Improved Isolation and Culture of Embryonic Germ Cells from Guanzhong Dairy Goat

A total of 219 embryonic-germ-cell-like （EG-like） clumps were derived from 15 selected goat fetuses. Isolation of primordial germ cells （PGCs） based on co-culture with primary goat embryonic fibroblast showed no difference from traditional feeder layer-based culture method used in mouse and human. The putative primary EG colonies were multilayer clumps of compact cells with unclear cell-cell boundaries. Three subculture methods of goat EG-like colony, traditional enzymatic digestion, mechanical cutting and combination of the both, were compared in this study. As a result, EG-like colonies traditionally disassociated with collagenase 1V could be subcultured for up to 4 passages. And the mechanically disaggregated EG-like colonies were successfully maintained 9-12 passages with or without enzymatic treatment. The pluripotency of the EG-like colonies was identified by their specific marker staining, spontaneous differentiation and embryoid bodies （EBs） formation in vitro. Most goat EG-like colonies （〉 80%） were AKP positive and immunocytochemically characterized with positive SSEA-1, Oct-4 and c-kit staining but SSEA-4. Under the condition of delaying passage, goat EG-like cells could differentiate into fibroblast-like, epithelium-like, and neuron-like cells. In addition, EBs could be obtained successfully in routine hanging drop culture. The serum free culture system （feeder layer-based） used in this study was suitable for keeping PGCs and EG-like cells in their undifferentiated condition, but failed to converse them to immortal cells. These results indicated that mechanical cutting is an effective method for passaging goat EG cell colonies. However, the microenvironment of conversing EG cells to immortal cells is still unclear.     

用Tn5标记带发光酶基因的华癸根瘤菌(Mesorhizobium huakui)7653R质粒

在ｐＲＫ２０７３的辅助作用下,通过三亲本接合转移,将Ｔｎ５（ｓａｃＢ－ｌｕｘＡＢ）插入华癸根瘤菌７６５３Ｒ菌株基因组中。将３２００个Ｔｎ５标记菌株影印到含有８％蔗糖的ＹＭＡ平板,检测这些菌株的发光酶活性和新霉素抗性。共获得８个菌株,其选择标记消失。质粒检测发现其共生质粒有不同程度的缺失甚至消除。结瘤实验证明,所有共生质粒部分缺失（有的缺失达１／３）的菌株依然结瘤。经用ｌｕｘＡＢ探针的分子杂交证实,８个菌株中有３个对应的标记菌株其Ｔｎ５插在共生质粒上。     

基于近红外光谱的猪肉细菌菌落总数的动力学模型

运用近红外光谱检测猪肉在室温和冷藏贮藏过程中细菌菌落总数,实现无损、快速检验猪肉品质以及预测猪肉的贮藏期.使用傅立叶变换近红外光谱仪测定猪肉样品在贮藏期内的光谱,同时采用常规菌落总数测定方法测定样品的细菌菌落总数,获得了猪肉细菌菌落总数对数值与近红外光谱特征值随贮藏时间的变化规律,建立了细菌菌落总数对数值的零级和一级模型,并采用主成分分析法建立了基于近红外光谱特征值预测初值的猪肉细菌菌落总数对数值的动力学模型.该方法准确、灵敏,可用于生鲜猪肉细菌菌落总数的测定及其安全贮藏时间的预测.     

