假单胞菌HC5对马铃薯晚疫病菌的抑制作用研究

从土壤中分离获得对马铃薯晚疫病菌具有较强拮抗作用的假单胞菌HC5。采用皿内涂布法、平板对峙法和平板渗透法分别评价了HC5菌株发酵液对马铃薯晚疫病菌的抑制能力,采用平板渗透法进一步研究了菌株HC5发酵液在不同温度、p H以及紫外线照射时间下对马铃薯晚疫病菌抑制的稳定性。结果显示,不同方法下,菌株HC5对马铃薯晚疫病菌均具有较强的抑制作用,与对照组相比,病原菌几乎不生长。菌株HC5发酵液在温度50℃以下,pH为5~11时,紫外线照射120 min均对马铃薯晚疫病菌具有抑制作用,即菌株HC5的耐受稳定性较强。     

荧光假单胞菌CZ对TMV的抑制作用及其活性蛋白的分离纯化

从烟草根际中分离到一株拮抗烟草花叶病毒(TMV)的生防菌荧光假单胞菌CZ,将其发酵液接种或喷施TMV寄主三生NN烟后进行生物学检测.结果表明:荧光假单胞菌CZ发酵液与TMV混合后接种,其枯斑抑制率为91.5％;接种TMV的前、后24h喷施CZ发酵液,对TMV的抑制率分别为78.9％和30.5％.荧光假单胞菌CZ发酵液经硫酸铵盐析获得活性粗蛋白,经阴离子层析、superdex-G-75凝胶层析和SDS- PAGE检测,分子量为39.4 kD.     

荧光假单胞菌对烟草根际微生物种群数量及根系活力的影响

用荧光假单胞菌和氧氯化铜处理烟草根际土壤，通过盆栽试验研究对根际微生物种群数量和根系活力的影响。结果表明，施用荧光假单胞菌菌液后，使根际细菌和放线菌数量第一周显著增加，第二周和第三周恢复到和对照一致，对根际真菌数量的影响是使其逐渐下降，第一周和第二周和对照相比差异不显著，第三周显著低于对照；氧氯化铜施人烟草根际土壤后，第一周使根际细菌数量极显著下降，并一直保持低于对照的水平，对根际真菌数量影响不显著，对根际放线菌数量的影响是使其逐渐下降，到第三周显著低于对照。用荧光假单胞菌处理后，烟草根系活力显著提高，根系生物量显著增加。     

大蒜提取物对荧光假单胞菌生物膜形成的抑制作用

研究大蒜提取物对荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)生物膜形成的抑制作用。用结晶紫染色法以及光学显微镜对该菌产生的生物膜进行了研究,苯酚硫酸法测定其胞外多糖的产量,采用多孔板法研究了大蒜提取物与山梨酸钾的协同作用。结果表明,大蒜提取物浓度为100、150 mg/mL时,对生物膜的抑制率分别为27.6%和38.7%;对胞外多糖抑制率分别为4.5%和12.6%;100 mg/mL的提取物与山梨酸钾具有协同作用。因此,大蒜提取物对荧光假单胞菌生物膜的形成具有抑制作用。     

荧光假单胞菌的生物防治机理

荧光假单胞菌是一类革兰氏阴性杆状细菌,一般可在King's B培养基中产生水溶性荧光色素.自20世纪70年代以来,人们已分离到大量拮抗植物病害的荧光假单胞菌.这些菌广泛分布在世界各地,可产生多种抗生素,对小麦全蚀病、棉花猝倒病等重要植物病害具有拮抗作用,起着天然生物防治的作用.盆栽试验和田间试验都表明,用这些菌浸种或喷洒叶面后,可保护作物免受病害的侵袭.现就国内外有关这些荧光假单胞菌应用于生物防治的研究作简要的介绍.     

荧光假单胞菌对大豆的防病增产效果初报

两年试验结果表明：荧光假单胞菌蓖液拦种对重茬大豆有明显的防增产效果，两年平均增产为１１．８％，不同年份间增产效果存在差异。不同品种对重茬的反应抗病能力不同，烟此，菌液处理防病增产效果不同。     

荧光假单胞菌对烟草根际微生物种群数量及根系活力的影响

用荧光假单胞菌和氧氯化铜处理烟草根际土壤,通过盆栽试验研究对根际微生物种群数量和根系活力的影响。结果表明,施用荧光假单胞菌菌液后,使根际细菌和放线菌数量第一周显著增加,第二周和第三周恢复到和对照一致,对根际真菌数量的影响是使其逐渐下降,第一周和第二周和对照相比差异不显著,第三周显著低于对照;氧氯化铜施入烟草根际土壤后,第一周使根际细菌数量极显著下降,并一直保持低于对照的水平,对根际真菌数量影响不显著,对根际放线菌数量的影响是使其逐渐下降,到第三周显著低于对照。用荧光假单胞菌处理后,烟草根系活力显著提高,根系生物量显著增加。     

