半滑舌鳎早期发育过程中体表色素变化的研究

对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis Günther)早期发育过程中体表色素的分布及形态变化进行了连续观察,测量其生物学特征,同时拍摄不同发育时期体表黑色素的形态变化。在水温22～23℃,盐度31～33的条件下,半滑舌鳎完成早期变态发育约需要30d,1～15日龄主要是器官发育,16日龄进入变态期,30日龄左右变态完成。半滑舌鳎在原肠期开始出现幼体色素,以后逐渐密集,色素颗粒变大,幼体色素逐渐变成以树枝状和菊花状为主;仔鱼期体表的幼体色素对称分布,在躯干部形成相互间隔的5个色素带;在变态前期幼体色素发生至最发达时期。进入变态期后,幼体色素逐渐减少,同时有眼侧出现颗粒较小的成体色素,形状为点状为主,在身体有眼侧均匀分布。无眼侧色素完全消失,成为无色。个别个体有眼侧的成体色素形成受阻,幼体色素消失后,形成白化。     

影响半滑舌鳎生长发育的水环境因素

采用亲鱼强化培育、药物人工催产、自然产卵受精、人工授精、水泥池微流水孵化及鱼苗室外池塘培育方式,进行了锦鲤的亲鱼培育与规模化人工繁育,试验取得了良好的效果。采用LHRH-A3与DOM混合胸腔一次注射法催产140组锦鲤亲鱼,结果138尾雌鱼顺产,孵化出仔2500万尾。对230万尾仔鱼进行了规模化培育,共培育出3～5cm长的苗种150万尾,成活率65．2％。50万尾夏花鱼种经3次挑选,按照业内分级标准,选留了5万尾优质鱼种,其背部挺直,色彩鲜艳,图案斑纹清晰,品种特征明显。     

半滑舌鳎的研究现状和发展前景

从分类、分布、生态、生理及形态等方面叙述了半滑舌鳎生物学特性,并从生物学的角度介绍了目前研究的现状、存在的问题、研究的方向、发展潜力和发展前景。     

生长轴对半滑舌鳎早期生长发育的调控作用

为深入了解生长轴(GH/IGF axis)对半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长发育的调控作用,采用定量PCR方法研究了GH/IGF轴5个关键生长因子(GH、GHR1、GHR2、IGF-I、IGF-II)在配子、胚胎发育和仔稚幼鱼生长过程中的差异表达调控特性。结果显示,这5个生长因子都具有亲本遗传的特性,除GH外,精子中其他4个生长因子转录表达水平均显著高于卵子。在胚胎发育阶段, GH mRNA在胚胎发育各时期均有表达,且在细胞分裂初期和孵化期表达水平较高。GHR1和GHR2mRNA在胚胎发育各时期呈现相似的表达水平变化趋势,除囊胚期和原肠胚期外, GHR1 mRNA的表达量均高于GHR2。IGF-I和IGF-II mRNA在胚胎发育各时期均表达, IGF-I在孵化期表达水平最高, IGF-II在胚体下包2/3期和孵化期表达水平最高。除64细胞期和128细胞期外, IGF-II mRNA的表达量均显著高于IGF-I (P0.05)。在仔稚幼鱼生长阶段, GH mRNA表达水平从孵化后3 d开始显著升高,到6 d时达峰值。GHR1 mRNA表达水平自6 d开始显著升高(P0.05),到30 d达峰值。GHR2 mRNA在3 d、20 d、25 d、30 d和60 d均处于显著高表达水平(P0.05)。IGF-I mRNA在3 d表达水平最高, IGF-II mRNA从6 d开始显著上调表达,并保持较高表达水平至45 d, IGF-II mRNA表达量均显著高于IGF-I (P0.05)。偏相关分析发现:这5个生长因子通过正向协同或负向拮抗作用在半滑舌鳎胚胎发育和仔稚幼鱼生长过程中共同起调控作用。研究结果为深入了解GH/IGF轴对鱼类生长调控机制积累了新的素材。     