湖羊精原干细胞体外培养

研究了湖羊精原干细胞(SSCs)体外培养方法,湖羊睾丸曲精细管两步酶消化法制备细胞悬液,Percoll分离后比较SSCs纯化方法、FCS以及GDNF对SSCs体外培养与集落碱性磷酸酶(AKP)染色的影响。结果显示,虽然盘化法纯化的SSCs在集落形成时间与集落数上显著低于差速贴壁法(P<0.05),但是盘化法所得集落的AKP阳性率显著高于差速贴壁法(P<0.05);添加1% FCS的培养基可显著降低集落形成的时间,增加集落的数目与AKP阳性率(P<0.05),但集落形成时间与AKP阳性率在5%与1% FCS之间无显著变化(P>0.05);20 ng/mL GDNF处理组内集落数与AKP阳性率显著高于10 ng/mL GDNF(P<0.05),但集落形成时间与AKP阳性率与30～40 ng/mL GDNF的处理组无显著差别(P>0.05)。     

超高压处理对鲜切冬瓜保鲜效果的影响

【目的】研究超高压处理对鲜切冬瓜的保鲜效果,为鲜切冬瓜的保鲜提供新途径。【方法】在25℃下将鲜切冬瓜分别采用200、400和600 MPa加压处理10 min,再于4℃下贮藏9 d,以未经超高压处理为对照,每3 d测定1次鲜切冬瓜的细菌菌落总数、多酚氧化酶(PPO)活性、过氧化物酶(POD)活性、硬度和亮度。【结果】随贮藏时间的延长,鲜切冬瓜的细菌菌落总数、PPO和POD活性逐渐升高,硬度和亮度逐渐下降;贮藏至第9 d,对照冬瓜的细菌菌落总数、PPO活性、POD活性、硬度和亮度L*分别为7.17±0.13 logCFU、(120.3±1.2)%、(136.5±0.8)%、1210±69 g和32.5±0.9,而400 MPa处理的鲜切冬瓜分别为1.20±0.06 logCFU、(12.8±0.6)%、(9.2±0.5)%、2295±68 g和67.5±1.1,各项指标与对照存相比均在显著差异(P<0.05);200 MPa处理的鲜切冬瓜各项指标与对照间无显著差异(P>0.05,下同),600 MPa处理的鲜切冬瓜各项指标与400 MPa处理间也无显著差异。【结论】400 MPa以上超高压处理可杀灭鲜切冬瓜的微生物、抑制PPO和POD活性,有效保持硬度和亮度,保鲜期延长至9 d。     

小麦叶内锈菌细胞核荧光染色方法

本文对小麦叶内锈菌菌丝细胞核的荧光染色方法进行了研究。受锈菌侵染的小麦叶片经0.25％纤维素酶和0.12％Driselase混合液培养2～3h,锈菌菌落从组织中游离出。菌落经荧光染料DAPI(5μg/mL)和Calcoflour white(0.001％)分别染色1～3min后,菌丝的细胞核、壁、隔膜在荧光显微镜下易于观察辩认。     

Ascorbic acid: a culture requirement for colony formation by mouse plasmacytoma cells

Plasmacytoma stem cells explanted from mice formed colonies in culture only in the presence of L-ascorbic acid; this vitamin was not needed for the formation of granulocytic colonies. Isomers of L-ascorbic acid with less antiscorbutic activity also promoted plasmacytoma colony formation, but less effectively. Other redox compounds without antiscorbutic activity and an antioxidant were ineffective.     

