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张作秀 《江西畜牧兽医杂志》2015,(3):43-44
利用液相阻断ELISA方法检测郭勒木德镇拖拉海村和阿拉尔村的健康牛、羊O型口蹄疫免疫抗体牛45头份、羊45只份,检出牛血清样品阳性(合格)34份,阳性(合格)率75.6%;检出羊血清样品阳性(合格)42份,阳性(合格)率93.3%。 相似文献
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口蹄疫是由口蹄疫病毒感染猪、牛、羊等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。本病的流行非常广泛,一旦感染,将会给畜禽养殖业造成极大的经济损失,甚至是灭顶之灾,后果严重。目前,有效的防制措施就是用口蹄疫疫苗对猪、牛、羊等易感动物进行免疫接种。动物经接种后所产生的免疫抗体水平的高低,直接关系到能否对动物进行保护的效果,这只能通过抗体水平的检测来判断。口蹄疫的液相阻断ELISA检测技术,是一种成熟的检测技术,是当前国际上认可的一种标准化的检测诊断技术,也是国际贸易中检测口蹄疫的主要手段。 相似文献
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应用液相阻断ELISA试验方法检测上海光明荷斯坦牧业有限公司牧场牛群经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的奶牛血清样品2412份。经检测,2412份样品中规模奶牛场牛群免疫抗体滴度≤1∶64样品42份,抗体滴度≥1∶128样品2370份,抗体保护率为98%。 相似文献
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采用液相阻断ELISA免疫学方法检测经口蹄疫O型灭活疫苗免疫的1200奶牛血清样品,检测后发现牛群免疫抗体滴度<1∶64的样品有21份,抗体滴度≥1∶128样品1178份,占98.17%。希望本次研究的内容对口蹄疫O型疫苗推广有一定促进作用。 相似文献
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因具有较高的敏感性和重复性,口蹄疫液相阻断酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)抗体检测方法已被广泛应用于牛、羊和猪等动物免疫抗体效果监测工作中。但是,由于甘肃省甘州区的猪、牛和羊等动物饲养量大,调出调入频繁,所以当地的检测工作量大,口蹄疫试剂盒用量也大。因此,为了节约成本,提高工作效率,我们对液相阻断ELISA免疫抗体检测方法进行了改进。 相似文献
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液相阻断ELISA用于检测家畜血清中的口蹄疫抗体。主要应用于两个方面的目的:(1)检测口蹄疫病毒感染,广泛用于国际贸易中;(2)监测牛、羊和猪等偶蹄动物血清中口蹄疫免疫抗体,评价口蹄疫疫苗免疫效力,也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。 相似文献
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Yuying Cao Li Yuan Shunli Yang Youjun Shang Bin Yang Zhizhong Jing Huichen Guo Shuanghui Yin 《Journal of veterinary science (Suw?n-si, Korea)》2022,23(5)
BackgroundClassical swine fever (CSF) is a severe infectious disease of pigs that causes significant economic losses to the swine industry.ObjectivesThis study developed a solid-phase blocking enzyme-linked immunosorbent assay (spbELISA) method for the specific detection of antibodies against the CSF virus (CSFV) in porcine serum samples.MethodsA spbELISA method was developed based on the recombinant E2 expressed in Escherichia coli. The specificity of this established spbELISA method was evaluated using reference serum samples positive for antibodies against other common infectious diseases. The stability and sensitivity were evaluated using an accelerated thermostability test.ResultsThe spbELISA successfully detected the antibody levels in swine vaccinated with the C-strain of CSFV. In addition, the detection ability of spbELISA for CSFV antibodies was compared with that of other commercial ELISA kits and validated using an indirect immunofluorescence assay. The results suggested that the spbELISA provides an alternative, stable, and rapid serological detection method suitable for the large-scale screening of CSFV serum antibodies.ConclusionsThe spbELISA has practical applications in assessing the vaccination status of large pig herds. 相似文献
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快速、特异检测李斯特菌单抗-夹心ELISA方法的建立及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究以高度特异的、针对单核细胞增生李斯特氏菌、无害李斯特氏菌、格氏李斯特氏菌共同表位的单抗LJ10A为捕捉抗原抗体和酶标抗体,建立了快速检测该菌的单抗夹心ELISA方法。该方法对单核细胞增生李斯特菌的最小检出量为5×105个菌/ml。人工模拟样品至少可检出5个菌/10g样品,并在48小时内报告结果。在实际应用中,我们以该法检测了240份肉样和850份奶样,并平行以改良McBride琼脂分离细菌相比较,证实该方法的敏感性和特异性分别达到100%和96.9%。 相似文献
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应用改良阻断ELISA检测禽网状内皮组织增殖病血清抗体 总被引:3,自引:0,他引:3