半滑舌鳎性腺的组织学研究

采用组织切片,对半滑舌鳎性腺的组织学结构进行了观察研究。结果表明,半滑舌鳎的精巢为小叶型,精巢内的生殖细胞分为五种。其精原细胞存在于精小叶的内壁上,精母细胞和成熟的精子细胞位于精小囊中。精子成熟后,精小囊破裂释放精子进入小叶腔,完成发育过程。半滑舌鳎卵巢外有被膜包裹,其被膜的结缔组织可明显地分为内外两层。内层的结缔组织、血管与原始生殖细胞一同伸进卵巢内部形成许多产卵板。产卵板以卵巢腔为中心向四周呈辐射状排列,上有原始生殖细胞分化形成卵原细胞和不同时相的卵母细胞。半滑舌鳎卵巢中的卵母细胞的发育可以分为5个时相。本文描述了各时相卵母细胞的形态学特征。并阐述了半滑舌鳎的产卵类型。     

半滑舌鳎精子冷冻保存

半滑舌鳎精子冷冻保存对于人工繁殖育苗、杂交育种、雌核发育及其性别控制研究具有重要的意义,为此,本文对半滑舌鳎精子冷冻保存方法进行了研究。分别利用2．8mol／L的二甲基亚砜（DMSO）、甘油（Gly）和1,2-丙二醇（PG）冷冻保存该鱼精子。结果显示,DMSO冷冻保存精子的活力较高。利用MPRS＋2．8mol／L DMSO以1：0．5、1：1、1：1．5和1：2的比例稀释并冷冻精子,1：1比例在冻前能够抑制精子的运动,冻后活力可达82．50±3．54％,显著高于其他稀释比例（P〈0．05）。分别利用冷冻保存液A（MPRS＋2．8mol／L DMSO）和B（TS-2＋2．8mol／LDMSO）稀释平衡精子,精子在A中的冻前快速运动时间、寿命分别为37．75±6．45S和145．00±78．98S,与鲜精无显著差异（P〉0．05）。利用以上两种冷冻稀释液冷冻保存精子,精子在A液中的冻后活力和寿命分别可达53．50±6．69％和98．00±13．51s,冷冻效果优于B液（P〈0．05）。冷冻后精子的受精率和孵化率分别为55．00±5．00％和35．00±13．23％,受精率与鲜精无显著性差异（P〉0．05）,因此认为MPRS＋2．8mol／L DMSO可用于半滑舌鳎精子的冷冻保存。     

半滑舌鳎土池养殖试验

2006年6月,从山东引进半滑舌鳎鱼苗950尾于面积0.2 hm2的单养池塘进行试养.经过8个月的养殖,至2007年2月,共捕获半滑舌鳎810尾,起捕率85%,最大舌鳎鱼体长达到36 cm,体质量405 g,平均体长30.5 cm,体质量340 g.试验过程中发现在33 ℃高温和10 ℃的低温季节,半滑舌鳎均可生长,月平均增长率甚至高达28%,在此温度范围内,半滑舌鳎的生长与温度的相关关系不显著;但对温度快速下降的耐受性较差,易钻泥导致窒息死亡.     

半滑舌鳎人工育苗技术研究

研究采用人工繁殖苗种,经室内人工养殖促熟培育及繁殖调控,达到自然产卵受精。利用传统对虾育苗池,采用人工控温、生态调控育苗技术,成功培育出健康半滑舌鳎苗种,体色正常,自初孵仔鱼至今育苗成活率37.5%。     

半滑舌鳎染色体核型分析

The tonguefish Cynoglossus semilaevis (Giinther) is a rare fish species in Chinese offing, inhabiting in the warm water bottom. The metaphase chromosome preparation of the fries has been got from their fins by hot air drying methods, while the metaphase chromosomes of one year old young fish which has physiologically sex differentiation has teen got from their renal tissues by the method of PHA and colchicine injection. The karyotypes were examined. The result shows that there are 42 acrocentric chromosomes in diploid and their karyotype formula is 2n = 42t, and there existed heterotypic sex chromosome which belongs to ZW/ZZ type. The sex ratio in artificial bred stock is nearly 1 : 1.     

