海绵共附生放线菌Streptomyces sp. A01059抗稻瘟病活性物质的分离研究

对海绵共附生放线菌Streptomyces sp.A01059的发酵液进行研究,以获得有抗稻瘟病活性的化合物;用乙酸乙酯对发酵液进行萃取,然后用活性追踪的方法对乙酸乙酯萃取物进行分析,最后使用制备液相获得相应的活性部位;结果获得分子量为508和522的两个活性化合物;实验首次对放线菌Streptomyces sp.A01059的代谢产物进行分离研究.为稻瘟病的防治提供了新的途径.     

海洋真菌Aspergillus sp. SCS-KFD03的化学成分分析

为了研究海洋真菌Aspergillus sp.SCS-KFD03次级代谢产物的活性成分,采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和高效液相色谱等技术从其发酵液中分离得到7个化合物,运用各种波谱方法鉴定为3β,5α-dihydroxy-(22E,24R)-ergosta-7,22-dien-6-one(1);3β,4α-dihydroxy-26-methoxyergosta-7,24(28)-dien-6-one(2);麦角甾醇(22E,24R)-ergosta-5,7,22-trien-3β-ol(3);leporin B(4);astellolide G(5);astellolide B(6)和astellolide A(7),并测定化合物的抗氧化活性、乙酰胆碱酯酶和α-糖苷酶抑制活性。结果表明:化合物2,3,5和6具有一定的抗氧化活性,化合物2具有较弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性,化合物4具有强于阳性药阿卡波糖的α-糖苷酶抑制活性。     

新型Streptomyces sp. N2代谢粗提物的抑菌活性及其水果保鲜初探

【目的】为明确新型广谱拮抗链霉菌N2的抗菌谱,开发安全高效的生物防腐剂。【方法】采用菌丝生长速率法和杯碟法,初步评价了N2粗提物对酵母菌、13种植物病原真菌、3种G+和3种G-细菌的抑菌效果。【结果】N2粗提物具有广谱、高效的拮抗特性,尤以对葡萄座腔菌、意大利青霉、烟草黑胫病菌、枯草芽孢杆菌(G+)和水稻黄单胞菌(G-)的抑制作用最为明显。通过建立毒力回归方程发现N2粗提物对辣椒疫病菌、葡萄座腔菌、西瓜枯萎病菌、棉花枯萎病菌、烟草黑胫病菌、水稻纹枯病菌、莴苣菌核病菌和稻瘟病菌的EC50分别为0.45、1.02、3.39、1.70、1.49、1.18、1.12和0.68μg·m L~(-1)。同时,离体水果的生物防效与保鲜试验的结果表明,N2粗提物中的有效抗菌物质能显著提高猕猴桃的相对防效,抑制水果表面有害病菌的生长,减缓水果的水分散失,提高水果的贮藏品质。【结论】综上可知,链霉菌N2拥有广谱拮抗特性,有望在食品保鲜领域发挥重要作用。     

Streptomyces sp.N2所产农抗N2对桔青霉的拮抗活性及作用机制研究

【目的】Streptomyces sp. N2是本课题组分离筛选到的一株可产新型抗真菌活性物质(3-甲基-3,5-氨基-4-烯-吡喃-2-酮,分子式为C_6H_7O_2N,农抗N2)的新种,此活性物质对桔青霉具有良好的拮抗效果。从生长特征、细胞形态学等角度,为揭示农抗N2在桔青霉生长发育中的抑菌作用机理奠定基础。【方法】首先采用常量培养基稀释法测定了农抗N2对桔青霉的最低抑菌浓度、杯碟法测定了不同浓度农抗N2对桔青霉的抑菌活性菌丝和生长量法测定了不同浓度农抗N2对桔青霉生长曲线的影响,并通过扫描电镜及透射电镜探究了农抗N2对桔青霉超微结构的影响。【结果】Streptomyces sp. N2所产农抗N2对桔青霉有较强的抑制作用,而且其机理初步判定为破坏桔青霉菌丝的菌丝结构,推迟了桔青霉对数期的到来而抑制菌体的生长。菌体最低抑菌浓度(3 d)为5.77μg/mL,其对应的抑菌圈大小为(13.04±1.06)mm。药液处理后,桔青霉生长对数期推迟了2 d。由扫描电镜以及透射电镜结果可推测,农抗N2可干扰桔青霉细胞壁合成,破坏细胞膜结构,致使细胞发生质壁分离。【结论】农抗N2对桔青霉的菌丝生长具有很强的抑制作用,且具有浓度效应,其对桔青霉的形态和结构有很大的破坏作用,可以推测农抗N2能够影响桔青霉细胞壁相关蛋白的合成,使细胞壁的通透性增强,影响其细胞膜及内部细胞器。     

