非繁殖季节太行山羊胚胎移植方案研究

对48只太行山羊(供体羊)、40只布尔山羊和120只唐山奶山羊(受体羊)进行了同期发情、超数排卵和胚胎移植试验.试验结果表明:CIDR+PMSG组对布尔山羊同期发情,有效发情率为75%;CIDR+FSH组对唐山奶山羊同期发情,有效发情率为73%;CIDR+FSH+LH组平均可用胚胎数与CIDR+PMSG组和CIDR+PMSG+LH组差异均达到极显著水平(P<0.01),与CIDR+FSH组差异显著(P<0.05).用CIDR+FSH+LH法超数排卵时,CIDR+FSH组对唐山奶山羊进行同步发情,受体妊娠率为56%;CIDR+PMSG组对布尔山羊同步发情,受体妊娠率为60%水平.因此,在非繁殖季节对太行山羊采用CIDR+FSH+LH法超数排卵和以布尔山羊及唐山奶山羊为受体分别用CIDR+PMSG和CIDR+FSH同步发情来进行胚胎移植的技术方案是可行的.     

山羊鲜胚及冻胚移植

经超排处理获黑山羊3日龄新鲜胚眙12枚,分别移植到同期发情的6只白色受体羊,其中2只妊娠,产羔3只,受体妊娠率为33.3‰(2/6),鲜胚移植成功率25.0%(3/12)。7日龄山羊冷冻胚胎35枚,分别移植到同期发情的18只浏阳黑山羊和白色马头山羊受体母羊,其中7只妊娠,受体妊娠率为38.89%(7/18)。产活羔10只,流产1只,冻胚移植成功率31.43%(11/35)。     

波尔山羊活体采卵与卵母细胞体外受精技术

对10只不孕不育波尔母山羊采用超数排卵、活体采卵、卵母细胞体外成熟培养以及体外受精等技术方法,探讨其是否能正常繁育后代。试验中6只供体经超数排卵处理,在发情前利用特制的采卵装置进行活体采卵,共采集到30枚形态学正常的卵母细胞。经过体外成熟培养,有21枚成熟卵母细胞进行了体外受精处理和培养,获得16枚2 细胞胚胎,移植到4只同期发情的当地山羊受体输卵管内,经妊娠检验,有两只受体受孕,其中1只受体产出正常羔羊2只。该技术经进一步改进完善后可望作为不孕不育波尔山羊繁殖后代的辅助生育技术。     

山羊配子输卵管内移植受精技术

以2只屡配不孕"波尔山羊"、1只F2代杂交波尔山羊、6只"徐淮白山羊"为卵子供体,经同期发情和超排处理,腹腔镜观察卵巢卵泡发育状况后筛选出供手术采卵供体。从7只供体中采集到可用卵子39枚,采用输卵管内配子移植(GIFT)技术植入受体徐淮母羊12只。移植后连续3个发情周期妊娠鉴定表明,12只受体中有6只未返情,妊娠率为50%。2只受体产单羔,1只受体产3羔(难产)。共移植39枚卵子,5枚发育为后代,配子受精发育率为13%。     

波尔山羊胚胎移植产业化关键技术研究

为使波尔山羊胚胎移植形成产业,对供、受体羊的选择、同期发情、超数排卵、采胚、检胚与移植等关键技术进行了研究.在非繁殖季节(北京地区 4月至 8月),供体波尔山羊 15只,受体羊(马头山羊) 76只,受胎率为 71.0%,移植产羔率为 42.1%;在繁殖季节(北京地区 9月至翌年 3月),供体波尔山羊 34只,受体羊(马头山羊) 98只,受胎率为 68.4%,移植产羔率为 48.0%.这表明波尔山羊胚胎移植可以从研究阶段发展到产业化应用阶段.     

波尔山羊胚胎移植技术及应用效果研究

采用CIDR+FSH方法,对66只周岁波尔山羊进行超数排卵处理,63只超数排卵有效,有效率达到95.45%;平均每只羊冲取胚胎15.35枚,其中最高个体获得胚胎43枚。采用CIDR+PMSG方法对本地山羊进行同期发情处理,24h内发情率达到87.67%。对受体羊单胚移植后,两个情期的不返情率达62.76%,实际产羔率为51.46%。受体羊与供体羊的发情时间同步、晚12h、晚24h,胚胎移植受胎率差异不大,受体羊第二次手术与第一次手术移植对产羔率影响不大。     