半滑舌鳎营养需求研究进展

概述了国内外关于半滑舌鳎对营养物质需求的研究进展,以期对半滑舌鳎营养学研究的完善起到一定的引导作用,为开发适合半滑舌鳎养殖的配合饲料提供理论依据。     

半滑舌鳎胚胎发育及其与水温的关系

2002年8～9月在山东莱州明波水产公司养鱼场,半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther, 1873)亲鱼经人工诱导催熟,在亲鱼培养池中雌、雄个体同时排卵、排精并完成了自然授精.卵子受精后,对受精卵进行连续的取样,在Nikon SMZ-10双筒解剖镜下观察胚胎发育的全过程.培养水温20.5～21.6 ℃,盐度33.50,pH 7.8～8.6,受精卵1 h 30 min细胞开始分裂,4 h 5 min为多细胞期,5 h 0 min为囊胚期,22 h 20 min胚孔关闭,40 h 20 min仔鱼开始孵出.根据本次实验以及1982年、1987年、1989年和2002年8月进行的半滑舌鳎人工孵化实验结果,应用3种数学统计方法,从理论上对半滑舌鳎胚胎发育的阈温度和有效积温值进行计算,结果表明,半滑舌鳎胚胎发育的阈温度和有效积温分别为13.2 ℃和347.0 ℃·h.     

野生半滑舌鳎的驯养技术

摘要野生半滑舌鳎必须经过驯养后才能做为人工养殖亲鱼使用。试验结果表明，定置网捕获的半滑舌鳎比拖网捕获的成活率高，专门驯养比虾池粗养成活率高。获取野生鱼时的水温与驯养成活率关系密切，5、6、7月份，水温12～22℃时．驯养成活率为50％；8、9月份，水温高于22℃时，驯养成活率为0；11月份水温17．2～12．4℃时，成活率62．9％；12．4～7℃时，成活率36．8％。2003年5月22日～12月5日，共获取野生鱼165尾，驯养成活68尾，成活率41．2％。野生雌鱼随性腺发育程度的增加其驯养难度加大。野生鱼开口摄食是驯养成功的关键因素之一，活沙蚕是好的开口饵料。营造好的驯养环境和及时药物处理能缩短驯养时间和提高成活率。驯养雌、雄性比以1：3～4为宜。借助生殖调控措施，春、夏季获取的野生鱼秋季就可产卵，好卵占23．4％。     

半滑舌鳎人工育苗技术研究

利用传统对虾育苗池,采用人工控温、生态调控育苗技术,成功培育出健康半滑舌鳎苗种,体色正常,育苗成活率37.5%。     

半滑舌鳎卵巢发育的组织学和形态数量特征研究

采用组织学方法系统研究了人工养殖条件下半滑舌鳎亲鱼卵巢的组织发育周年变化特征.结果表明,卵母细胞发育可分为6个时相,卵巢发育分为6期.卵巢不同发育时期都由不同类型的卵母细胞组成,半滑舌鳎为非同步分批多次产卵类型.周年发育过程中,6月龄前的鱼卵巢发育处于第Ⅰ期;9～12月龄卵巢可发育至第Ⅱ期;12月龄半滑舌鳎性腺可发育达到Ⅲ期,并一直保持至24月龄.3龄雌鱼达到性成熟,卵巢可发育至第Ⅳ期;随着水温和光周期的调控,卵巢发育进入成熟期(Ⅴ期),发生水合现象是卵母细胞成熟并准备排卵的信号;产卵结束后卵巢退化至第Ⅵ期,排出的卵母细胞退化吸收,以Ⅲ期卵巢越冬后,卵巢退化至Ⅱ期并持续至下一个繁殖周期.人工养殖条件下,卵巢内存在卵母细胞闭锁现象.性腺周年发育过程中,性腺指数(GSI)在性腺达到成熟期时达到峰值,产卵结束后性腺快速退化,GSI值各月份差异显著(P<0.05),亲鱼性腺重量在卵巢发育成熟过程中一直处于生长状态.亲鱼肝脏指数(HSI)在产卵前7～8月份(性腺达到成熟期前30 d左右)达到最大,表明7～8月份是性腺进行卵子发育、卵黄能量储备的重要时期,亲鱼在产卵前通过积极摄食储备体内能量,肝脏在卵母细胞卵黄积累方面具有重要的生理作用.肥满度(CF)值在繁殖盛期10～11月份达到最大,表现出与GSI类似的变化趋势.     

