犊牛腹泻轮状病毒在3个传代细胞上培养特性的研究

对犊牛腹泻轮状病毒（ＮＣＤＶ）在３种传代细胞系上进行了培养，并将其培养特性进行了比较研究。结果表明：犊牛腹泻轮状病毒在ＭＡ－１０４细胞上生长，其病毒抗原的生长部位在细胞浆，培养后可出现细胞病变；犊牛腹泻轮状病毒在ＬＬｃ－ｍｋ２细胞上也生长，且随着培养代次的增加，病毒抗原的滴度相应增加，增长到一定滴定后即较稳定。     

南方鲶SME－Ⅰ细胞系的建立及其生物学特性的研究

用半消化法和组织块法接种南方鲶晚期胚，经４０多代连续培养，建立了ＳＭＥ－Ⅰ鲶鱼细胞系。该细胞系为贴附性上皮样细胞。细胞内微丝束丰富，平行排列伸到伪足，但质膜下不很密集。细胞最适在含１５％～２０％小平血清的１６４０培养基中生长，适温２８～２９℃，ｐＨ６．５～７．２，群体倍增时间为５８．６ｈ，已增殖到１０￣８个的水平。细胞染色体数为正常二倍体２ｎ＝５８，但有不少异倍化细胞。该细胞系已可用于鱼类生物工程研究和进入细胞资源库保存。     

陆地棉抗黄萎病细胞系几个生理生化指标的测定

对经γ－射线诱变并利用棉花黄萎病菌培养滤液筛选获得的Ｍ１１０１０１０１０、Ｍ２２０１０和Ｍ２１０１０１５３个抗性细胞系及“珂字２０１”对照细胞的几个生理生化指标的测定表明，在黄萎病菌培养滤液处理的７ｄ内，抗性细胞系的可溶性蛋白质含、氧化物酶和多酚氧化酶活性均为先低于后高于对照细胞系。     

用胶原酶消化法培养德保矮马耳缘组织成纤维细胞初探

 将德保矮马耳缘组织经胶原酶消化法培养成原代细胞，并成功建立起该组织成纤维细胞系。这种细胞贴壁生长，具有密度接触性抑制性质；该方法获得的原代细胞经传代后接种，细胞群体倍增时间（PDT）为35.9 h；细胞染色体众数2n = 64的细胞数占91.3%～92.8%；乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）同工酶分析，没有其它细胞系污染；细菌、真菌、病毒、支原体检测阴性。该系符合ATCC要求的细胞系鉴定项目，成为保护矮马这一国家重要畜禽品种的宝贵遗传资源，并为相关遗传学研究提供了有效的试验材料。同时得出胶原酶消化培养法比组织块培养法在获得原代细胞速度快；组织块培养法的细胞群体倍增时间（PDT）为48 h。     

奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

试验分别采用组织块贴壁法和消化分离法对奶山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功建立了奶山羊胎儿成纤维细胞系,并对该细胞系进行了形态学观察、生长动力学分析、细胞活力测定、核型分析和微生物检测等多种生物学特性分析.结果表明:成纤维细胞原代培养采用贴块培养时所需时间较长,消化培养有较多死细胞;传代细胞生长情况良好,群体倍增时间(PDT)约为40.4h;生长总体趋势呈"S"型;冻存后活力为92.3%,生长状况与冻存前一致;细胞染色体中二倍体(2 n=60)占主体;细菌、真菌和支原体检测结果均为阴性,细胞系的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准.     

鳙鱼Aristichthys nobilis吻端细胞系BHS的建立及特性观察

以鳙鱼吻端组织为材料，建立了鳙鱼吻端细胞系，定命为ＢＨＳ。７个月期间细胞已传２５代，选用培养基为ＴＣ－１９９加２０％或１０％小牛血清。该细胞生长温度范围为１４℃－３５℃，最适温度２８℃－３０℃，形态主要为纤维样细胞，染色体数从５５－８２（２ｎ－４８）为异倍体细胞，克隆形成率较代为４．４％。     

黄连培养细胞中高产小檗碱细胞系的筛选

利用家栽和野生中国黄连的幼叶切块，接种在含有１．０￣２．０ｍｇ／Ｌ ２，４－Ｄ和０．１ｍｇ／Ｌ ＫＴ的６，７－Ｖ固体培养基上，诱导形成愈伤组织。选择较松散的愈伤组织转入液体悬浮培养，获得游离细胞和细胞聚集体。经＾６０Ｃｏ－γ射线辐射诱变和平板培养，筛选出小檗碱含量相当于６年重新亲本植物根茎含量的有８个细胞株，最高的细胞系含量为６．１２％。     

