鸡球虫早熟株的选育及其致病性研究

本试验通过对昌吉地区球虫流行病学的调查,选出昌吉地区鸡球虫病病原的优势种柔嫩艾美尔球虫,应用单卵囊分离技术成功分离出纯种球虫虫株,并对其进行早熟系的初步选育。连续传6代后,选择30只15日龄健康无球虫感染鸡随机分成3组(n=10)(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组),Ⅰ、Ⅱ组分别口服接种等量(1.5×104个/只)经6代选育的早熟株和亲本株孢子化卵囊,Ⅲ组为不接种空白对照组,根据临床表现、成活率、每克粪便中卵囊数(O.P.G)、病变计分等指标判断早熟株与亲本株致病性差异,以及与不感染对照组的差别来衡量选育结果。结果表明早熟株与亲本株、早熟株与对照组的成活率、每克粪便中卵囊数、病变计分的差异不显著,说明了早熟株的致病性没有明显的降低,可能是选育代数过少所致。     

鸡巨型艾美耳球虫早熟株选育及其生物学特性研究

为选育鸡巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株,并对其生物学特性进行研究,采用早熟选育法对E.maxima亲本株进行连续鸡体传代以获得早熟株,再分别将鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊以不同剂量口服接种14日龄无特定病原(SPF)雏鸡,测定E.maxima亲本株和早熟株的潜隐期、卵囊形态大小,并分析比较其致病性强弱和繁殖力高低。结果表明,成功选育出潜隐期为113 h的鸡E.maxima早熟株,其卵囊长和宽均显著小于亲本株卵囊。在整个试验过程中,各组鸡接种E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊后均无死亡现象;当鸡E.maxima亲本株和早熟株孢子化卵囊接种剂量为0.5×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的相对体质量增加率显著大于亲本株组;接种量在10.0×10~4～20.0×10~4个/羽时,等剂量下E.maxima早熟株组鸡的肠道病变记分显著低于亲本株组;随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组鸡的相对体质量增加率逐渐降低,临床症状逐渐加重。此外,相同接种剂量下,E.maxima早熟株组卵囊产量均显著低于亲本株组,前者卵囊产量是后者的60%～75%;但随接种剂量的增加,E.maxima亲本株和早熟株组单卵囊繁殖力均呈下降趋势。综上,选育的鸡E.maxima早熟株与亲本株相比,致病力减弱、繁殖能力降低,能够为球虫多价活疫苗提供E.maxima虫种,以进一步加强鸡球虫病的防治。     

毒害艾美耳球虫早熟株致病性与繁殖力的研究

为选育制备弱毒疫苗所需的毒害艾美耳球虫(Eimeria.necatrix)早熟株,以临床表现、平均增重、相对增重率、小肠病变记分、血便记分、死亡率、每克粪便中的卵囊数(OPG)、卵囊总产量和每个卵囊的繁殖能力为指标,研究了E.necatrix早熟株与亲本株的致病性和繁殖力。结果表明该早熟株与其亲本株相比,早熟株的致病性降低了,接种相同剂量时早熟株平均增重、相对增重率高于亲本株,病变记分、血便记分和死亡率均低于亲本株;早熟株产卵高峰提前,繁殖力下降至亲本株的55%左右,符合球虫早熟疫苗株的特性。     

鸡毒害艾美尔球虫早熟株的免疫原性研究

为制备早熟弱毒疫苗提供虫株和理论依据,对选育的毒害艾美尔球虫早熟株(P8)和亲本株(P0)的免疫原性进行了研究。试验分别用P0和P8,以每只鸡300个孢子化卵囊免疫7日龄雏鸡,免疫后14 d,分别以每只鸡1×104和10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒,以OPG、平均每只鸡的卵囊产量,卵囊减少率、相对增重率、病变记分减少率为指标。结果表明:(1)攻毒后每只1×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组的卵囊减少率分别为75.59%、84.66%;(2)攻毒后每只10×104个P0孢子化的卵囊时,P8、P0免疫攻毒组病变记分降低率分别为81.46%、76.66%。表明P8株的免疫原性与P0无明显变化,均有保护力,符合早熟株免疫原性保持不变的特点。     