半滑舌鳎血液指标分析

以20尾半滑舌鳎为材料,测定了红细胞教、白细胞总教、血红蛋白值、白细胞分类计数、红细胞脆性与红细胞及其核大小等正常血液指标,并统计了性别与血液指标的关系,结果如下：红细胞数为（207.88±56.25）×10^4个／mm^3;白细胞数为（9.39±5.54）×10^4个／mm^3;红细胞脆性（0.25±0.02）／g％;血红蛋白含量为（12.36±0.10）g／100mL;白细胞分类记教中单核细胞占1.51‰,中性粒细胞占（98.85±2.51）％,而淋巴细胞、嗜碱性白细胞以及嗜酸性白细胞观测到的数目很少;红细胞大小（长径×短径）为：（7.524±0.58）μm×（6.29±0.72）μm,红细胞核大小（长径×短径）为：（3.14±O.68）μm×（2.54±0.59）μm。红细胞长径、红细胞核长径、短径在雌、雄中有极显著差异,红细胞短径在雌、雄性别中有显著差异,其他的血液指标在雌、雄中则无显著差异。     

半滑舌鳎结节病的初步研究

阐述了半滑舌鳎结节病的典型症状、流行情况,进行了病原学探索性研究,初步确定该病不是由病毒引起。对于患病鱼体肝脏、肾脏和脾脏的组织进行了病理分析,认为病原侵入鱼体主要组织造成组织病变,是导致其死亡的主要原因。     

半滑舌鳎苗种生产技术的开发研究

总结了2003～2004年作者对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis Günther)工厂化育苗技术的开发研究结果,论述了半滑舌鳎苗种生产过程的关键技术。通过改进亲鱼培育条件和强化培育、受精卵孵化条件的综合调控、加强饵料的合理搭配和投喂、水环境调控等技术措施,提高了苗种成活率,完善了半滑舌鳎苗种生产技术工艺,取得了良好的育苗效果。两年间在莱州、海阳、胶南3个试验基地分别培育出全长30～40mm的半滑舌鳎苗种84.8万尾、131万尾和61.5万尾,单位面积平均出苗量分别为1696尾/m2、1985尾/m2和2050尾/m2,苗种成活率分别达到20.2%、25.5%和30.9%。在国内首次实现了半滑舌鳎苗种规模化生产连续成功并突破百万尾大关。     

渤海半滑舌鳎人工育苗工艺技术的研究

对渤海半滑舌鳎人工育苗的水温、盐度、饵料等培育条件与种苗发育、生长及成活率的关系进行了试验,建立了人工育苗工艺流程。结果表明半滑舌鳎受精卵在不同水温范围内的孵化率有明显差别。种苗培育分前期、后期和幼鱼期3个阶段。前期鱼苗成活率为12.9％;后期为66.0％;幼鱼期为100％。饵料种类为轮虫、挠足类和卤虫,开口饵料为轮虫。1987年2次分别育出仔鱼4.8万尾和0.6万尾;1989年育出仔鱼3.13万尾,45天内培育出完全变态的鱼苗3080尾。种苗培育80天,体长达30.0mm,外形与成鱼完全相同,达到放流规格。     

半滑舌鳎生物学及其养殖生态研究

对国内半滑舌鳎生物学及其养殖生态的研究进行了总结,提出了半滑舌鳎今后研究的方向。