山羊卵巢卵母细胞的体外受精试验

将18枚细胞质均匀、包有完整致密卵丘细胞的山羊小卵泡(2～5mm)卵母细胞培养于含有hCG(20μg/mL)和FCS(10％)的TCM_(199)中30h,然后用经含有肝素(20μg/mL)和BSA(10mg/mL)的BO液诱导获能的山羊新鲜精子进行授精处理,授精后8h,转移入含有10％FCS的TCM_(199)中继续培养12h,结果有10枚卵子成熟,成熟率为55.6％,7枚卵子受精,受精率为70％。把7枚原核期受精卵移植给3只同期发情的受体山羊,2只妊娠,妊娠率为66.7％,并获得一只雄性试管山羊胎羔,胎龄为52d。     

波尔山羊批量胚胎移植莎能奶山羊

采用阴道栓 FSH超数排卵,经产供体波尔山羊22只,在放栓后第9～11天,连续4d递减量肌肉注射FSH。22只供体羊发情与纯种波尔山羊种公羊配种后第7天,手术回收输卵管中早期发育胚胎再经手术移入同期发情的受体奶山羊输卵管内妊娠产仔。结果表明:1获得373枚早期胚胎,其中A级胚胎占31.1%(85/273),B级胚胎占49.5%(135/273),异常胚胎占19.4%(53/273)。2将167枚7日龄可用胚胎(A级和B级)移植147只受体羊输卵管内,移植后35d,妊娠98只,妊娠率为67%(98/147),83只羊足月产羔为89只,产羔率为85%(89/98),20只受体移植了两枚胚胎,只有6只产双羔。3羔羊出生重平均为3.7±0.54kg。每只供体羊平均产羔4.05只。胚胎移植所得羔羊的初生重与自然繁殖波尔羔羊无显著差异(P>0.05)。试验证明,山羊胚胎移植计划可使良种群体繁殖率提高3～5倍,优秀个体繁殖力提高6～8倍,从而加快纯种山羊的繁殖。     

山羊受精卵形态及原核观察初探

用性激素对山羊进行超数排卵处理后,在山羊发情配种后的34～49h内取卵,研究受精卵及原核的形态学。结果表明,单细胞受精卵的表面形态、色素及内含物颗粒、卵周隙等发生了明显的变化,原核在发情配种后45～46h开始显现,在48h,原核最为清晰,估计维持时间为4h。     

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

肉牛IVF胚胎移植应用研究

;1999~2002年,应用肉牛IVF胚胎1000枚在当地7个移植点散养农户中移植受体母牛625头,总体受胎率为33.0%,已产活犊牛164头。其中诱导同期发情处理受体牛399头,发情217头,移植123头,受胎率25.2%;自然发情受体牛852头,移植502头,受胎率34.3%(P>0.05)。初步确定了应用国产氯前列烯醇(CLO)诱导同期发情的程序和剂量,对胚胎解冻方法和黄体功能与受胎率之间的关系进行了探讨,对不同品种、年龄和饲养管理方式的移植效果进行了比较,分析了受体牛移植后的再繁殖能力。     

犬的胚胎移植初步试验

试验摸索了犬输卵管和子宫角胚胎移植的方法和技术,为犬转基因和克隆研究提供技术参考,同时了解输卵管胚胎移植和子宫角胚胎移植对移植成功率的差异.通过对同期发情同步配种的供体北京犬进行输卵管和子宫角冲卵、受体北京犬输卵管和子宫角鲜胚移植,结果在8只受体犬中有1只犬于手术后成功怀孕并顺利产下1头胚胎移植雄性幼犬.子宫角回收法的胚胎回收率稍低于输卵管回收法.     

小型农牧场及农户波尔山羊胚胎移植关键技术研究

从小型农牧场及农户特点出发,探讨在这些场(户)进行波尔山羊胚胎移植时,供体超数排卵、受体同期发情、供受体羊胚胎回收和移植操作等关键技术对胚胎移植效率的影响。结果表明,调整供、受体母羊的发情周期并采用优化超排程序和同期发情程序,可获得理想的超排和同期发情结果,有效手术供体回收卵数平均达到(17.31±6.93)枚,可用胚(14.96±6.28)枚;受体同期发情率达到94.28%(2125/2254),手术受体利用率为86.55%(1602/1851)。严格而熟练的手术操作可提高供体利用次数,获得理想的胚胎移植结果,将2648枚胚胎移植给1602只受体后,妊娠率达到66.85%(1071/1602),其中1044只受体妊娠足月,产羔1320只。     

