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快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒胶体金免疫层析方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
为建立一种快速、简便、灵敏的检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的胶体金免疫层析方法(GICA),本研究采用柠檬酸三钠还原法制备了胶体金颗粒,标记抗PRRSVN蛋白的单克隆抗体(MAb) 2D7制备免疫检测探针,将抗PRRSVN蛋白的MAb 1G7和羊抗鼠IgG抗体印迹在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线和质控线,经条件优化,组装成胶体金免疫层析试纸条.本研究制备的PRRSV胶体金试纸条的最低检测限度为103.0 TCID50/mL;在特异性试验中,试纸条检测PRRSV呈阳性,其它主要猪病病原均为阴性;不同批次试纸条重复检测,结果无差异;对现地猪场送检的150份病料进行PRRSV病原检测,与RT-PCR相比较,试纸条的特异性和敏感性分别为98.13%和88.37%.两种方法的一致性Kappa值为0.882.建立的PRRSV抗原胶体金免疫层析检测方法具有良好的的敏感性、特异性、重复性及现地应用性.该试纸条的研制为PRRS的快速诊断及免疫预防提供了技术手段. 相似文献
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为快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,应用抗猪繁殖与呼吸综合征病毒单克隆抗体PRRSV-3D10株和4H11株分别作为胶体金标记物和诊断抗体,羊抗鼠IgG作为质控线,制备胶体金免疫层析抗原检测试纸。该试纸卡具有良好的特异性、敏感性、重复性和稳定性,与PCR方法对比总符合率为93.3%。研究显示,本试纸卡能够快速、准确检测猪繁殖与呼吸综合征病毒,可为临床诊断提供参考。 相似文献
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根据Genbank上已报道的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组序列设计了2对LAMP引物(P-F3/P-B3、P-FIP/P-BIP),通过反转录-环介导等温扩增技术(RT-LAMP)反应条件的优化,建立了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RT-LAMP检测方法,并通过酶切的方法对阳性结果进行了验证。本方法最低可以检测到反应体系内1pg的PRRSV的RNA,表明本方法具有较高的检测灵敏度;通过在反应中加入SYBR-Green I荧光染料后可以方便地用肉眼对试验结果进行可视化判定。所以,本研究建立的PRRSV的RT-LAMP检测方法能够满足基层临床PRRSV病原的快速检测要求。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒引起的高度传染性病毒病。笔者就PRRS病毒的生物学特征、理化特性、基因组结构蛋白、免疫学特征以及疫苗等方面作一综述。 相似文献
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本研究以纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原作为诊断抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA诊断方法。该方法检测7种常见猪病病毒(PCV-2、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、CSFV)的阳性血清均为阴性;批内重复性试验的变异系数小于5%,批间重复性试验的变异系数小于10%;与商品化ELISA试剂盒相比较,符合率、敏感性和特异性分别为91.1%、90.5%和91.8%。本研究建立的PRRSVELISA检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性。 相似文献
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猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒基因芯片检测技术的建立与优化 总被引:2,自引:0,他引:2
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核衣壳蛋白编码基因序列设计了一对特异性引物P1/P2。扩增出大小为294bp的目的片段;再针对这个基因片段。设计合成4条寡核苷酸探针。其中反向引物的5’端用荧光素Cy3标记。以荧光标记不对称PCR技术为基础。通过将单链PCR产物与芯片杂交实现对PRRSV的检测。建立PRRSV的基因芯片检测方法。利用该方法对39份猪组织样品进行检测。与RT—PCR检测方法相比。本方法具有良好的特异性和敏感性。试验结果表明用该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,对该病的进行快速诊断和分子流行病学调查具有重要意义。 相似文献
