β-内酰胺类抗生素对猪源链球菌体外抗菌活性的研究

从东北地区采集的猪鼻腔棉拭子进行猪源链球菌分离纯化、兰氏分群、生化反应和药物敏感性分析。以美国临床检验标准委员会(NCCLS)的临界浓度作为判断标准,判定了猪源链球菌对8种β-内酰胺类抗生素的耐药性。结果表明,检测的36株菌株均为血清D型,共得到10种生化反应编码。36株猪源链球菌对头孢拉定(CRD)的耐药率最高,达86.1%;对阿莫西林(AMO)耐药率最低,为14%;对头孢噻肟钠(CTX)、头孢曲松钠(CEF)、头孢唑林(CEZ)、青霉素G(PEN)、氨苄西林钠(AMP)、苯唑西林(OCL)的耐药率在16.7%～72.2%之间。β-内酰胺酶检测有8株为阳性。     

虎源金黄色葡萄球菌耐药性的检测及耐β-内酰胺类药机制的研究

金黄色葡萄球菌在自然界中的分布极其广泛,存在于空气、水和土壤中,寄居在人和动物的皮肤黏膜、鼻腔、咽喉以及胃肠道等处,是临床上常见的致病菌之一。由于其可以产生溶血毒素、肠毒素、血浆凝固酶、耐热核酸酶等,在临床可引起各种家畜的呼吸道感染、子宫内膜炎、外伤化脓、乳房炎,若治疗不及时会引起败血症而导致死亡。近些年,随着抗生素的广泛应用,目前临床分离的金黄色葡萄球菌耐药现象非常严重,而且出现多重耐药现象,这给临床治疗带来极大的困难,金黄色葡萄球菌的耐药问题已经引起人们的极大关注。东北虎作为世界一级保护动物,近年来时有病原微生物感染死亡的报道。本研究旨在研究虎源金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性,并通过对相关耐药基因的检测,分析其耐药机制,为今后指导临床合理使用抗生素防控野生动物金黄色葡萄球菌感染提供理论依据。     

鸡源沙门氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药相关基因的筛选及鉴定

[目的]从沙门氏菌全基因组范围筛选和鉴定其与β-内酰胺类抗生素耐药性相关的基因.[方法]对临床分离的10株沙门氏菌进行药敏试验,选择耐药性最广泛的菌株作为研究对象,利用mariner转座子对其基因组进行随机突变,获得转座子突变株文库,筛选文库中对β-内酰胺类抗生素敏感的突变体,通过套式PCR、核苷酸测序及序列比对确定突变体中转座子的插入位点及其破坏的基因.[结果]从突变株文库中筛选得到15株分别对青霉素G、氨苄西林和头孢哌酮敏感的突变株,其中3株对三种抗生素都敏感.转座子破坏基因为STM4216 (inner membrane protein)和STM4150 (50S ribosomal protein L1).[结论]筛选出的基因有望成为控制或扭转沙门氏菌耐药性的作用靶点.     

黄酮化合物对金黄葡萄球菌β-内酰胺酶活性影响

试验旨在筛选黄酮类化合物,研究其对金黄葡萄球菌β-内酰胺酶活性影响。利用试管二倍稀释法测定黄酮类化合物对耐药金黄葡萄球菌MIC值;利用K-B纸片法筛选黄酮类化合物;利用反复冻融法提取β-内酰胺酶,并用酶标仪测定β-内酰胺酶活性。结果表明,芦丁、姜黄素和槲皮素分别作用于耐药金黄葡萄球菌后,其β-内酰胺酶活性分别为2.36,2.78和3.05 U.mg-1,与阴性对照组相比差异极显著(P<0.01)。提示黄酮类化合物能降低金黄葡萄球菌β-内酰胺酶活性,能逆转金黄葡萄球菌耐药性。     

312株葡萄球菌耐药性现状分析

为了解本地区葡萄球菌耐药性现状和累积资料,利于控制耐药性的发生、发展以及为临床合理选用抗生素提供依据,我们对临床分离的312株葡萄球菌的耐药性进行了分析,现报道如下.     