一株木霉真菌Trichoderma sp.的化学成分研究

本研究通过对一株木霉真菌Trichoderma sp.发酵液乙酸乙酯提取物和菌丝的甲醇提取物进行化学成分调查,从中分离到4个化合物。经过波谱数据分析,鉴定其为cyclonerodiol(1)、5,8-epidioxyergosta-6,22-diem-3-ol(2)、1-monoolein(3)和methyl elaidate(4)。化合物1在质量浓度800 mg/L时对全齿复活线虫表现出微弱的毒杀活性,72 h内线虫致死率为35.6%,在1 mg/disc的浓度下对淡紫拟青霉抑菌圈大小为1.2 cm。     

海洋放线菌抗肿瘤生物活性物质研究进展

近几年来,海洋放线菌代谢产物的研究取得了很大的进展,从海洋放线菌中分离到许多结构新颖、有特殊生理活性和潜在药用价值的新化合物,其中,抗肿瘤化合物的研究及开发显示出十分诱人的前景。按化合物的结构类型简要介绍了来自海洋放线菌的几种抗肿瘤化合物。     

紫海胆肠道放线菌Micromonospora sp．HDa2次生代谢产物的研究

采用常规色谱分离技术对分离自健康紫海胆肠道的稀有放线菌Micromonospora sp．HDa2发酵液的化学成分进行分离纯化,并以波谱技术确定化合物的结构。结果表明：从放线菌Micromonospora sp．HDa2的发酵液乙酸乙酯提取物中分离鉴定了6个已知结构的环二肽化合物．分别为环（苯丙-缬）二肽（1）、环（苯丙-亮）二肽（2）、环（苯丙-异亮）二肽（3）、环（苯丙-苯丙）二肽（4）、环（亮-亮）二肽（5）和环（亮-异亮）二肽（6）。对紫海胆肠道放线菌进行分离。结果发现以上化合物均是从Micromonospora属放线菌中发现的。     

融合重组菌Streptomyces sp. FEEL-1产ε 聚赖氨酸的发酵培养基优化

对Streptomyces sp. FEEL 1产ε 聚赖氨酸的发酵培养基(M3G)中的6种主要成分进行了PB CCD的响应面优化。PB实验表明,酵母粉、KH2PO4和MgSO4对ε PL产量影响显著,结合最陡爬坡试验和中心组合实验构建出各因素的最佳浓度:葡萄糖50 g/L,酵母粉7.54 g/L,(NH4)2SO4 5 g/L,KH2PO4 1 g/L,K2HPO4 248 g/L,MgSO4 2 g/L,ZnSO4 0.03 g/L,FeSO4 0.03 g/L,该条件下ε PL摇瓶产量能达1.62 g/L。在此基础上对微量元素ZnSO4,FeSO4进行了单因素实验的优化,发现ZnSO4对ε PL产量几乎没有影响,而0.06 g/L的FeSO4则可以进一步使ε PL产量提高至1.73 g/L,较M3G培养基提高了57.2%。在5 L发酵罐中进行控制pH的分批发酵,ε PL产量达到8.76 g/L,较其在M3G培养基提高了41.1%。     

链霉菌Streptomyces sp. S9木聚糖酶基因xynBS9的克隆表达及性质分析

通过设计简并引物和构建基因组文库的方法从链霉菌Streptomyces sp.S9中克隆得到β-l,4-木聚糖酶基因xynBS9。该基因全长1 023 bp,编码340个氨基酸。将不带原基因信号肽编码序列的xynBS9以正确阅读框架克隆到表达载体pET-22b(+)上,并在大肠杆菌BL2l(DE3)中诱导表达。重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和疏水柱纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明,重组木聚糖酶最适温度为60℃,最适pH为6.5,在碱性条件下具有良好的稳定性。     

灰斑象Diocalandra sp.的研究

报道了云南甘蔗上具有毁灭性的地下害虫甘蔗灰斑象Ｄｉｏｃａｌａｎｄｒａｓｐ．的研究结果。该害虫主要以幼虫在地下蔗头内为害,一年发生一代,以幼虫在受害蔗头内越冬。介绍了其各个时期的生物学特点和习性,研究了其发生环境,并提出了相应的防治措施     

抗农作物病原真菌的Streptomyces sp.IIR21菌株分离及其克拉维烷基因簇分析

从神农架烟草种植地土壤中分离出1株对7株农作物病原真菌具有抗性活性菌株,命名为ⅡR21菌株。采用琼脂块法测定,该菌株对稻瘟病菌、立枯丝核病菌、腐霉病菌、禾谷镰刀病菌和黄色镰刀病菌具有较强的抑菌活性。对该菌株的生理生化特性和16SrRNA基因序列同源性比对,初步鉴定ⅡR21菌株属于链霉菌属。经过有机溶剂萃取、硅胶柱层析、薄层层析和制备型高效液相色谱对ⅡR21菌株发酵液进行分离纯化,获得了1个纯度为90.34%的具有抗稻瘟病菌168菌株活性的化合物单体。采用高通量测序技术对ⅡR21菌株进行全基因组测序,通过全基因组序列分析,ⅡR21菌株基因组中包含克拉维烷的合成基因簇,并推测出克拉维烷的合成代谢途径。     