高繁殖力瘦肉猪新品系(DIV2系)选育研究

随着人们生活水平的提高 ,肉类的需求也不断增加 ,其中我国年肉类需要量的77% 〔1〕左右为猪肉 ,这对养殖业是一个挑战 ,尤其是瘦肉猪的生产。然而 ,在近代瘦肉猪生产中 ,瘦肉率与生长速度提高的同时 ,猪的繁殖性能低和适应性差却困绕着养猪生产。为此 ,华中农业大学养猪研究组在完成中国瘦肉猪新品系的选育研究这一国家重点攻关项目时 ,考虑到保存我国优良猪种—梅山猪的繁殖性能好与适应性强的优点 ,引入外来瘦肉率高 ,生长快的传统品种大约克 ,通过育成杂交 ,培育出一个生长快 ,瘦肉率高 ,肉质好 ,繁殖性能高 ,适应性强的优良瘦肉猪新品…     

几个水稻早熟两用核不育系的选育及利用评价

从核不育基因源、核不育基因受体和低世代核不育系的筛选方法等方面阐述了几个水稻早熟两用核不育系的选育策略，同时对新选育的几个早熟核不育系GD-4S、GD-5S和GD-9S的特征特性及生产利用前景作了分析。     

高繁殖力石岐杂鸡新品系选育(C系)

为适应优质肉鸡消费需求由数量型向质量型转化,本研究在中国地方优良鸡种石岐杂基础上,主要针对繁殖性状、体重和体型外貌,采用半同胞选配模式进行了3个世代的选育.第3代核心群(公鸡300羽、母鸡1 511羽)鸡只主要性能指标:50%开产日龄153 d,初生重、56日龄公母鸡平均体重和开产体重分别为35.2、935.8和2 027 g,71周龄产蛋量179枚,饲料报酬3:1,受精率和孵化率分别为90.5%和79.3%.核心群开产日龄提早,产蛋量提高,保持了原石岐杂品种体型外貌,遗传稳定性和整齐度也得到一定提高,标志着早熟高繁优质石岐杂鸡新品系(C系)选育成功.     

6株巨型艾美耳球虫繁殖力的比较研究

用巨型艾美耳球虫(Eimeriamaxima)上海株、扬州株、南通株等不同地区的6株孢子化卵囊100个·只-1,经嗉囊接种7日龄无球虫黄羽公雏肉鸡,以麦克马斯特氏法计数感染后6～14d每天24h排出的卵囊。结果表明:广州株排卵囊量最多,与凤阳株和龙岩株相近;上海株排卵囊量最少,与扬州株、南通株相近;广州株与上海株、扬州株和南通株均差异显著。各虫株的显露期相似,在感染后第7天排卵囊量达峰值,第6～8天排出的卵囊量占总量的80%～90%,第10天接近0。     

岭南黄鸡D系的选育及其配套利用研究

从石岐杂＊Ａｎａｋ－４０后代选育基础群中组建１２个零世代家系作为岭南黄鸡Ｄ系的核心育种群，１－３世代采用非近亲家系选育法、４－５世代采用随机交配闭锁选育法选育。     

毒害艾美耳球虫早熟株对鸡免疫效果的评价

[目的]探讨毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)早熟株对鸡的免疫效果,为获得安全有效的鸡球虫疫苗株提供试验参考依据.[方法]取4日龄健康、体质量50～70 g鸡随机分为4组,分别为对照组、盐酸氨丙啉添加组、一免组和二免组,每组50只鸡地面饲养,试验期81 d.对照组、免疫组(免疫组包括一免组和二免组)鸡饲喂基础日粮,盐酸氨丙啉添加组鸡按照药物说明全程基础日粮加盐酸氨丙啉拌服.一免组鸡4日龄一免,剂量1 000个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊;二免组鸡53日龄二免,剂量200个/只毒害艾美耳球虫早熟株孢子化卵囊.鸡25日龄、53日龄、74日龄时从地面饲养的各组随机抽取6只鸡移到笼上饲养,同时设置红对照组(鸡不免疫不喂药仅攻毒).笼养鸡除对照组外,其他组鸡均攻毒,攻毒方法为逐只鸡经口接种毒害艾美耳球虫亲本株(10X104个孢子化卵囊/只).肉眼观察鸡临床症状,测定鸡平均相对体增质量、小肠病变记分、小肠病变记分减少率、存活率、卵囊减少率与抗球虫指数等指标.[结果]免疫鸡攻毒后,临床观察对照组鸡精神状态良好,未出现任何异常症状;免疫组与红对照组相比精神状态良好、血便减少.不同日龄鸡(25日龄、53日龄和74日龄)攻毒后第7天,盐酸氨丙啉添加组和免疫组鸡相对体增质量均明显低于对照组但极显著高于红对照组且二免组高于一免组.免疫组鸡小肠平均病变记分均低于红对照组,小肠病变记分减少率高于红对照组,其中二免组不同日龄攻毒后鸡小肠平均病变记分均低于一免组,且74日龄鸡攻毒后小肠病变记分减少率最高.红对照组不同日龄鸡卵囊数极显著高于盐酸氨丙啉添加组和免疫组,其中免疫组53日龄鸡和74日龄鸡攻毒后卵囊数均显著高于盐酸氨丙啉添加组,卵囊减少率低于盐酸氨丙啉添加组,且二免组74日 龄鸡攻毒后卵囊减少率高达90％.免疫组不同日龄鸡抗球虫指数极显著高于红对照组,二免组不同日龄鸡抗球虫指数均高于145且高于一免组,即二免组鸡抗球虫效果达到中效水平.[结论]毒害艾美耳球虫早熟株2次免疫对鸡具有良好的保护效果,且对鸡生长发育的影响较小.     