葡萄球菌属158株耐药性分析

目的:探讨基层医院葡萄球菌的耐药现状及其对9种抗菌药物的耐药性,指导临床合理选用抗菌药物。方法:2005年1月至2008年12月监利县人民医院分离葡萄球菌属158株,采用Kirty-Bauer纸片扩散法选用9种抗菌药物进行药敏试验,耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1999年标准判断结果。结果:近4年分离的葡萄球菌158株,主要来源于血液和脓性标本,分别占34.2%、32.3%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检出率为24.1%;耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检出率为58.0%;其在临床病区分布中居前3位科室是新生儿病房、神经外科、门诊外科;MRSA和MRCNS对9种抗菌药物的耐药率除万古霉素耐药率为0%外,其它抗菌药物均明显高于甲氧西林敏感葡萄球菌(MSS)。结论:MRSA和MRCNS检出率不断升高,对抗菌药物呈多重耐药,治疗此类细菌感染宜参考细菌药敏结果,合理选用抗菌药物。     

几种β-内酰胺环类抗生素体外抑菌试验

针对兽医临床的细菌耐药问题,为指导临床合理用药,本文做了五种常见β-内酰胺环类抗生素对猪鸡常见致病菌的体外抑菌试验,并对结果进行了分析.     

犬源金黄色葡萄球菌临床分离株的耐药性

对宠物门诊分离得到的25株金黄色葡萄球菌进行耐药性分析与β-内酰胺酶测定,以了解近3年来潍坊地区犬源金黄色葡萄球菌的耐药性及其是否产生β-内酰胺酶,以期为临床上致病性金黄色葡萄球菌感染的有效控制提供依据。使用纸片扩散法进行药敏试验;使用碘量法、酚红法测定β-内酰胺酶的产生。25株金黄色葡萄球菌对替考拉宁、利福平、万古霉素十分敏感,对其他25种药物呈现一定耐药性,并对大多数β-内酰胺类抗生素呈现很高的耐药性。碘量法、酚红法测得产β-内酰胺酶的菌株分别为18、17株。产β-内酰胺酶的菌株对万古霉素、利福平、替考拉宁不具有耐药性,对β-内酰胺类抗生素基本具有耐药性;不产酶的菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药性低于产酶菌株。可见,β-内酰胺酶的产生是金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有耐药性的主要原因。     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

鸡源金黄色葡萄球菌耐药性分析

采用药敏纸片扩散法,测定48株鸡源金黄色葡萄球菌对常用的19种抗菌药物的耐药性,检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA).结果表明:所有菌株除对万古霉素、头孢西丁和头孢唑啉100%敏感以外,对其他16种药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药率较高的有四环素、强力霉素、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星及克林霉素,耐药率最低的为头孢噻肟、阿米卡星、复方新诺明及利福平.100%的菌株呈多重耐药,分离菌株最少耐受4种药物,最多耐受12种药物,未检测出耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌.     

奶牛乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N_2的耐药性分析及其基因特征

以乳房炎源性金黄色葡萄球菌分离株N2为研究对象,采用纸片扩散法分析了耐药性,应用刚果红法检测了生物被膜形成能力,利用PCR法扩增了8种生物被膜形成基因和9种肠毒素基因。结果表明,金黄色葡萄球菌分离株N2具有广泛的耐药性,仅对苯唑西林高度敏感,具有较强的生物被膜形成能力,携带除bap外所有的被测生物被膜相关基因和sea、sec、seg、sei 4种肠毒素基因。结果表示金黄色葡萄球菌分离株N2可能存在多种侵袭方式,在临床上难以防治,为进一步以该菌株为研究材料进行相关研究奠定了基础。     

牛奶中常见的β-内酰胺类抗生素的检测方法

抗生素是兽药中主要的添加剂和兽药残留物质,它在食品中的残留,常会引起过敏反应以及人畜间耐药性的传播,所以需要严格的检测抗生素的含量是否合格,且β-内酰胺类抗生素是奶牛临床中常用的抗生素之一,本研具体研究常用β-内酰胺类抗生素检测方法。     

