PCR方法鉴定牛早期胚胎性别研究进展

对用于早期胚胎性别鉴定的多重PCR、巢式PCR、引物一扩展预扩增PCR、非电泳PCR和LAMP法等扩增技术进行了综述,并针对早期胚胎性别鉴定技术在养牛业生产中的应用现状和存在问题进行分析与讨论,展望了PCR性别鉴定技术在养牛业中广阔的商业应用前景。     

牛早期胚胎性别快速鉴别的研究

根据聚合酶链式反应中聚合酶的扩增特性,对PCR反应的循环参数进行研究,取消了PCR反应中延伸这1温度梯度,对2温度梯度PCR方法进行了单重PCR和多重PCR扩增研究,并采用2温度梯度多重PCR方法分别对牛基因组、成纤维细胞、胚胎样品进行了性别鉴别研究,建立了稳定、简便、快速的用于牛早期胚胎性别鉴别的2温度梯度PCR方法.同时还对2温度梯度PCR的扩增能力进行了研究,结果表明：2温度梯度PCR方法能够扩增片段的可能长度为633 bp.     

PCR在牛早期胚胎性别鉴定中的应用

早期胚胎性别鉴定的方法有很多种,大致可分为两大类：一是前期主要采用的非生物学方法,如组织方法,免疫学方法[~[p16]〔1〕],X-相关酶法[~[p16]〔2〕]等,这些方法都缺少准确性和速度;二是80年代末,随着DNA体 外重组技术而发展起来的分子生物学方法,如DNA探针法〔3〕,聚合酶链反应法（PCR）。其中PCR法以灵敏、特异、准确和快速等特点,而成为胚? 胎性别鉴定中最有研究价值的技术方法。自Herr等（1990）[~[p16]〔4〕]报道了用PCR进行奶牛胚胎性别鉴定技术之后,国内外许多学者从事了这方面的研究 ,使准确率接近或达到了[=]100%,同时操作过程也简化了许多,并且可以在几个小时内完成,为PCR法进行早期胚胎性别鉴定应用于生产提供了基础。     

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别方法优化的研究

研究的目的是优化胚胎PCR性别鉴定方法的条件，建立实用的鉴定方法。试验设计获得了牛种属和公牛特异的引物，利用聚合酶链反应（PCR）对模板DNA进行扩增，通过常规双重PCR法和巢式PCR法的比较研究，结果表明巢式PCR法大大提高了鉴定牛早期胚胎性别的灵敏度。对组织DNA样品、血样、颗粒细胞和公牛冷冻精子进行检测，结果全部与实际性别一致；对于胚胎样品，判定结果与产犊性别一致。通过批量胚胎现场的检测，证明建立的胚胎性别鉴定方法可用于生产。     

PCR法鉴别牛早期胚胎性别的研究进展

对PCR法鉴别动物胚胎性别的机理进行了分析,综述了近10年来相关操作技术的进展,包括早期胚胎取样、胚胎细胞DNA的提取、引物的设计、扩增条件的优化、扩增产物的检测和性控胚胎的冷冻等,并提出PCR法鉴别牛早期胚胎性别的前景与展望。     

利用多重PCR技术鉴别牛早期胚胎性别研究

本研究利用一对根据牛Y-染色体特异重复序列设计的牛Y-染色体特异性引物和一对根据牛微卫星DNA设计的牛常染色体内标引物,通过对PCR反应体系中Mg^2＋浓度和PCR反应条件中退火温度的优化,建立了牛早期胚胎性别鉴定的多重PCR反应体系。     

用PCR鉴别牛胚胎性别的研究

本试验建立了用聚合酶链反体外扩增牛Ｙ染色体特异ＤＮＡ序列鉴别牛胚胎性别的方法。选择３头成年健康西门塔尔母牛为供体，在其自然发性后第９～１４ｄ，用ＦＳＨ超排处理，人工授精，发情后的第７ｄ（发情日为０ｄ），用非手术法采集胚胎，共获得１１枚Ａ．Ｂ级胚胎。在立体显微镜下分别对胚胎进行分割，各获得２个半胚。一个法胚在２０μＬ含１０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ（ｐＨ８．３）、５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ，２ｍｏ     

非电泳法PCR牛早期胚胎性别鉴定研究

为选出更高效、实用的牛胚胎性别鉴定方法，分别用成年牛血样提取的基因组DNA和冷冻的牛早期胚胎细胞DNA为样本，以电泳法和非电泳法用相应的性染色体DNA引物做胚胎PCR性别鉴定实验，以相对比。血液模板DNA结果与胚胎样本结果都表明，使用DYZ-1引物的非电泳法在比使用SE引物的电泳节约1h以上时间的同时，具有比SE更高的灵敏度。这次研究在我国首次成功地把非电泳PCR法应用到牛胚胎性别鉴定之中，减少了胚胎性别鉴定的操作步骤，并大大缩短了性别鉴定所需要的时间，从而使胚胎移植现场性别鉴定更加可行。     

应用PCR技术鉴定牛早期胚胎性别的研究

应用ＰＣＲ技术鉴定牛早期胚胎性别的研究吕碧文俞颂东金水仙（浙江省农科院畜牧兽医所,杭州,３１００２１）家畜胚胎的早期性别鉴定技术,是家畜胚胎移植技术的一项重要内容,其实质就是Ｙ染色体或存在于Ｙ染色体上的性别决定基因（即ＳＲＹ基因）的检测技术。ＰＣＲ...     