蜡梅AFLP反应体系优化及引物筛选

通过对影响AFLP反应体系主要因素的优化,建立了蜡梅的AFLP反应体系,并筛选出了适宜该体系分析的引物.结果表明,20μL蜡梅AFLP最佳酶切体系为模板600 ng DNA,3 U Pst I和3 U Mse I,在37℃下双酶切2 h;在20μL最佳连接体系中酶切产物为15μL,3 U T4连接酶,0.25μmol.L-1 Pst I接头,2.5μmol.L-1 Mse I接头,1μL 10×T4 Buffer,在22℃下连接10 h;在20μL最佳预扩反应体系中稀释10倍的连接产5μL,2.0mmol.L-1 Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC);在20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释20倍的预扩增产物,2.0 mmol.L-1的Mg2+,2 U Taq酶,300μmol.L-1 dNTP,0.5μmol.L-1 Pst I和Mse I引物(P+AGA/M+ATC).最后,利用上面的体系筛选出了96对适宜于蜡梅AFLP分析的引物.     

鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究

运用单卵囊分离提取技术,从绵阳某鸡场艾美虫感染粪便中获得1株纯种艾美虫卵囊,该艾美虫主要寄生在鸡盲肠,卵囊绝大多数呈宽卵圆形,无卵膜孔,有1个圆形极粒位于窄端,无内外残体,孢子囊有斯氏体,最短孢子化时间为19 h .通过随机测定200个卵囊后发现,卵囊的大小为(18.4～25.5) μm×(14.6～20.2) μm,平均大小为(21.62±2.08) μm×(18.15±1.83) μm;随机测定200个孢子囊后发现,孢子囊大小为(10.5～12.6) μm×(5.1～6.8) μm,平均大小为(11.77±0.87) μm×(6.29±0.69) μm.雏鸡在感染后5 d开始拉血便,6 d后症状加剧,鸡出现死亡.对照国内外相关文献,初步确定分离出来的艾美虫为鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella).对分离虫株卵囊致病性的研究结果表明,鸡一旦感染,其体重会受到影响,严重感染则会造成大量死亡.随着卵囊感染量增多,雏鸡死亡率也随之增高,当雏鸡感染量为8.0万个卵囊时致死率高达100%,表明所分离的柔嫩艾美耳球虫绵阳株致病力很强.     

姬菇新菌株宁姬018选育及生物学特性

姬菇（Pleurotus cornucopiae），是一种营养高、味道好，热量低的健康食品。为了适应松杉木屑栽培，本课题组从江苏省高邮市食用真菌研究所引进了姬菇1号。继实验室代料袋栽后，从袋栽中选取子实体粗壮、肥大的进行组织分离与人工驯化栽培后获一菌株，定名为“宁姬018”。然后对该菌株进行生物学特性和栽培特性研究。现将结果报道如下。     

斯氏艾美耳球虫小配子的发育及其超微结构

结合光镜和电镜、切片和涂片技术，对斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)小配子发育期的超微结构进行了研究。小配子发育分2个阶段——生长与核分裂阶段及小配子的形成与分化阶段。早期小配子体单核，核仁小；随着核的分裂变为双核、四核和多核小配子体，后者因核极多，浅层分叶形成小配子体胚以利于核周边排列。各小配子体胚周边的核与嵌于核前方的线粒体向前突出并生长，最后分化形成小配子落入带虫空泡。成熟的小配子有2根鞭毛、1个大线粒体和1个强嗜锇性核、被单层膜。结果表明斯氏艾美耳球虫小配子发育遵循艾美耳属球虫小配子发育的一般规律。     