用生物膜干涉技术快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留

[目的]采用生物膜干涉技术建立快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的方法.[方法]首先通过疏水作用力在APS光线生物传感器探头末端固定氨苄青霉素-BSA偶联物,结合40 nm纳米金标记的β-内酰胺类抗生素受体,建立了检测牛乳中β-内酰胺类抗生素的方法.[结果]生物膜干涉技术检测牛乳中的β-内酰胺类抗生素的灵敏度比胶体金免疫层析试纸条的灵敏度高1倍.该技术还具有良好的特异性,与浓度为1 000 ng/ml的黄曲霉毒素M1、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、泰乐菌素、氯霉素、三聚氰胺无交叉反应.[结论]研究表明,金标记BLI检测β-内酰胺类抗生素的定量范围较小,并不适用于实际生产中的定量检测,但却是一种简便、快捷的定性检测方法,可用于牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的快速检测.     

食品动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLS_B类抗生素耐药性调查

【目的】调查中国6个省食品动物源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(livestock-associated methicillinresistant staphylococcus aureus,LA-MRSA)对大环内酯类-林可酰胺类-链阳菌素B类(macrolides, lincosamides and type B streptogramin, MLS_B)抗生素的耐药情况及MLS_B耐药基因的流行情况。【方法】从广东、河南、河北、福建、山东以及湖南等6省采集的食品动物源(猪、鸡以及鸭)样品约6 500份,分离金黄色葡萄球菌,通过苯唑西林药物敏感性测定和mecA,mecC基因检测鉴定MRSA菌株。采用二倍琼脂稀释法和微量肉汤稀释法测定LA-MRSA菌株对MLS_B以及其他常见的10种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法检测MLS_B耐药基因(ermA-C和ereA-B)以及其他16种常见耐药基因。【结果】6 500份动物源样品中分离出480株金黄色葡萄球菌,其中101株为LA-MRSA,LA-MRSA分离率为1.54%(101/6500),金黄色葡萄萄球菌中LA-MRSA检出率达21.04%(101/480)。LA-MRSA菌株对MLS_B类抗生素呈现高度耐药的情况,耐药率高达99.00%以上,对其他常见的抗菌药物氟苯尼考、四环素、头孢噻肟以及庆大霉素等抗菌药物也均呈现高度耐药,耐药率为94.00%—99.00%。MLS_B耐药基因检测结果显示,ermC的检出率最高,为100.00%;其次是ereB,为79.20%,接着是ermA和ereA,检出率分别为45.54%和40.59%,而ermB的检出率最低,为11.88%。其他耐药基因的检测结果显示fexA、tetL、aadA1、aph(4’)-Ia的检出率较高,分别是92.10%、97.02%、97.29%和83.17%;其次是tet(M),检出率为71.29%;而aac(6’)-Ib、aac(3’)-Ic、aph(3’)-II、aph(3’)-IV、optrA、tet(A)、tet(C)的检出率相对较低,分别是49.50%、46.53%、39.60%、37.62%、33.67%、29.70%和20.79%;接着检出率更低的是cfr、tet(K)、lnuA以及lnuF,分别为17.82%、14.85%、5.94%和3.96%。进一步分析LA-MRSA菌株中MLS_B耐药基因检出个数与对受试抗菌药物的耐药数目之间的关系,发现随着动物源MRSA菌株对受试抗菌药物的耐药数目增加时,菌株中MLS_B耐药基因检出个数也在增加。【结论】动物源MRSA菌株对MLS_B高度耐药,其与菌株中ermC基因的高检出率一致,并且LA-MRSA菌株多重耐药情况严重,这与MLS_B耐药基因检出个数以及其他耐药基因的高检出率密切相关。因此,养殖场中MLS_B类药物使用应规范使用,以减少动物源MRSA菌株的多重耐药性。     