应用Y—DNA特异片段的PCR技术鉴定牛和绵羊胚胎性别及应用研究

本研究采用国际八十年代中后期研究成功的特定ＤＮＡ片段扩增技术—聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，进行牛和绵羊胚胎性别鉴定。采用删除富集法，构建富含牛和绵羊Ｙ—ＤＮＡ文库，筛选出特异克隆，并根据其序列，分别设计合成引物，用ＰＣＲ技术分别扩增牛Ｙ染色体上约１４０ｂｐ的片段，绵羊Ｙ染色体上约１３０ｂｐ的片段。对已知性别的牛和绵羊血液样品进行检测，准确率均为１００％（１０／１０；１１／１１）。应用已建立的简易、快速胚胎取样方法及防污染措施，以及设计合成的引物和ＰＣＲ检测胚胎性别的技术方法，奶牛胚胎经性别鉴定后移植，产犊牛７头（４头公犊，３头母犊），准确率为１００％（７／７）。在内蒙牧区生产现场，对绵羊胚胎经性别鉴定后移植，共移植成功１８只受体母羊（每只母羊移植２－４枚同性别胚胎），产羔２５只（８只公羔，１７只母羔），准确率为８０％（２０／２５）。     

Experiences of Using PCR for Sexing Bovine Embryos*

Bovine embryos were used to evaluate the accuracy and the efficiency of sexing embryos by amplifying male specific DNA using the polymerase chain reaction. Blind tests with biopsies and biopsied embryos suggested that the method is accurate. However, often the amplification was unsuccessful and the assay therefore uninformative. We were able to amplify male specific DNA from degenerated embryos as well as from embryos stained with Hoechst 33342.     

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本.本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,...     

转基因牛多重PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测转基因牛的多重PCR方法,针对牛线粒体16 S rRNA基因(BOS mtD-NA16 S rRNA,BOS)、转基因动物常用标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)、人乳铁蛋白编码基因(human laetoferrin gene,hLF)、人-α-乳清蛋白编码基因(human α-lactalb...     

不同血清型牛源巴氏杆菌多重PCR检测方法的建立

巴氏杆菌是引起牛出血性败血症的主要病原之一,其致病血清型主要有荚膜A、B和E型。本试验选择、合成了针对3种不同血清型菌株的引物,建立了检测不同血清型菌株的多重PCR鉴别诊断方法。试验用2.5ngDNA模板即可扩增出目的基因,通过对引进的参考菌株进行检测表明,用该方法进行牛源巴氏杆菌的诊断和菌株分型特异性好,敏感性高。     

Isolation of Y Chromosome-specific Sequences and their Use in Embryo Sexing*

Y chromosome-specific sequences derived to date from cattle, sheep and pigs are described. The methods used to isolate these sequences and possible future approaches are discussed. Three different techniques of sex determination are described: in situ hybridisation, Southern/Dot blotting and PCR based assays. All three methods utilise Y chromosome-specific sequences. Necessary controls and precautions for PCR mediated assays are discussed.     

牛早期胚胎性别鉴定PCR反应体系优化的研究

根据牛SRY基因序列设计合成2对巢式PCR引物作为性别鉴定引物,根据牛-珠蛋白基因序列设计了一对引物作为内标引物建立了牛胚胎性别鉴定的PCR反应体系。公牛可以扩增出187bp的SRY基因片段和255 bp的-珠蛋白基因片段,母牛只能扩增出255 bp的-珠蛋白基因片段。由于巢式PCR只需3～8个细胞就可以在紫外灯下看到扩增结果,而常规PCR则需要较多的细胞,所以胚胎性别鉴定时使用巢式PCR效果更好。     

鸭茅叶绿体引物筛选

为筛选适用于鸭茅物种的基因引物序列,开展相关系统发育学研究,通过搜集鸭茅近缘物种叶绿体基因引物,使用PCR扩增技术和琼脂糖凝胶电泳检测来筛选出目的基因片段,对目的基因进行BLAST序列比对.结果表明:试验搜集的35对引物中共能筛选出trnL-F 1、trnL-F 5、rpL162、rpL164、matK 6、matK ...