关。     

一株猪圆环病毒2型的分离与分子鉴定

利用PCR技术初步检测疑似PCV2感染的猪肺脏和淋巴结中的病毒.将样品处理后接种于PK-15细胞.从感染PK-15细胞PCR扩增PCV2基因片段,克隆入pMD18-T载体,并进行序列测定和比较.序列分析结果表明,分离病毒的PCR产物与国内多株PCV2核酸同源性大于98%,说明所分离的病毒为PCV2.     

貉细小病毒肠炎细胞毒株（HB-1）的分离鉴定

貉细小病毒(Raccoon dog parvovirus,RDPV)属于细小病毒科细小病毒属,可引起貉细小病毒性肠炎,该病是一种发病率和死亡率很高的急性传染病,给养殖户造成巨大经济损失,严重制约了貉养殖业的健康发展。因此,研制更安全、高效和制备方便的疫苗是迫切需求,也是未来研究的趋势。本研究通过CPV胶体金试纸条对严重腹泻貉的直肠拭子样品进行筛选,阳性样品经处理后在F81细胞中培养;使用聚合酶链式反应、间接免疫荧光试验和电子显微镜观察等方法对其进行鉴定,结果表明,该毒株是一种新毒株,将其命名为HB-1。     

长沙9个犬细小病毒毒株的分离与鉴定

从感染犬细小病毒(CPV)的长沙病犬粪便中分离CPV,采用同步接毒方式,将病毒悬液接种到猫肾细胞(F81),经PCR鉴定,从10份阳性样品中分离到9株CPV,血凝试验显示9株CPV均能凝集猪红细胞,血凝价均超过了27。为进一步分析CPV长沙毒株的VP2分子生物学特征及抗原变异规律,对9个CPV毒株的VP2基因进行克隆、测序及序列分析,结果表明:CPV长沙毒株与全国及世界各地CPV毒株相比,其VP2基因序列同源性超过97%,其VP2基因推导的氨基酸序列同源性超过94%;其VP2基因推导的氨基酸序列有独特的变异,且有独特变异的毒株在基因进化树上处于同一个分支。