“乳炎康注射液”消除奶牛乳房炎致病菌对β-内酰胺类耐药性的研究

[目的]研究"乳炎康注射液"对奶牛乳房炎主要致病菌耐药性的消除作用。[方法]观察奶牛乳房炎主要致病菌对氨苄青霉素等5种β-内酰胺类抗生素的耐药性,并通过筛选耐药菌,研究"乳炎康注射液"对其耐药性的消除作用。[结果]奶牛乳房炎主要致病菌对先锋霉素V高敏,对羧苄青霉素比较敏感,对氨苄青霉素、阿莫西林、青霉素G的敏感性低,并且产生了不同程度的耐药性。经"乳炎康注射液"感触后,奶牛乳房炎主要致病菌对β-内酰胺类抗生素的耐药率明显下降,且原来敏感药物的抑菌圈扩大了1.2~2.3 mm。[结论]"乳炎康注射液"对奶牛乳房炎主要致病菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性有一定的消除作用。     

北疆地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的分离及耐药性

为了解新疆北疆地区奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的耐药性,以有效选择抗生素进行临床治疗提供参考,采集北疆地区患乳房炎牛乳50批次,从中分离出金黄色葡萄球菌15株,并采用纸片扩散法对8大类29种兽药(内酰胺类8种、大环内酯类3种、喹诺酮类4种、四环素类2种、胺类2种、氨基糖苷类7种、林可酰胺类2种、氯霉素类1种)进行药敏试验。结果表明:分离菌株对青霉素G、苯唑西林、乙酰螺旋霉素、甲氧苄啶、磺胺异噁唑、林可霉素和克林霉素等7种药物的耐药率超过50%,其中青霉素G的耐药率达100%;对氧氟沙星的敏感率达100%,对庆大霉素和环丙沙星的敏感率均为93%;15株分离菌均多重耐药,最少耐5种药,最多耐17种药。     

鸡源大肠杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药性检测林

从四川省不同养殖场分离鉴定出233株鸡源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法对链霉素、庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、大观霉素、安普霉素和新霉素等7种氨基糖苷类药物进行耐药性检测.结果显示,233株大肠杆菌对氨基糖苷类药物的耐药性较为严重(耐药率范围31％～81％),对不同药物呈单向交叉耐药性,56.6％的菌株呈多重耐药性.     

猪肉源金黄色葡萄球菌毒力基因检测与耐药性分析

【目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染状况、耐药性及其毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中6个地区的猪肉165份,按国标GB/T 4789.10-2010的方法,对其中的金黄色葡萄球菌进行分离,采用PCR方法对该菌进行确证并对其相关基因(如nuc、mecA、PVL、SEs和ETs)进行检测,最后采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药性。另外,在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL),分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。【结果】165份样品的金黄色葡萄球菌污染率为33.33%(55/165);从中分离出103株金黄色葡萄球菌,但未检测出MRSA,这些菌对甲氧苄啶的耐药性最强,耐药率为100%;其次对红霉素和四环素的耐药率较高,分别为57.28%和34.95%;对苯唑西林、庆大霉素、氯霉素、环丙沙星的耐药率分别为2.91%,10.68%,2.91%和3.88%;所有菌株对头孢西丁、头孢哌酮、万古霉素、阿米卡星均敏感,同时得到21种耐药谱,多重耐药率达20.39%。猪肉金黄色葡萄球菌中杀白细胞素基因(Panton-valentine leu-kocidin,PVL)的检出率为34.95%,肠毒素基因(SEs)中sej的检出率最高,为98.06%,然后依次为sea(50.49%)、see(34.95%)、sed(31.07%)、sec(13.59%)、seh(8.74%)、sei(8.74%)、seg(6.80%)和seb(1.94%);同时得到71种毒素基因型,以sea+sej(11.65%)最为流行,分布地区不尽相同,其次为PVL+sea+see+sej(9.71%),耐红霉素的金黄色葡萄球菌含的毒素基因类型比较复杂,sej基因检出率高达98.68%。在BP平板中分别添加头孢西丁和苯唑西林,均未检测出MRSA。【结论】猪肉存在金黄色葡萄球菌的污染,其污染菌株存在多重耐药性并携带较多毒素基因,提示应加强猪肉金黄色葡萄球菌的监测。在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL)筛选MRSA的方法不一定可靠,其可信度有待证明。     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.