柔嫩艾美耳球虫YZ株SO7基因的克隆与序列分析

对柔嫩艾美耳球虫(E im eria tenella)YZ株折光体SO 7基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。以纯化的发育7 h的E.tenella YZ株卵囊孢子提取的总RNA为模板,设计特异性引物,应用两步法RT-PCR技术扩增出SO 7基因特异性片段。将扩增出的片段插入pUCm-T载体,随机选择经蓝白斑筛选、PCR及酶切鉴定为阳性的两个克隆分别进行测序分析,并对结果进行验证。结果表明:两个阳性克隆所含插入片段的DNA序列完全一致,含全长为651个核苷酸的开放阅读框,富含AGC和CTG重复序列,编码区核苷酸与LS18株和B J株的同源性都为99.5%,与HB株同源性为99.4%,与GD株同源性为99.7%。其推测的氨基酸序列与LS18株和GD株的同源性都为99.1%,与B J和HB株同源性为98.6%。通过对其蛋白抗原性、表面可能性、亲水性、柔性区、二级结构等参数预测表明,YZ株核苷酸的变异未引起其蛋白主要特性和B细胞表位的变化。该结果为研制E.tenella的基因工程疫苗奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫LZ株MIC-5基因的克隆与表达

提取柔嫩艾美耳球虫兰州株孢子化卵囊总RNA,运用RT-PCR技术扩增Et MIC-5基因片段进行测序,并克隆入大肠杆菌表达载体pET28a中进行诱导表达.结果表明,该基因片段长918 bp,编码306个氨基酸.与GenBank报道的柔嫩艾美耳球虫Houghton株MIC-5基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列同源性为99.2%和99.6%.在推导的MIC-5氨基酸序列中,第15~89、90~160、173~242和245~306位保守的cys残基形成4个Apple样结构域(A-domain),推测该蛋白可能在虫体与宿主细胞的黏附中起重要作用.转化重组质粒pETMIC-5的BL21(DE3)经IPTG诱导后,SDS-PAGE和western blot分析证实目的蛋白成功表达,重组蛋白的表达量可占菌体蛋白的15.2%.     

柔嫩艾美耳球虫GZ株子孢子表面抗原基因的克隆及序列分析

利用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的孢子化10 h卵囊中扩增出了λMZ5-7基因,并把该基因片段克隆到pMD18-T载体上,对阳性克隆进行PCR鉴定及酶切分析并进行测序.结果表明,该序列全长936bp,为一完整的开放阅读框,与国外报道的柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子表面抗原基因λMz5-7的同源性为98%,氨基酸的同源性为95.6%.该基因的克隆有望用于基因工程苗的研究.     

生物絮凝剂产生菌的筛选及絮凝活性研究

从活性污泥中经过初筛复筛得到了一株絮凝率为94.3%的絮凝剂产生菌。对该菌株所产的生物絮凝剂单因素试验结果表明,最佳絮凝条件为:静置时间为3~5 min,生物絮凝剂投加量为2 mL,温度为20℃,pH为7~8、CaCl_2加入量为0.5 mL。对该菌株所产生物絮凝剂的正交试验结果表明,最佳絮凝条件为:发酵液投入量为3 m L、CaCl_2投加量为1 mL,pH为7。同时该絮凝菌在对污水的实际处理中有较好的效果,对COD及NH_3-N去除率分别达到62.35%和61.67%,并且可提高活性污泥沉降性能及脱水率,脱水率可达42%。     

柔嫩艾美耳球虫广东株微线蛋白-2 基因的克隆与序列分析

根据柔墩艾美耳球虫(Eimeria lenella)微线蛋白—2基因的cDNA序列设计一对特异性引物，以F．tenella广东株(EtGD)子孢子总RNA为模板，用RT—PCR方法成功扩增出EtGD微线蛋白—2(EtMic—2，GD)的cDNA序列。PCR产物连接到质粒pGEM—T—easy后，转化大肠杆菌DH5α。重组质粒经测序并与E．tenella北京株和豪顿株的MIC—2比较，开放阅读框架(0RF)核苷酸序列的同源性分别为99．70％(1023／1026)和99．61％(1022／1026)，推导的氨基酸序列间分别有两个氨基酸不同，同源性为99．41％(340／342)，经DNAsisstl．02分析，这种差异可影响EtMic—2的抗原性。