育成波尔山羊的胚胎移植

通过选取育成波尔山羊进行胚胎移植，旨在探讨育成波尔母羊提供胚胎的质量、数量和年龄，供受体发情同步差，移植胚胎数等对胚胎移植成功率的影响因素分析，进一步开拓胚胎移植的技术应用研究。     

山羊外源基因转移技术

对24头供体山羊进行超数排卵处理,16头超排有效。在第1次配种后48h左右取卵,共收集到卵155个。回收率79.08％(155/16)。平均每头供体排卵12.25个(196/16)。在Normarski干涉相差显微镜下观察65个单细胞受精卵及29个2～4细胞期胚胎的原核及细胞核,并分别注射人生长激素基因(p~(SMGHI)/BamHI),其中91枚移植到经同期发情处理的14头受体中。结果7头妊娠,共产活羔11头,死胎1头。经用Digoxigcnin标记核酸探针对转移基因羊检测,4头整合了外源基因。整合频率为33.33％(4/12)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)对仍存活的2头未整合、2头整合羊检测是否表达外源基因,全为阴性。     

季节对山羊同期发情处理效果的影响

将316只经产空怀母羊分成4组,分别在春季、夏季、秋季和冬季用孕激素阴道栓结合前列腺素和垂体促滤泡素进行同期发情处理,并在发情结束后剖检部分山羊检查卵巢排卵点与黄体情况.结果表明:处理羊只的发情率以秋季最高,为94.74%;与春、夏、冬季相比差异极显著(P＜0.01);以夏季发情率最低,仅为59.55%;春季和冬季发情率分别为72.57%和78.95%,处于中等.山羊剖检结果表明春、夏、秋和冬季分别有4只、4只、14只和10只母羊有经排卵形成的1～2个排卵点(或新生黄体),分别占各季剖检山羊的80.00%,80.00%,87.50%和83.33%.反映季节是影响山羊同期发情处理效果的一个重要因素.     

季节对山羊同期发情处理效果的影响

将316只经产空怀母羊分成4组,分别在春季、夏季、秋季和冬季用孕激素阴道栓结合前列腺素和垂体促滤泡素进行同期发情处理,并在发情结束后剖检部分山羊检查卵巢排卵点与黄体情况.结果表明处理羊只的发情率以秋季最高,为94.74%;与春、夏、冬季相比差异极显著(P＜0.01);以夏季发情率最低,仅为59.55%;春季和冬季发情率分别为72.57%和78.95%,处于中等.山羊剖检结果表明春、夏、秋和冬季分别有4只、4只、14只和10只母羊有经排卵形成的1～2个排卵点(或新生黄体),分别占各季剖检山羊的80.00%,80.00%,87.50%和83.33%.反映季节是影响山羊同期发情处理效果的一个重要因素.     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力,应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明:两种处理方法(PG-FSH法与CIDR-FSH法)对波尔山羊的同期发情率无显著差异(P>0.05),波尔山羊同期发情率达到92.5%;CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于(P<0.05)PG-FSH法,而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著(P>0.05),说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明,移胚数量对受体妊娠率无显著影响(P>0.05),而对受体产羔率有极显著(P<0.01)的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

波尔山羊胚胎移植受胎率影响因素分析

分析了波尔山羊胚胎移植时受胎率的影响因素。研究表明:山羊供、受体发情同步差在±24h之内较好,尤其以受体羊撤栓早12h最佳;移植最佳季节为9—10月份;胚龄对移植效果能产生较大影响,囊胚移植成活率最高可达80%,移胚数量以2枚为宜;母性强的受体移植效果优于母性差的品种;良好的饲养管理可提高移植效果。     

提高牛冷冻胚胎移植妊娠产犊率的研究

分别对牛冷冻胚胎的解冻液、解冻后胚胎的质量评定、解冻后的胚胎处理,及受体牛的同步发情处理方法和移植方法等方面开展研究。结果表明：(1)进口解冻液脱甘油的胚胎复苏率为76％(19／25),优于传统解冻液。(2)解冻后未作任何处理直接移植的妊娠率(68．4％),产犊率(47．37％)最高,切割未作培养的次之(妊娠率37．5％,产犊率25％,流产率33．3％),移植前切割培养的最差(妊娠率、产犊率均为9．09％);(3)受体黄体发育正常、同步发情率高达83％,妊娠率高达62．5％;(4)移植枪加套管受体妊娠率(52．9％)明显比不加套管的高。熟练的操作技术受体妊娠率较高(62．5％)。