荧光假单胞菌在生物防治中的应用

重点关注了荧光假单胞菌的专利技术现状,介绍了荧光假单胞菌的防治谱、使用方式以及通过遗传改造提高其效果的方法,以供参考。     

铁离子对荧光假单胞菌生长及产铁载体的影响

研究不同浓度的铁离子对荧光假单胞菌生长和产铁载体方面的影响,结果显示:适当浓度的铁离子浓度对荧光假单胞菌生长有促进作用;而当铁离子浓度大于lμmol/L时,可以完全抑制荧光假单胞菌铁载体的产生.     

假单孢菌20#-5菌株发酵条件的研究

对一株新近分离的抗生素产生菌假单孢菌(Pseudomonassp.)20#-5菌株的发酵培养基组成(碳源、氮源)和工艺条件(发酵温度、初始pH、装液量和摇速)进行了摸索,通过单因素实验和正交优化实验,确定了20#-5菌株发酵培养基的组成:麸皮3%,豆饼粉2%,Na2HPO4·12H2O0.05%,MgSO4·7H2O0.1%;最适发酵温度为30℃;最适pH值为9.0。在优化条件下,抑菌圈直径最大为1.5cm。20#-5菌株生长的较适温度和初始pH值分别为28～32℃和7.0～9.0。装液量和摇速对发酵有一定影响。     

罗非鱼荧光假单胞菌的分离鉴定

从发病罗非鱼中分离获得1株革兰氏阴性杆菌,依据细菌形态、培养、生理生化特性初步鉴定为荧光假单胞菌,结合PCR检测、克隆测序及Blast比对分析,进一步确定该分离菌株为荧光假单胞菌。致病性试验结果显示,该分离菌株具有较高的致病性,能引起罗非鱼发病、死亡,其病理变化与荧光假单胞菌引起的鱼类赤皮病完全相似。药敏试验结果显示,该分离菌株对氟哌酸、氧氟沙星、新霉素高度敏感,但对氨苄青霉素、青霉素、阿莫西林等不敏感。     

荧光假单胞菌株M18产PCA发酵条件研究

在摇瓶发酵条件下,研究了产吩嗪－1－羧酸（phenazine-1-carboxylic acid,PCA)的荧光假单胞菌M18在各种碳源、氮源、盐类、温度、接种量下PCA的积累情况,确定了适合PCA分泌的最佳培养基（1L）为：葡萄糖20g,肉胨22g ,KNO3 10g,NaCl 0g;最佳培养温度为29℃、接种量为5％;最佳 培养时间为44h左右。在此条件下,PCA在发酵液中的浓度可达到750mg/L,为大规模发酵提供了有价值的数据。     

荧光假单胞菌7-14flhA基因的克隆与功能的初步分析

为了探索flhA基因在荧光假单胞菌7-14(Pf7-14)鞭毛合成的作用,以铜绿假单胞菌UCBPP-PA14的鞭毛蛋白FlhA(NC_008463.1)为诱饵,在荧光假单胞菌Pf-5(NC_004129)、Pf0-1(NC_007492)和SBW25(NC_012660)的伞基因组中进行BLASTP比对分析,结果在Pf-5、Pf0-1和SBW25的全基因组搜索到flhA的同系物,分别命名为flhAPf-5、flhAPf0-1,和flhASBW25.根据三者的核酸序列,设计简并引物flhA-F/flhA-R,以荧光假单胞菌7-14(Pf7-14)基凶组DNA为模板进行PCR扩增,并对得到的片段测序比对,发现该片段2 130 bp为一完整的开放阅读框,命名为flhAPf7-14.flhAPf7-14在氨基酸水平上与flhAPf-5和flhAPf0-1的同源性分别达到93%和94%.Southern杂交证明flhA 在Pf7-14基因组中为单一拷贝.通过同源重组单交换的方式构建了Pf7-14flhA基因插入失活突变株,结果表明flhA突变体缺失了鞭毛装置并丧失了游动性,而互补菌株则恢复了鞭毛合成能力和游动能力.本研究为今后进一步研究Pf7-14鞭毛合成、菌体游动性与该菌定殖能力及生防能力的关系奠定基础.     