免移虫育王和两种酯类幼虫信息素对中华蜜蜂蜂王质量的影响

【目的】比较中华蜜蜂(Apis cerana cerana)免移虫育王和人工移虫育王培育的蜂王质量,明确幼虫信息素中的甲基棕榈酸酯（methyl palmitate,MP）和甲基亚油酸酯（methyl linoleate,ML）在育王过程中能否提高蜂王质量。【方法】以中华蜜蜂为试验材料,选择蜂群群势、蜂王年龄、子脾面积等基本一致的健康蜂群3群作为哺育群,群势均为5框,采用郎氏标准蜂箱饲养。另选择一群健康、蜂王产卵性能好的蜂群作为母群。免移虫育王和人工育王的比较过程中,每个哺育群中每种育王方式至少育王3次。幼虫信息素试验过程中,每个哺育群每种信息素至少采用人工育王法育王3次。试验期间,对蜂群进行奖励饲喂,提高工蜂哺育积极性。利用自主研制的塑料免移虫育王生产器进行免移虫育王,人工移虫育王则采用自制的蜡质王台。测定育王过程中的幼虫接受率和蜂王出房率,待蜂王出房后测定蜂王初生重、胸重、胸宽,将蜂王的单侧卵巢制成石蜡切片进行卵巢管计数,并采用荧光定量PCR测定蜂王腹部的卵黄原蛋白基因（Vitellogenin,Vg）和转铁蛋白基因（Transferrin,Trf）表达量,从而比较蜂王的质量。为了研究中蜂幼虫信息素中MP和ML在人工育王中使用能否提高蜂王的质量,采用人工移虫育王,在幼虫60—63 h的王台内分别注射1 µL MP和ML（浓度梯度为0、0.1%、1.0%、10.0%）,同样测定蜂王初生重、胸重、胸宽和卵巢管数以及其腹部Vg和Trf表达量等指标。【结果】免移虫育王的幼虫接受率为40.87%,蜂王出房率38.52%;人工移虫育王的幼虫接受率为74.38%,蜂王出房率69.13%。显然工蜂对于人工移虫育王中的蜡质王台更易于接受。免移虫育王培育的蜂王在初生重、胸重、胸宽、单侧卵巢管数和Trf表达量等与人工移虫育王的比较均差异不显著（P＞0.05）,平均值也较接近,但蜂王腹部Vg表达量显著高于人工移虫育王（P＜0.05）。在人工移虫育王蜂王幼虫60—63 h时加入MP（或ML）,不同浓度的MP对蜂王的各项指标均无显著影响（P＞0.05）;0.1% ML对蜂王质量也无显著影响（P＞0.05）;1.0% ML显著降低蜂王初生重、胸重及其腹部Vg的表达（P＜0.05）,对卵巢管数量无显著影响（P＞0.05）;10.0% ML显著降低蜂王的各项指标（P＜0.05）。MP和ML对蜂王Trf表达量均无显著影响（P＞0.05）。【结论】免移虫育王与人工移虫育王相比,王台接受率显著偏低（P＜0.05）,蜂王腹部的Vg表达量增加,但在蜂王初生重、胸部指标、单侧卵巢管数量及Trf表达量方面均无显著差异（P＞0.05）。MP和ML在人工移虫育王过程中的应用并不能达到提高蜂王质量的作用。     

一种快速筛选产聚羟基烷酸细菌方法的建立

为了从土壤微生物中快速分离纯化得到产聚β-羟基脂肪酸(PHAs)的微生物菌株,研究比较了几种聚羟基烷酸产生菌筛选方法.结果表明,尼罗蓝染色法优于苏丹黑染色法,而且0.1%的尼罗蓝丙酮染液55℃染色细菌菌落10min,紫外灯下观察菌落,能合成聚羟基烷酸的菌落具有明显的荧光现象.进而推出对于产生物降解塑料菌株的染色,尼罗蓝...     

合成蜂王信息素对两种蜜蜂产蜜量的影响

 运用云南大学化学系人工合成的蜂王信息素,制造假蜂王,分别加入东方蜜蜂Apiscerana和西方蜜蜂Apismelifera的失王群,处女王群、产卵王群,并以未加入蜂王信息素的产卵王群作对照,研究合成蜂王信息素对两种蜜蜂产蜜量的影响。结果表明,失王群加入蜂王信息素后,东方蜜蜂的产蜜量比处女王群增加13.5%,比产卵王群增加16.3%,比对照组增加17.8%;西方蜜蜂的产蜜量比处女王群增加16.3%,比产卵王群增加11.1%,比对照组增加21.7%.研究中还发现,加入蜂王信息素的时间长短,对两种蜜蜂的产蜜量也有一定影响。人工合成蜂王信息素对西方蜜蜂的作用比东方蜜蜂明显。本研究为进一步运用蜂王信息素为养蜂生产服务提供了科学依据。     

Culture of a Colonial Hydroid under Controlled Conditions

A simple method has been developed for the cultivation of colonies of Cordylophora lacustris. The colonies, attached to microscope slides slanted in beakers, are grown in a culture solution containing five required ions. Artemia larvae are supplied as food. Increase in hydranth number is exponential with a doubling time of about 3 days.     

