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根据透明颤菌血红蛋白(VHb)的氨基酸序列,按照植物偏爱密码子,对透明颤菌血红蛋白基因(vgb)进行优化改造,同时考虑到可实现分别克隆拼接的酶切位点,设计并合成了22条单链DNA短片段,通过拼接获得了全长450 bp的透明颤菌血红蛋白基因vgbM,并将其克隆至pUC19上,获得重组质粒pGSVHB。利用设计的引物,通过PCR在vgbM基因的5′端引入NcoⅠ位点,将其克隆到原核生物高效表达载体pBV221上,获得质粒pBV221SVHB。转化E.coli. BL21并经热激诱导表达后,在培养物中检测到了约16 kD的VHb蛋白。经CO差示光谱分析测定,该蛋白具有生物活性。为透明颤菌血红蛋白基因vgbM在植物基因工程研究中的应用奠定了基础。 相似文献
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为研究透明颤菌血红蛋白基因vgb对黄原胶合成的影响,采用原生质体电转化的方法,将vgb与质粒pUC18构建的重组克隆pUC-LV,转入野油菜黄单胞杆菌中,并对转化菌和初发菌进行了PCR检测和摇瓶发酵试验。结果显示:vgb成功导入黄单胞杆菌,与初发菌相比,转化菌的黄原胶产量平均提高了15.91%,说明透明颤菌血红蛋白基因vgb的导入有利于黄原胶的合成。 相似文献
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将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)转移到链霉菌染色体整合载体的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
链霉菌抗生素的生物合成对培养环境中氧的供应相当敏感,为了改善这一溶氧问题,本研究通过将透明颤菌血红蛋白基因(vgb)克隆到含ФC31int,attP基因的诱导型表达载体pU8600上,构建了可接合转移到链霉菌的整合型表达vgb基因的质粒pHZ1276。pHZ1276通过接合转移导入变铅青链霉菌(Streptomyces lividans),所得重组子经Southern杂交验证后,进行诱导表达,菌体经破碎后所得蛋白粗提物经Western杂交和CO结合试验表明vgb基因在该菌中表达出了有活性的VHb蛋白。 相似文献
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透明颤菌血红蛋白基因在吸水链霉菌NND-52-C中的克隆与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将透明颤菌血红蛋白基因(vgb基因)克隆至链霉菌的质粒载体pIJ702中,构建成表达载体pLY702,并将pLY702质粒转化阿扎霉素B的高产菌株——吸水链霉菌NND—52—C的原生质体,获得转化子H。经发酵实验表明,在限氧的条件下,可以使NND—52—C菌株的生物量提高14.4%,阿扎霉素B的产量提高30.8%。 相似文献
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应用荧光定量PCR技术SYBR Green I荧光染料法,对透明颤菌血红蛋白基因vgb在转基因棉花中的表达水平进行相对定量分析,建立了快速检测转基因产品中基因表达量的方法。通过该方法检测出了vgb基因在转基因棉花不同株系里的相对表达量,且表达量有差异。该方法具有灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快等特点。 相似文献
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沼泽红假单胞菌类胡萝卜素稳定性的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
研究了沼泽红假单胞菌类胡萝卜素的稳定性。该色素对氧,光照,温度的作用有一定的耐受性,在微酸性至弱碱性条件下有较好的稳定性。但当氧,光照,温度的作用强度增加,介质PH值进一步改变,该色素将受到破坏,表现为褪色或变色,吸收光谱发生改变。 相似文献