梅山猪耳成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

以梅山猪耳缘组织为研究材料,采用组织块培养法建立了梅山猪耳成纤维细胞系,并对所建细胞系进行生物学特性研究。结果表明:所建立的梅山猪耳成纤维细胞系生长态势良好,冷冻前后的平均细胞存活率分别为95.21%、90.08%,解冻后细胞的生长曲线呈"S"型;细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性,表明细胞没有受到微生物的污染;细胞中期染色体二倍体(2n=38)占主体比例约为92.31%,达到了建立成纤维细胞系的要求;苹果酸脱氢同工酶和乳酸脱氢同工酶电泳结果表明,该细胞系没有被其他细胞污染,细胞纯度较高;绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染耳成纤维细胞表明,5个细胞系的阳性率为45.23%-67.32%。经G418筛选后,各个细胞系均能有效形成单克隆集落。本研究中梅山猪成纤维细胞系的建立使梅山猪种质资源在细胞水平得到有效保存,并可为其他动物成纤维细胞系的建立以及种质资源保存提供参考。     

栝楼细胞悬浮系的建立

[目的]为了解决栝楼悬浮细胞系在继代培养中容易退化,生长速度减慢的问题。[方法]以栝楼的茎为外植体诱导出愈伤组织,筛选出质地疏松、生长迅速、易于分散、可以长期进行继代培养的淡黄色半透明状愈伤组织系,将该愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡悬浮培养,建立起分散程度好的栝楼悬浮细胞系。同时对影响愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养的条件进行研究,确定适合愈伤组织生长的条件及影响细胞悬浮培养的主要因素。[结果]看护培养可以使栝楼悬浮培养细胞长势良好,并在低密度下获得由单细胞形成的细胞系。[结论]该悬浮系的建立为栝楼细胞大规模培养,进而实现有效药物成分的工业化生产奠定了理论基础。     

ST细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进ST细胞系,扩大培养后液氮冻存建立了种子细胞库和工作细胞库;细胞复苏后对细胞的活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行了研究。结果表明,ST细胞系呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、病毒、支原体检测均为阴性;染色体为19对;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库,可为开展ST细胞及猪瘟疫苗的研究提供基础理论依据和细胞资源。     

大麦胚性悬浮细胞系的快速建立及其超低温保存

 禾谷类作物胚性悬浮细胞系的建立及其超低温保存是现代植物生物技术中的基础工作。本文分析了从大麦成熟胚培养快速建立胚性悬浮细胞系的两个关键步骤。愈伤组织的精心选择直接关系到建立细胞系的难易程度。悬浮培养过程中的细胞学观察可以用来判定2，4-D浓度和继代周期等因子是否需要调整。经过预培养和保护剂处理，用两步法冻存的大麦悬浮细胞能够高频率地恢复生长。在合适的条件下用玻璃化法冻存，TTC相对存活率可达51%，从恢复生长的细胞获得了再生植株。     

胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

BHK-21细胞库的建立及其生物学特性鉴定

从美国典型培养物保藏中心(ATCC)和中国兽医药品监察所(中监所)引进2株BHK-21细胞系,传代扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性进行研究。结果显示,2个来源的BHK-21细胞系均呈成纤维型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体为21对,二倍体均占主体;外源质粒在该2株细胞系中能进行复制和表达。这可为开展BHK-21细胞系及口蹄疫疫苗的研究与开发提供基础理论依据和细胞资源。     

粘虫细胞培养及苦皮藤素Ⅳ,Ⅴ对其毒力的研究

以东方粘虫(MythimnaseparateWalker)为材料建立了新的昆虫细胞系,原代培养6个月后,胚胎细胞开始传代;用苦皮藤素和处理第3代传代细胞,24h后细胞裂解,出现大量细胞碎片,培养液变浑浊,其致死中质量浓度分别为76.42和129.34μg/mL。粘虫背纵肌经胰蛋白酶部分消化后在Grace培养液中生长良好,培养2个月后有大量肌卫星细胞出现。     

小麦禾谷镰刀菌毒素抗性系的筛选及抗性特性

以稳定生长的小麦Ｆ１花药愈伤组织为材料，小麦强致病禾谷镰刀菌的粗毒素为选择剂，进行抗毒素变异细胞系的离体筛选。结果从多步正筛选系统和一步正筛选系统分别获得抗变异细胞系ＫＮ＾ｒ－ａ和ＫＮ＾ｒ－ｂ。抗性系的毒素抗性具有显著提高，且其细胞膜透性、硝酸还原酶活性、苯丙氨酸解氨酸活性、游离氨基酸组成均发生了明显变化。据此提出了细胞水平上禾谷镰刀菌毒素作用的机理及抗性变异细胞系对毒素表现出一定抗性的可能原因。     