邻苯二甲酸二甲酯对荧光假单胞菌的损伤研究

为探究邻苯二甲酸二甲酯(Dimethyl phthalate,DMP)对细菌的毒理作用,选择荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)为受试菌株,采用平板计数试验、对数生长数学模型、细菌表面Zeta电位、荧光偏振法、透射电镜和超高效液相色谱法,测定了P.fluorescens的比生长速率、代时、细胞表面电势、细胞膜流动性、细胞损伤程度和DMP在细胞内外分布,研究DMP对P.fluorescens的细胞毒性。结果表明:经0、10、20、40 mg·L~(-1)的DMP暴露后,细菌比生长速率减小,而代时增加;细菌表面Zeta电位从-12.21±0.56mV逐渐降低为-18.13±0.67 mV,同时DMP增加了细菌细胞膜的流动性,导致细胞明显变形、质壁分离严重并伴有内容物的泄露;在细胞内,DMP累积浓度从0.11±0.10 mg·L~(-1)增加到6.78±0.25 mg·L~(-1);在细胞外,DMP累积浓度从8.44±0.37 mg·L~(-1)增加到30.52±0.88 mg·L~(-1)。研究表明,DMP破坏了P.fluorescens的细胞壁和细胞膜,影响了细菌正常生长。     

假单胞菌HYS菌株对油菜种子发芽的影响

为了研究假单胞菌HYS菌株及其上清液对油菜种子发芽的作用,采用LB培养假单胞菌HYS菌株,分别用水(CK)、LB和HYS菌液浸种油菜种子或在油菜发芽过程中分别添加这3种液体。结果表明,HYS菌液浸种不影响油菜种子最终的露白和发芽,但显著抑制油菜种子的露白和发芽进程;在油菜发芽过程中添加HYS菌液也会抑制油菜种子的露白进程,同时还抑制油菜种子的发芽和芽苗生长,而LB抑制油菜根的生长。油菜在发芽过程中,头1~2 d感染HYS菌株则显著抑制油菜种子的发芽,且感染时间越早其抑制效果越强,连续感染HYS菌株对油菜种子发芽和芽苗生长的抑制作用更强,且这种抑制作用主要在发芽的头1~3 d发挥作用。将HYS菌液离心过滤除菌,用水倍比稀释LB和上清液后培养油菜种子,发现上清液经100和1 000倍稀释后促进油菜种子的发芽。上述结果表明假单胞菌HYS菌株在油菜种子发芽和早期生长过程中不适宜用其进行生物防治,但适当稀释HYS上清液可促进油菜种子发芽和生长。     

荧光假单胞菌对食用菌生长的促进作用研究

研究荧光假单胞菌对食用菌生长的促进作用,结果表明:不同菌液对不同种食用菌香菇、平菇、鸡腿菇、白灵菇、双孢蘑菇、杏鲍菇的促生效果不同。在平菇、杏鲍菇、双孢蘑菇、鸡腿菇丝生长的共培养试验中,荧光假单胞菌的促进作用明显,以平菇最为显著。白灵菇菌丝生长的共培养试验中,没有观察到明显的促进作用。然而在香菇菌丝生长的共培养试验中发现显著的抑制作用。平菇出菇试验结果表明,添加菌液的菇袋,菌丝满袋时间较不添加菌液的对照提前5-8 d。原基分化、子实体形成也提前约1周的时间,同时出菇产量提高11.9%。     

4种荧光假单胞菌拮抗菌株对湿地松猝倒病病原菌的抑制效果

以湿地松猝倒病病原菌为靶标菌,测定4种荧光假单胞菌拮抗菌株对其的抑制效果及各拮抗菌株在湿地松根部的定殖能力。结果表明:Q2-87、2-79、1M1-96对湿地松猝倒病的3个病原菌均表现出一定的抑制效果,而Pf-5几乎无抑制作用。在室内防治试验中,2-79、Q2-87、Pf-5表现出一定的防病效果,但在室外均未表现出防病效果。4种拮抗菌株均可在湿地松根际定殖,但是在根部不同部位的分布并没有规律可循。在定殖过程中,各拮抗菌株在湿地松根部的菌量密度随着时间的延长而增加,在某一时刻达到峰值后数量逐渐减少。     

人工养殖大鲵病原荧光假单胞菌的分离鉴定

从四川洪雅人工养殖的患病大鲵(Andrias davidianus)肝、肾中分离到一株优势菌(S100814),以腹腔注射、浸泡的方式进行人工感染试验,证实其为养殖大鲵的病原菌.该分离株生理生化特性与荧光假单胞菌一致,该菌为革兰氏阴性短杆菌,在TSA平板上生长呈边缘整齐、半透明的圆形灰白色菌落.接触酶、精氨酸双水解酶、...