应用禽网状内皮组织增殖病病毒纯化抗原和抗REV单克隆抗体建立了改良阻断ELISA用于鸡血清中REV抗体检测,并对北京地区鸡群中随机采样的36份血清样本进行了检测,阳性率为5.6%。与间接ELSIA的检测结果进行了统计学比较,两种方法的阳性率无显著差异。结果表明本试验所建立的改良阻断ELISA可以用于鸡群REV感染的血清学调查。 相似文献
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分别按一次免疫、首免后第15d加强免疫和首免后第60d加强免疫程序,对3组试验牛(每组牛20头)用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA(LPB-ELISA)测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果,首免后第15d加强免疫牛和第60d加强免疫牛抗体水平较高,50%保护牛所占比例分别为56.3%和63.1%,完全受保护的牛所占比例分别为34.3%和29.5%。第60d加强免疫牛的保护率要高于第15d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明,首免后第60d加强免疫是最理想的免疫程序。 相似文献
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氯霉素残留检测阻断ELISA试剂盒的研制及性能测定 总被引:1,自引:0,他引:1
在建立氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上.研制出CAP残留快速检测试剂盒(CAP-kit),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP-kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R^2=0.9953,检测范围为1.0μg/L~128.0μg/L,灵敏度为0.85μg/L,半数抑制浓度(IC50)为7.54μg/L,检测限为1.0μg/L;牛奶样、猪肉样的平均添加回收率为88.3%、82.5%,平均批内和批间变异系数均〈15%;CAP-kit与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应(CR%)为150%,与其它酰胺醇类和抗菌素药物无交叉反应;试剂盒在4℃可保存6个月。 相似文献
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为建立检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)血清抗体的阻断ELISA方法,本研究以经蔗糖密度梯度离心法纯化的IBRV作为免疫原制备1株单克隆抗体(MAb),命名为cp-1-1。经间接ELISA、IFA和western blot鉴定,该MAb与IBRV呈阳性反应,与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)及牛副流感病毒3型(BPIV3)呈阴性反应,具有较强的特异性。质谱分析结果显示MAb cp-1-1识别的表位位于IBRV VP8蛋白。以纯化的IBRV作为包被抗原、MAb cp-1-1作为检测抗体,建立检测IBRV血清抗体的阻断ELISA方法。该检测方法的抗原包被量为0.89μg/孔,样品稀释度为12,检测抗体MAb量为1.3μg/孔,二抗稀释度为15000。利用50份IBRV抗体呈弱阳性的牛血清(中和抗体效价为14~116)作为标准参考血清,确定该检测方法的阻断率Cut Off值为52.06%,即阻断率高于52.06%时判为阳性,低于52.06%时判为阴性。阻断ELISA方法特异性试验显示仅IBRV阳性血清检测为阳性,而BVDV、BPIV3、牛腺病毒3型(BADV-3)和O型口蹄疫病毒(O-FMDV)阳性牛血清均检测为阴性,表明该方法具有较强的特异性;该方法可检测的最低中和抗体效价为14,与病毒中和试验的敏感性一致,表明该方法具有较高的敏感性;重复性试验显示该方法批内、批间变异系数均小于10%,显示较好的重复性。对130份现地牛血清检测结果显示,该方法与病毒中和试验的符合率为98.46%。用该方法对某牛场接种IBRV灭活疫苗的牛血清进行检测,抗体阳性率为99.51%(205/206)。另外,采用该方法对我国8个省(市、自治区)的801份牛血清进行检测,IBRV的抗体阳性率为41.6%(333/801)。本研究建立的阻断ELISA方法可以用于IBRV疫苗免疫监测和血清流行病学调查,为我国IBR的防控提供技术支持。 相似文献
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猪流行性腹泻病毒间接ELISA抗体检测方法建立与应用 总被引:1,自引:0,他引:1
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是目前引起我国猪急性肠炎并水样腹泻的重要病原之一,但尚无商品化病毒血清抗体检测试剂盒。本研究以纯化的PEDV为包被抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了间接ELISA抗体检测方法,其反应条件为:抗原最佳包被浓度为3μg/mL,血清样品最佳稀释度为1∶100,包被时间为37℃作用2 h,1.5%BSA 37℃封闭3 h,二抗1∶10 000稀释,37℃作用30 min,抗体临界值为OD450nm≥0.306判为阳性,OD450nm≤0.268判为阴性,介于二者之间为可疑。该方法检测6份已知PEDV阳性血清效价为1∶3 200,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪瘟病毒、伪狂犬病毒和口蹄疫病毒血清抗体均为阴性,批间和批内重复试验变异系数2.5%~8.3%,对江苏、上海、浙江、安徽地区587份猪血清样品进行检测,抗体阳性率达56.76%,证明该方法具有较好敏感性、特异性和重复性,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。 相似文献
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小反刍兽疫(PPR)是一种跨国传播的重大烈性传染病,主要发生于山羊和绵羊等小反刍动物,具有高发病率和死亡率。小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白是抗体检测的主要靶蛋白,本研究将PPRV Nigeria 75/1毒株的N蛋白进行原核表达,重组蛋白经鉴定和纯化后免疫BALB/c小鼠。取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,筛选针对PPRV N蛋白的阳性单克隆细胞株,获得了具有阻断效果的单克隆抗体1B11株。经免疫荧光方法鉴定该单克隆抗体与PPRV Nigeria 75/1毒株发生特异性反应。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记1B11抗体作为阻断抗体,建立了检测PPRV抗体的阻断ELISA方法。经优化反应条件,抗原的最佳包被浓度为2.5μg/mL,阻断抗体的最佳浓度为1μg/mL,待检血清1∶2稀释反应1 h,底物反应时间为10 min,阴阳性检测临界值为阻断率为58.5%。特异性试验证明该方法与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)等阳性血清不发生交叉反应。通过对234份血清样品进行检测,该方法与商品化试剂盒符合率为91%(213/234)。由此表明,建立的阻断ELISA方法可用于PPRV临床样品的抗体水平检测,为PPRV疫苗免疫效果检验及PPRV根除提供了基础。 相似文献