海带岩藻聚糖及其级分在氧化应激条件下对肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】在氧化应激条件下,研究海带岩藻聚糖及其级分对肉鸡巨噬细胞免疫功能的影响,初步探讨海带岩藻聚糖及其级分的免疫调节功能与抗氧化作用的关系。【方法】以叔丁基过氧化氢（tBOOH）为活性氧诱导剂,加入肉鸡腹腔巨噬细胞培养液中,测定细胞培养液中抗氧化酶的变化,巨噬细胞分泌一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、以及细胞因子IL-1和TFN-α等免疫指标的变化。【结果】用tBOOH处理后的巨噬细胞,细胞存活率显著下降（P＜0.05）,乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）显著升高（P＜0.05）,SOD和GSH-Px酶活性显著降低（P＜0.05）。巨噬细胞的吞噬活性显著降低（P＜0.05）,NO、iNOS和呼吸爆发显著降低（P＜0.05）,细胞因子IL-1分泌量显著下降（P＜0.05）,表明细胞出现明显的氧化损伤。在培养液中加入海带岩藻聚糖及其级分,能够缓解细胞的氧化应激,使得细胞存活率上升,LDH和MDA降低,SOD和GSH-Px升高,免疫指标均有不同程度的恢复。【结论】海带岩藻聚糖及其级分具有抗氧化活性,不同级分的抗氧化活性存在差异,其中级分Ⅲ、级分Ⅳ的作用较强。海带岩藻聚糖对巨噬细胞的免疫促进作用与其抗氧化活性有关。     

苦马豆素对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探索苦马豆素（SW）与小鼠腹腔巨噬细胞功能之间的关系,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将70只小鼠随机分为7组,其中5组分别按0.05、0.2、0.8、3.2和6.4 mg•kg-1每天灌服SW生理盐水,连续21 d,另2组为生理盐水和空白对照组。收集小鼠腹腔巨噬细胞,经脂多糖（LPS）诱导活化,用ELISA法检测TNF-α生成,酶法检测一氧化氮合酶（NOS）活性,化学法检测H2O2浓度,MTT比色法检测杀伤肿瘤细胞活性及吞噬中性红能力。【结果】SW剂量在0.2～3.2 mg•kg-1之间,能够提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬和杀伤活性﹑NOS活性,促进TNF-α和H2O2生成,且均呈剂量效应关系;6.4 mg•kg-1 SW对小鼠巨噬细胞的活性具有抑制作用。【结论】低剂量SW可以通过提高NOS活性介导巨噬细胞信号传递通路,促进TNF-α和H2O2生成,发挥其吞噬和杀伤功能;高剂量SW对小鼠巨噬细胞免疫功能起抑制作用。提示,SW对小鼠腹腔巨噬细胞具有双向调节作用。     

灵芝多糖的提取纯化及其免疫活性

【目的】从灵芝孢子粉中提取纯化多糖,研究灵芝多糖对小鼠细胞免疫功能的影响,为灵芝开发利用提供试验依据。【方法】利用水煮醇沉法从灵芝孢子粉中提取粗多糖,经反复冻融、Sevag法脱蛋白和Sepharose CL-6B柱层析,纯化得灵芝多糖(GLP)。通过HPLC鉴定GLP的纯度,G.C.分析其单糖组成。采用MTT法、中性红试验、Griess法、比色法和ELISA法,分别检测GLP对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能、NO产量和iNOS活性以及TNF-α产量的影响。【结果】GLP为白色粉末,分子质量为51ku,HPLC分析GLP为单一狭窄对称峰,其单糖组成为葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal),二者物质的量之比为16.8∶1。GLP能够刺激小鼠T淋巴细胞增殖,并呈现剂量依赖关系;当GLP质量浓度达到100μg/mL时,能显著增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力,提高其分泌iNOS的活力和NO的生产量;同时,当GLP质量浓度≥200μg/mL时,能显著促进腹腔巨噬细胞分泌TNF-α的能力,具有剂量依赖性。【结论】GLP能够增强小鼠免疫细胞活性,有望成为重要的生物免疫调节剂。     