紫苏内生真菌Penicillium sp.12Y25化学成分及抑菌活性研究

【目的】研究紫苏内生真菌Penicilliumsp.12Y25的化学成分及其抑菌活性,为开发新型天然药物提供参考。【方法】以分离自山西太原健康紫苏茎秆的内生真菌为研究对象,采用硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离手段和现代光谱学技术,对其液体发酵产物的乙酸乙酯提取物进行了分离和结构鉴定;采用菌丝速率法,测试了分离化合物对番茄灰霉病菌、西瓜枯萎病菌和小麦赤霉病菌等植物病原菌的抗菌活性。【结果】从紫苏茎秆内生真菌Penicilliumsp.12Y25发酵产物的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了10个化合物,分别为麦角甾醇过氧化物麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮、9(11)-去氢麦角甾醇过氧化物、22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β-三醇、22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β,9α-四醇、麦角甾醇、单油酸甘油酯、α-亚麻酸、对甲氧基苯乙酸和对氨基苯乙酸,均为首次从该菌种中分离得到,其中22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β-三醇和22E,24R-7,22-麦角甾二烯-3β,5α,6β,9α-四醇对番茄灰霉菌和西瓜枯萎菌有中等强度的抑制活性。【结论】紫苏内生真菌Penicilliumsp.12Y25化学成分多样,部分化合物具有植物病原菌抗菌活性。     

海洋放线菌活性代谢产物的研究进展

简要介绍了海洋放线菌的研究背景,重点对近年来发现的由海洋放线菌产生的活性代谢产物的研究进展作一概述,并对这些代谢产物依据其结构进行分类概述。     

抗真菌海洋放线菌的分离筛选与抗菌机制研究

从江苏连云港海域采集海水、海泥、漂浮物、海洋动物样品,分离得到15株海洋放线菌.采用平板对峙培养法和打孔法测定放线菌不同菌株对玉米小斑病菌(Bipolaria maydis)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum)、雪腐镰刀病菌(Fusarium nivale)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、细链格孢病菌(Alternaria tenuis)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)等植物病原真菌的抑制作用.结果表明:放线菌菌株BM-2、T-6、T-1-1、D-3、XS-X5-3、M-7、X-7对供试的植物病原真菌具有一定的抑制作用.其中BM-2菌株的抑菌作用最强,其发酵液能明显抑制多种植物病原真菌菌丝的生长,同时对细链格孢菌的分生孢子萌发和芽管伸长都有一定的抑制作用.     

烟台海岸海洋放线菌分布规律及抑菌活性研究

[目的]研究烟台海岸潮间带泥样中放线菌分布规律及抑菌活性。[方法]采用常规分离培养和琼脂块拮抗性测定法。[结果]从烟台海岸潮间带泥样中共分离得到357株放线菌,拮抗细菌的放线菌菌株数比拮抗真菌的多,抗革兰氏阴性细菌的放线菌菌株数较抗革兰氏阳性细菌的多,拮抗青霉的放线菌菌株数多于抗白色假丝酵母的放线菌菌株数;从泥样分离筛选所得的拮抗性放线菌中,中等拮抗性放线菌占多数,而且随着参试靶标菌个数的增加,对靶标菌均有拮抗性的放线菌菌株数却在减少。[结论]为进一步开发利用烟台海岸的海洋放线菌资源奠定了基础。     

海洋放线菌B5菌株发酵液抗菌谱及稳定性研究

B5菌株是从山东威海浅海海域分离得到的一株放线菌,经初步鉴定为链霉菌属（Streptomyces）.其发酵液对15种病原真菌进行室内杀菌活性生测,结果表明,B5菌株发酵液对13种供试真菌的菌丝生长抑制率均在80%以上;其发酵液对3种病原细菌进行室内杀菌活性生测,结果表明,B5菌株发酵液对3种供试细菌的抑菌圈直径均在15mm以上.发酵液经80℃处理6h,活性仅丧失了18.2%.在酸性条件下活性稳定,但在碱性条件下活性不稳定.捷克八溶剂系统纸色谱测定结果表明,该发酵液的主要活性物质为碱性水溶性抗生素.     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

MB—97海洋放线菌在大豆田应用技术研究

ＭＢ－９７海洋放线菌在大豆田应用技术研究表明，ＭＢ－９７海洋放线菌可有效控制重迎茬大豆的减产损失，并总结出了相应的综合应用技术。     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

D-101大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4活性成分条件的研究

为了优化大孔吸附树脂分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中活性成分的条件,以洗脱液对猕猴桃溃疡菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)抑菌活性的强弱为评价指标,采用D-101大孔吸附树脂对放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4的发酵液进行吸附和洗脱试验。结果表明:当发酵液上样量为100mL,pH为6,洗脱流速为150mL/h,解析溶剂为φ=80%的丙酮水溶液,洗脱体积为40mL时,洗脱液的抑菌圈直径最大,吸附解析效果最好。说明,D-101大孔吸附树脂可用于分离放线菌Streptomyces lavendulae gCLA4发酵液中的活性成分。