建立猪囊尾蚴细胞系的研究

为建立具有免疫原性的猪囊尾蚴细胞系,试验对猪囊尾蚴细胞进行了体外培养,并将建立的细胞系命名为猪囊尾蚴CC-97免疫细胞系。猪囊尾蚴细胞原代培养30d后形成单层细胞,然后将单层细胞以1：2分种率传代培养,相隔7d传代一次,连传24代。结果表明：光镜下观察发现,细胞系由3种类型细胞组成,以椭圆形细胞占优势,梨形、球形细胞数量接近。放射自显影法测定细胞分裂情况,3H—TdR显示细胞生长指数,结果均表明,细胞对数增殖期长达7d,细胞从12h开始倍增分裂,第四、五天相继达到倍增分裂高峰,细胞增殖率达11倍,增量达6．32X10^（9）／L,后来达到1：37的分种率,细胞数为3．7X10^（10）／L;细胞周期约为32h,细胞系以二倍体细胞为主,染色体有10对2条,细胞蛋白质组分有30个区带,酯酶同工酶谱显示一条区带,分子量约32kDa;细胞系经荧光抗体检测表明,与猪囊尾蚴具有同源性,致肿瘤性与外源污染检验均为阴性。结果提示,建立的猪囊尾蚴细胞系是一个形态均一、生长旺盛、遗传性稳定、免疫原性高、无污染、无致肿瘤性、与猪囊尾蚴同源的生物学新品系。     

粉纹夜蛾（Trichoplusia ni）卵巢细胞系克隆株Tn5B1—4特性的研究

通过用限稀释法由粉纹夜蛾Ｔｎ５Ｂ１细胞系中分离出多个细胞株，经筛选获得一个理想的克隆株Ｔｎ５Ｂ１－４，该克隆株的特性不同于原细胞系Ｔｎ５Ｂ１。该克隆株的细胞形态一致，细胞群体倍增时间较原细胞株短，而且细胞活力强，特别是在维持粉纹夜蛾单粒包埋核型多角体病毒的复制能力方面高于原细胞系，另外经生物测定看出，在该克隆株中增殖的病毒毒力与虫体内增殖的病毒无显著差异。     

氮磷浓度对条斑紫菜细胞培养的影响

氮和磷对紫菜的细胞生长和发育有很大的影响，本文讨论了不同氮源、不同氮和磷的浓度和不同细胞密度笃条斑紫菜细胞培养的存活率和细胞生长的影响。试验结果显示，对于细胞生长用ＮＯ３－Ｎ作为氮源估于用ＮＨ４－Ｎ的。前３天培养的细胞对Ｎ／Ｐ浓度的变化有一些忍耐性，３天后Ｎ／Ｐ的浓度对细胞存活率有影响，当Ｎ／Ｐ浓度为１８－２０／１．８－２．０ｍｇｌ＾－１时细胞存活率最高，第６天时，可达到７７－８０％，细胞分裂速度     

小花棘豆（Oxytropis glabra DC）溶血毒素对培养细胞的影响初探

研究了纯化的小花棘豆溶血毒素对培养的非洲罗猴胎肾细胞系细胞（ＭＡ－１０４）和绵羊胎肾细胞的影响，结果表明：毒素能抑制并杀死培养细胞；一定量的毒素（２μｇ．ｍｌ＾－１终浓度）能在３ｈ之内使正常细胞发生形态异变，线粒体标志酶显示结果及已有研究结果提示该毒素能够通过影响线粒体来毒害整个细胞。     

安淮山羊骨骼肌卫星细胞的分离培养与鉴定

为了分离得到安淮山羊骨骼肌卫星细胞,成功构建山羊骨骼肌卫星细胞系,为相关研究提供实验材料。以安淮山羊背最长肌肌肉组织为材料,采取胶原酶和胰蛋白酶结合的二步消化法,结合差速贴壁法纯化原代骨骼肌卫星细胞。对骨骼肌卫星细胞中特异性基因Pax7用免疫荧光染色法及PCR扩增加以鉴定。通过分离、纯化,得到纯度较高的山羊骨骼肌卫星细胞,其形态为圆形,折光性强。培养一段时间后密度增大,细胞呈梭型。所得骨骼肌卫星细胞生长状态良好,具有较为一致的生长方式和形态特点。经免疫荧光染色法以及PCR鉴定发现细胞系中有Pax7基因的表达。通过上述材料和方法,可获得较纯的山羊骨骼肌卫星细胞,并稳定传代。