精喹禾灵酶联免疫吸咐分析（ELISA）研究

 【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200 000。经酶联免疫吸附反应分析（ELISA）测定,精喹禾灵的抑制中浓度（IC50）为0.03495 μg•ml-1,最低检测浓度（IC10）为0.002 μg•ml-1,检测范围为0.002～0.5 μg•ml-1。其与结构相似的物质几乎没有交叉反应,表明该方法具有很强的特异性,且在水样中的添加回收率为89.02%～108.88%。【结论】成功获得精喹禾灵特异性抗体并建立了水样中精喹禾灵农药残留的ELISA测定方法。     

华蟾毒精对小鼠巨噬细胞功能的影响

【目的】阐明华蟾毒精(CBG)对巨噬细胞功能的影响,为CBG的开发和利用提供理论依据。【方法】利用Balb/c小鼠制备与纯化腹腔巨噬细胞,采用不同质量浓度(0.5,1.0,1.5,2.0mg/L)CBG作用于巨噬细胞,采用MTT法检测CBG对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的影响;采用Griess法检测CBG对巨噬细胞分泌NO的影响;采用ELISA法检测CBG对巨噬细胞分泌IL-6、TNF-α和GM-CSF的影响。【结果】CBG质量浓度为1.0,1.5和2.0mg/L组均能极显著提高巨噬细胞的吞噬功能;CBG质量浓度为0.5 mg/L组能显著促进巨噬细胞NO的分泌,而1.0,1.5和2.0mg/L CBG组均能极显著促进巨噬细胞NO的分泌;CBG质量浓度为1.0,1.5和2.0mg/L组均能极显著促进巨噬细胞IL-6的分泌;1.0mg/L CBG组能显著促进巨噬细胞TNF-α的分泌,1.5和2.0mg/L CBG组均能极显著促进巨噬细胞TNF-α的分泌;CBG质量浓度为0.5,1.0,1.5和2.0mg/L组均能极显著促进巨噬细胞GM-CSF的分泌。【结论】CBG能提高巨噬细胞的吞噬功能和分泌功能,说明CBG具有良好的抗炎、抗肿瘤和提高免疫等作用。     

有机磷杀虫剂通用结构半抗原的设计及广谱特异性抗体的制备

 【目的】制备针对有机磷农药的广谱特异性抗体,用于有机磷农药的免疫快速筛选检测。【方法】设计采用二乙基膦酸乙酸作为通用结构半抗原,用NHS-DCC法和EDC法合成两种人工抗原免疫新西兰大白兔制备抗血清。【结果】NHS-DCC法所制得抗血清的最高滴度为25 600, EDC法合成的抗原制得的抗血清滴度最高为6 400,均获得免疫应答。以二乙基膦酸乙酸为对象建立的间接竞争ELISA检测方法对二乙基膦酸乙酸最低检测浓度0.0035 μg•ml-1,抑制中浓度I50为0.182 μg•ml-1。经对12种常见磷酸酯类有机磷农药特异性检测反应试验,结果发现：所得抗体对毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷、辛硫磷等农药有特异性反应,I50分别为0.12、0.21、0.24、0.78、0.97、3.8 μg•ml-1。【结论】该检测技术可用于毒死蜱、氧乐果、二嗪农、乙基对硫磷、丙溴磷等药剂的快速定性或半定量检测。     

桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响。【方法】无菌分离小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和巨噬细胞悬液。分别培养这2类细胞,并分为空白对照组、阳性对照组(左旋咪唑处理细胞)及25,50,75和100μg/mL桔梗皂苷D组,采用MTT法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬功能的影响,采用ELISA法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌的影响。【结果】桔梗皂苷D能够促进淋巴细胞增殖,增强巨噬细胞的吞噬功能,并可刺激淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12的分泌,其中以50μg/mL组效果最佳。【结论】桔梗皂苷D能增强小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的免疫调节活性。     

桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响。【方法】无菌分离小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和巨噬细胞悬液。分别培养这2类细胞,并分为空白对照组、阳性对照组（左旋咪唑处理细胞）及25,50,75 和100 μg/mL桔梗皂苷D组,采用MTT法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬功能的影响,采用ELISA法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌的影响。【结果】桔梗皂苷D能够促进淋巴细胞增殖,增强巨噬细胞的吞噬功能,并可刺激淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12的分泌,其中以50 μg/mL组效果最佳。【结论】桔梗皂苷D能增强小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的免疫调节活性。     

松针多糖对鸡巨噬细胞HD11的天然免疫调节

【目的】探讨松针多糖对鸡巨噬细胞HD11的天然免疫功能的影响,以期为松针多糖在肉鸡疾病防治方面应用提供科学依据。【方法】试验采用不同浓度的的松针多糖作用于巨噬细胞HD11,试验分为空白对照组、阳性对照组（终浓度为1 μg·mL^-1的LPS）和松针多糖组（终浓度分别为25、50、100、200、400 μg·mL^-1的松针多糖）。噻唑蓝（MTT）检测巨噬细胞HD11细胞活性、Griess法检测巨噬细胞HD11细胞上清液中一氧化氮（NO）分泌量、中性红吞噬试验检测巨噬细胞HD11吞噬活性,酶联免疫（ELISA）检测巨噬细胞HD11细胞上清液中干扰素-α（IFN-α）、一氧化氮合酶（iNOS）、白介素-10（IL-10）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量,荧光定量PCR技术检测HD11细胞中iNOS mRNA表达。【结果】 MTT试验结果表明：与空白对照组相比,不同浓度的松针多糖（25、50、100、200、400 μg·mL^-1）对细胞活性没有影响,说明在25-400 μg·mL^-1范围内对巨噬细胞没有毒性,可以进行免疫调节作用实验。免疫调节作用试验结果表明：与空白对照组相比,不同浓度的松针多糖极显著（P<0.01）增加了NO释放量和细胞吞噬活性,极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）提高了细胞因子IFN-α的含量和iNOS的含量及mRNA的表达量,极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）降低了细胞因子IL-10的分泌量。当松针多糖浓度在50、100、200、400 μg·mL^-1浓度时,细胞因子IL-6和TNF-α的含量极显著（P<0.01）高于空白对照组。与阳性对照组相比,不同浓度的松针多糖极显著（P<0.01）降低NO释放量,极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）降低了细胞因子IFN-α的含量、iNOS的含量及mRNA表达量和IL-10含量。当松针多糖浓度在25、50、100 μg·mL^-1浓度时,细胞吞噬活性极显著（P<0.01）低于阳性对照组,细胞因子IL-6的含量极显著（P<0.01）低于阳性对照组。当松针多糖浓度在25、50、100、200 μg·mL^-1浓度时,细胞因子TFN-α的含量极显著（P<0.01）低于阳性对照组。【结论】松针多糖能显著提高巨噬细胞HD11的天然免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。     