Genetic diversity in honey bee colonies enhances productivity and fitness

Honey bee queens mate with many males, creating numerous patrilines within colonies that are genetically distinct. The effects of genetic diversity on colony productivity and long-term fitness are unknown. We show that swarms from genetically diverse colonies (15 patrilines per colony) founded new colonies faster than swarms from genetically uniform colonies (1 patriline per colony). Accumulated differences in foraging rates, food storage, and population growth led to impressive boosts in the fitness (i.e., drone production and winter survival) of genetically diverse colonies. These results further our understanding of the origins of polyandry in honey bees and its benefits for colony performance.     

亚洲部分地区东方蜜蜂mtDNA多态性研究

 就云南省7个不同样点共7群东方蜜蜂蜂群开展mtDNA内切酶位点测试和分析研究,并与菲律宾的东方蜜蜂作对比分析。内切酶DraI分析7个蜂群,共发现4个内切酶位点;云南东方蜜蜂mtDNA的tRNAleu-COII基因的序列没有长度多态性,EcoRI内切酶位点共有4个,与菲律宾的吕宋岛的东方蜜蜂属于同一单倍型。另外,对来自尼泊尔、泰国、越南、老挝以及我国北京、云南等地的共13群蜜蜂mtDNA COII基因的420个碱基对进行测序分析,发现13群东方蜜蜂分析的420个碱基序列里,位点变异从0个到5个不等,变异率从0到1.19％. 用邻接法(neighbor-joining)构建的分子系统树可以看出分枝树主要分为两个类群:高纬度或高海拔的蜂群为一个类群,它们主要来自撒营盘（2）（China 4）、丽江(China 7)、北京(1)（China 1）、尼泊尔（Nepal）、北京（2）（China 2）、河口（1）（China 8）和越南（2）（Vietnam 2）。另一个类群的主要来自低纬度或低海拔的蜂群,它们主要来自撒营盘（1）（China 3）、景洪（China 5）、越南（1）（Vietnam 1）、泰国（Thailand）、河口(2) (China 6)和老挝(Laos)。该实验为我国东方蜜蜂资源的保护和开发研究提供了重要的信息和手段。     

烟草假单胞杆菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)菌落的扫描电镜和微分干涉差显微镜观察

用扫描电子显微镜和微分干涉差光学显微镜观察了烟草假单胞杆菌菌落的发生、形成及排列情况。扫描电镜观察结果表明:在菌落中该菌呈平卧状紧密排列;菌落边缘整齐;菌落表面及菌体之间有细菌的分泌物。微分干涉差显微镜观察表明:该菌菌落的发生、形成按分层式进行,即细菌先在培养基平面上繁殖成一层,然后在该层的中心隆起,分裂繁殖成第2层,并继续按此方式形成第3层、第4层等。菌落的边缘呈梯田状,菌体平卧紧密排列。     

蜂粮酿制过程中细菌的变化规律

采用营养琼脂培养基、改良"LB"培养基、MRS(4.5)、MRS(6.5)培养基分别对中国茶(Camelliasinensis)的手采花粉(floral pollen)、蜂花粉(corbicular pollen)和不同酿制时间的蜂粮(bee bread)样品中的细菌进行菌落计数和分析.酿制初期的蜂粮样品在MRS(4.5)培养基和MRS(6.5)培养基上生长的细菌菌落数占优势,随酿制时间的延长而迅速下降;5、10、15、21 d蜂粮样品在改良"LB"培养基上生长的细菌菌落数占优势;60 d蜂粮样品在营养琼脂培养基上生长的细菌菌落数占优势.     