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高致病性猪蓝耳病直接免疫荧光诊断方法的建立及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
以临床"高热综合征"病例中分离的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HBR变异株接种试验猪制备抗血清,采用硫酸铵盐析法提取血清中免疫球蛋白(IgG),并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记,建立了一种直接免疫荧光诊断方法(FA),用于检测病毒感染单层细胞及动物脏器组织切片中PRRSV抗原.本试验对PRRSV感染MARC-145细胞增殖动力学检测结果表明,接种后16 h可检测到抗原阳性细胞,接种后60 h~72 h达到病毒增殖高峰;对病毒人工感染猪脏器组织抗原分布检测结果显示,腹股沟淋巴结、空肠、睾丸、脾脏、下颌淋巴结、肠系膜淋巴结和扁桃体抗原阳性检测率较高;对临床10个猪场送检的38份病料平均阳性检出率为63.2%(24/38).该方法具有特异性强、敏感性和重复性好等特点,与RT-PCR检测结果符合率为96.3%,对几种已知猪病毒抗原无交叉反应,标记的荧光抗体于4℃保存6个月稳定.FA为PRRS的临床诊断提供了一种快速、便捷、敏感、特异的检测方法. 相似文献
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对PRRSV快速分型的多重RT-PCR方法的建立与应用 总被引:2,自引:2,他引:2
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的Nsp2基因间的差异,设计3对特异性扩增引物,建立快速检测PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的多重RT-PCR方法。利用PRRSV欧洲株、经典株和高致病性Nsp2变异株及其他相关病毒株进行敏感度和特异性试验。结果显示,所建立的多重RT-PCR对欧洲株、美洲经典株与高致病性Nsp2变异株的RNA最小检出量分别为0.050 2、0.055 4、0.056 4ng,与CSFV、TGEV、JEV、SIV的核酸均无交叉反应。用该方法检测病料76份,结果PRRSV欧洲株、美洲经典株和高致病性Nsp2变异株的阳性率分别为0、7.89%和53.9%,未发现3型病毒间有混合感染的情况。检测结果与单一RT-PCR及RT-PCR检测试剂盒检测结果一致,高于病毒分离。 相似文献
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从已构建的PRRSV ORF7重组质粒pUCm-T-ORF7中用PCR扩增ORF7基因亚克隆至表达载体pGEX-4T-3,构建重组表达质粒pGEX-4T-3-ORF7并转化大肠杆菌.经SDS-PAGE及Western blotting鉴定,成功表达了谷胱苷肽转移酶(GST)融合的核衣壳蛋白(N),重组N蛋白表达量约为菌体总蛋白的35%,主要以可溶的形式存在,且能形成同源二聚体.重组N蛋白经谷胱苷肽凝胶(glutathione sepharose 4B)亲和层析后得到高度纯化,并将该蛋白作为抗原建立了间接ELISA检测方法.利用该方法对某猪场76份猪血清进行检测并将结果与IDEXX公司ELISA试剂盒检测结果作比较,2种方法的总符合率达93.4%,检测结果之间差异不显著(P>0.05).结果表明大肠杆菌表达的重组GST融合N蛋白具有良好的抗原性,因而有望利用该重组蛋白开发为试剂盒应用于临床PRRSV抗体的检测. 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
<正>经典的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种主要表现为母猪繁殖障碍与新生仔猪呼吸道症状的传染病。近年来,国内新暴发和流行的高致病性PRRS,则以高热、高 相似文献
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猪蓝耳病病毒抗体双抗原夹心ELISA方法的建立及初步应用 总被引:2,自引:0,他引:2
根据PRRSV VR-2332株序列设计了1对扩增PRRSV N蛋白基因的特异性引物,从PRRSV北方株感染细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得长约372 bp的N蛋白编码基因片段。将其克隆到pGEX-6p-1质粒,构建了原核表达载体pPRRS-N。重组基因在大肠杆菌中表达出相对分子质量约为41 000的融合蛋白,目的蛋白表达量约占菌体蛋白的28.5%。利用此重组融合N蛋白建立了一种检测PRRSV特异性抗体的双抗原夹心ELISA,并通过与商品化试剂盒的应用比较对本方法进行了系统评价。分析了来自北京、山东、河南、河北4省区13个养猪场的260份血清,结果表明,本方法的敏感性和特异性分别为93.5%和86.7%,与IDEXX PRRSV抗体检测试剂盒检测结果的符合率达到91.5%。 相似文献
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根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%~1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。 相似文献