鸡柔嫩艾美尔球虫对免疫细胞体外增殖及产生的免疫相关分子的影响

【目的】检测鸡柔嫩艾美尔球虫体外刺激的巨噬细胞和淋巴细胞活力及分泌的细胞因子目的是了解球虫对免疫细胞增殖及产生的免疫相关分子的影响。【方法】无菌条件分离鸡外周血和脾淋巴细胞,淋巴细胞和HD11巨噬细胞分别与鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子体外共培养,采用MTT、Griess、ELISA、RT-PCR法、流式细胞术等方法检测细胞增殖、免疫相关分子水平。【结果】子孢子组鸡外周血和脾淋巴细胞增殖明显高于对照组(P0.05);子孢子组HD11巨噬细胞NO和iNOS的分泌量明显增加(P0.05),外周血和脾淋巴细胞NO和iNOS分泌量升高,但统计差异不显著,脾淋巴细胞iNOS分泌量低于对照组差异不显著,但子孢子组免疫细胞上iNOS基因表达水平上调且显著高于对照组(P0.05);子孢子组HD11巨噬细胞和外周血淋巴细胞IL-2分泌量极显著低于对照组(P0.01),且IL-2mRNA表达下调;HD11巨噬细胞和脾淋巴细胞IFN-γ量极明显高于对照组(P0.01),而外周血淋巴细胞IFN-γ分泌量明显降低,IFN-γmRNA表达量与对照组无显著统计差异;子孢子组HD11巨噬细胞吞噬能力及明显强于对照组(P0.01),其表达MHC-Ⅱ分子的阳性细胞百分率显著高于对照组,细胞上表达KUL01表面分子阳性百分率显著降低,但阳性细胞平均荧光强度都极明显高于对照组(P0.01)。【结论】鸡柔嫩艾美尔球虫刺激免疫细胞增殖,提高巨噬细胞和淋巴细胞NO和iNOS的分泌量明显增加及iNOS基因表达水平上调,但IL-2分泌量下降其mRNA表达下调,免疫相关分子(MHC-II)表达量增加,结果表明鸡柔嫩艾美尔球虫能不同程度影响免疫细胞增殖及产生免疫相关分子。     

浅谈饲料中有效能的测定技术

饲料中有效能是供动物生长发育的基础.不同动物所用的有效能体系不同,目前大多数动物采用消化能、代谢能体系,但随着研究的发展与深入,发现最能反映饲料有效能的是净能体系.无论哪种体系,采用合理的测定技术准确测定饲料中的有效能值显得尤其重要,通过对饲料有效能值的准确测定可以实现动物所需能量的精确供给,减少养殖成本,使经济效益最大化.文章综述了几种有效能评价体系的测定技术.     

生态旅游潜在客源市场特征的调查研究--以湖南永州金洞森林旅游开发为例

为探明客源市场生态旅游消费的潜在特征,采用问卷调查的形式,就长沙市居民对湖南金洞生态旅游开发的意向等问题进行抽样调查．结果显示,生态旅游符合人们“回归自然”的旅游新时尚,有着极大的开发空间,指出生态旅游的开发要注重环境保护和可持续发展．开发的产品要以休闲度假类的大众产品为主,开发生态旅游都市客源市场还要多种渠道并用,尤其是要注重媒体的宣传．     

山茱萸多糖提取工艺优化及马钱苷含量测定

采用L（934）正交设计试验,对山茱萸浸提液中山茱萸多糖的酶水解法提取工艺进行了优化研究,并对浸提液的中有效成分马钱苷含量进行了HPLC法分析。结果表明,山茱萸多糖浸提的最佳工艺为：液料比1∶5,浸提时间4 h,浸提温度80℃,果胶酶添加量0.55 g/L。用HPLC法测定出的山茱萸浸提液中马钱苷平均含量为0.512 ...     

《河北农业大学学报》创刊年代考

清光绪二十八年(1902)河北农业大学前身—直隶农务学堂诞生,经几易其名,于1958年更名为河北农业大学至今。清光绪三十一年(1905)直隶高等农业学堂时期创办了《北直农话报》,清光绪三十四年(1908)更名为《直隶农务官报》,中华民国七年(1918)改出《农学月刊》,中华民国十七年(1928)易名为《河大农刊》,中华民国二十三年(1934)更名为《河北通俗农刊》,中华民国二十四年(1935)易名为《河北农林学刊》,1948年更名为《河北农学院研究专刊》,1959年更名为《河北农业大学学报》至今。《河北农业大学学报》前身诸刊都与现时的《河北农业大学学报》有着一脉相承的历史渊源,各刊之间联系紧密,连续性、继承性强。因此,《河北农业大学学报》的创刊时间应追溯至1905年创办的《北直农话报》。     