苹果园李始叶螨空间格局研究

用聚集度指标法和格局纹理分析,对李始叶螨活动螨(幼、若、成蟥)的空间格局进行了测定,结果表明,在各种密度水平下,该害螨在苹果树内的分布格局均呈聚集型,聚集度在低密度下最高,分布的基本成分是疏松的个体群,个体群的分布是聚集的,个体群内的分布是随机的.个体群大小约4～6片叶.     

酿酒微生物计数方法探讨

采用琼脂倾注法接种不同菌株,并对平板菌落分别进行人工计数与自动计数,对两种方法的计数结果进行比较分析,以验证全自动菌落计数仪的菌落识别功能和计数准确性。结果表明,全自动菌落计数仪对于菌落较小的细菌类能准确地快速计数,重现性好,最大误差率为3.95%;但对于菌落形态较大的霉菌类、酵母类等计数准确率低,最大误差率分别为42.86%和35.50%。因此,在实际应用中应以自动计数为主,通过合理设置菌落直径、颜色、亮度、背景偏差等参数以方便自动计数,同时采用人工计数对结果进行修正,以提高计数准确率。     

Human leukemic cells: in vitro growth of colonies containing the Philadelphia (Ph) chromosome

Human leukemic cells with a marker (Philadelphia; Ph(1)) chromosome gave rise to granulocytic and mononuclear cell colonies when grown in vitro. All metaphases from a single colony were either Ph(1) positive or Ph(1) negative. No colonies contained a mixed cell population. This suggests that leukemic and normal cells exist simultaneously and that in vitro colonies are clonal in origin.     

“无饲养细胞”杂交瘤制备技术

在３７℃温度下，用４５％ＰＥＧ（ｐＨ７．４）对ＮＳ０瘤细胞和免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠脾脏细胞做１ｍｉｎ融合。细胞融合后，加入１６４０／ＨＡＴ培养基，在不加饲养细胞和预加饲养细胞的两种环境中培养。结果发现融合细胞培养中不加小鼠腹腔巨噬细胞，杂交瘤克隆孔形成的量较预加小鼠腹腔巨噬细胞的多。     

超高压杀菌处理冷破碎猕猴桃果浆的条件优化及其贮藏期杀菌效果

【目的】研究‘海沃德’猕猴桃冷破碎果浆的超高压杀菌最优条件及超高压处理后果浆贮藏过程中的杀菌效果,为猕猴桃的非热加工及产品开发提供参考。【方法】采用冷破碎技术设备获得猕猴桃纯果肉果浆,以菌落总数、VC、褐变度等为评价指标,利用响应面分析建立模型,得到超高压杀菌最优工艺条件;利用微生物学方法,研究超高压处理的果浆在4℃、-20℃下贮藏期菌落总数、霉菌酵母和大肠杆菌的变化。【结果】通过单因素试验和Box-Behnken模型响应曲面分析获得超高压杀菌的最佳条件为压力497 MPa,温度27℃,保压时间24 min;在此条件下超高压处理对果浆的菌落总数、大肠杆菌、霉菌酵母杀菌率分别达到73.18%、97.46%、100.00%。超高压杀菌的冷破碎果浆于4℃、-20℃下贮藏6周、14周,在符合标准范围内菌落总数的增量较大,与贮藏第1天相比分别达到97.19%、85.98%,但菌落总数增长速度不大;而果浆中的霉菌酵母、大肠杆菌的增量相对较少,且增殖也较慢;果浆中的霉菌酵母、大肠杆菌仅分别为1.36、0.67和0.32、0.35 lg（CFU/mL)。【结论】超高压处理作为一种非热杀菌方式对热敏性的猕猴桃果浆有较好的杀菌效果。冷破碎果浆作为猕猴桃加工的中间原料在超高压处理后于-20℃下贮藏14周依然符合商业无菌要求,因此低温贮藏与超高压杀菌结合有利于冷破碎果浆的贮藏和进一步加工利用。