探究板栗的科学贮藏方法

板栗属壳斗科栗属(Castanea mollisima Blume),其种子属于顽拗型种子,不耐贮藏。基于近年来板栗贮藏保鲜技术研究成果,从合理采收、贮前处理、贮藏方法等方面进行论述。     

切花菊耐热性鉴定方法研究

以8个切花菊品种为材料,通过对离体叶片进行50℃高温胁迫后,采用电导法、电阻抗图谱法测定电导率、电阻,并对大田栽培植株进行田间高温胁迫试验,比较品种间的耐热性。结果表明:电导法测得的50℃直接相对电导率、修正相对电导率和电阻抗图谱法测得的胞外电阻在品种间有明显差异,但与田间高温胁迫法测定的热害指数不完全一致。电导法和电阻抗图谱法都可以作为测定切花菊耐热性的方法,但需要结合田间耐热性观察。     

水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的纯化技术

应用萄聚糖凝胶柱层析对水牛梭形住肉孢子虫包囊包溶性抗原进行了纯化。结果表明：纯化水牛梭形住肉孢子虫包囊抗原的最适条件为：选用萄聚糖凝胶Ｇ—１００柱层析系统；洗脱液为０３ＭＰＢＳ（ｐＨ７２），床体积为１０ｃｍ×１６５ｃｍ，上样体积为５００ＨＬ；流速为１２ｍＬ／ｈ。纯化抗原可使琼脂凝胶双扩散试验的阳性检出率提高３０％。     

啤特果多糖提取工艺的研究

［目的］寻找开发啤特果产业的新途径,提高其附加值。［方法］采用水提醇沉法提取啤特果中的多糖,通过单因素试验和正交试验,以多糖的提取率为评价指标,对影响啤特果多糖提取工艺的因素进行研究。［结果］确定了提取啤特果多糖的最佳工艺参数为温度95℃,料液比1∶2,乙醇浓度67%。在该工艺条件下,啤特果多糖的得率为1.05%。［结论］该研究为开发利用啤特果提供理论依据。     

黑豆不同部分馏油的体外抗氧化性比较

[目的]通过体外抗氧化体系比较黑豆不同部分馏油抗氧化性活性。[方法]通过正交试验优化索氏提取黑豆馏油的最佳工艺,提取黑豆不同部分馏油;研究黑豆不同部分馏油对羟基自由基(·OH)、DPPH自由基(DPPH·)的清除能力。[结果]在样品浓度为1.0 mg/mL时,黑豆不同部分馏油对·OH的清除率分别为全豆馏油83.9%、豆黄(黑豆去皮部分)馏油64.8%、豆皮馏油17.3%,对DPPH·的清除率分别为全豆馏油41.3%、豆黄馏油33.2%、豆皮馏油77.9%。[结论]黑豆不同部分馏油均具有较好的抗氧化性,是良好的天然抗氧化剂。黑豆不同部分馏油对·OH的清除能力从大到小依次为全豆馏油、豆黄馏油、豆皮馏油,对DPPH·的清除能力从大到小依次为豆皮馏油、全豆馏油、豆黄馏油。     

GEF7基因过表达拟南芥植株幼苗表型分析

利用已构建的过表达拟南芥(Arabidopsis)GEF7基因植株,在光照培养箱中进行培养,并与野生型植株进行对比分析,对GEF7基因过表达植株的幼苗表型进行了观察分析。结果表明,GEF7基因过表达植株幼苗的根长比野生型对照明显增加;其子叶形态、数目和幼苗形态等方面均有异常表型,表明GEF7基因的功能与根的发育有关,并参与调控植物的发育过程。