家兔的转基因研究及其应用

自 Palmiter等 (1982)把大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵获得“超级巨鼠”以来，世界各国科学家对家畜的转基因研究产生了极大的兴趣，并相继在兔、羊、猪、牛、鸡、鱼等动物上获得转基因成功。家兔既是常用的实验动物，又是重要的经济动物。从其自然特性来看，转基因家兔的研究与培育，不仅可以促进其自身基因表达和调控的研究，而且能为大家畜的转基因研究提供重要的技术依据。 1家兔的转基因技术 1.1显微注射法 　　显微注射法是采用显微注射仪对受精卵进行注射的一种技术，其基本原理是用精细的显微注射针将外源基因直接注入动物受精卵…     

转猪生长激素基因家兔获得成功

Palmiter等(1982)将大鼠生长激素基因注射到小鼠受精卵雄原核后移植,率先获得转外源基因动物。转基因并有表达的小鼠比一般小鼠生长快两倍。以后家兔(Brem等,1985),猪和绵羊(Hammer等,1986)等家畜都相继获得转基因后代。而且已有部分转基因家畜能不同程度地表达整合基因,表现出目的性状。仅就已获得的约80头转生长激素基因猪的饲养试验结果来看,有近半数的转基因且表达者提高了生长速度约10％(Pursel等,1987、Vize等,1988),胴体瘦肉率也得以显著提高(Brem等,1988)。     

实时荧光定量PCR法检测转基因猪外源基因整合拷贝数

以GFP转基因猪为研究对象,以转铁蛋白受体基因为内参基因,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR建立针对外源基因GFP和内参基因的双标准曲线和方程。对转基因猪基因组DNA中外源基因和内参基因的拷贝数同时定量检测,外源基因与内参基因起始模板拷贝数的比值即为外源基因在转基因猪中的整合拷贝数。同时,利用Southern-blot进行验证分析。结果显示:实时荧光定量PCR法检测2头转基因阳性猪外源基因拷贝数分别为3和2,2头转基因阴性猪外源基因拷贝数均为0,结果同Southern-blot检测一致。结果表明:实时荧光定量PCR法高通量、灵敏、方便,可以更好的用于转基因猪外源基因整合拷贝数的检测。     

转基因猪的遗传特性

整合人生长激素释放因子(RH—GH)基因和人生长激素与小鼠WAP为启动子的融合基因的大白猪,其F_2代与F_1代相比较,外源基因的基因型数量减少。转基因公猪同非转基因母猪交配,所得到的转RH—GH基因猪中,雄性的占65%,雌性的占35%;而在转WAP—hGH基因猪中,雌性的占到82.8%.F_1、F_2和F_3代外源基因数量上的差别是明显的,在4月龄和6月龄时,转WAP—hGH基因猪的活重和平均日增重与对照组相比,明显提高.由于DNA重组技术的发展,通过外源基因定向整合、改变动物基因型的方法得到应用,使家畜出现新的、可以遗传的生物学特性.俄罗斯和德国的学者合作,从1990年起在实验农场,以大白猪为试验材料进行了繁殖转基因猪的实验,这些转基因猪是通过受精卵显微注射外源基因的方法得到的.用大学教授提供的转基因公猪的冷冻精液以及在该实验农场新得到的转基因公猪的精液进行人工授精.     

鸡鸭异种间转基因嵌合体的制备

为研究异种间嵌合体的制作方法及供体和受体的嵌合情况,同时探讨绿色荧光蛋白(pEGFP-N3)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值。本研究利用脂质体介导法将外源pEGFP-N3质粒转入到北京鸭原始生殖细胞(PGCs)中,将转染后的PGCs以微注射法转移至受体北京油鸡的胚下腔,探索转基因鸡鸭嵌合体的制作方法。结果显示:PGCs在转染后6 h开始有外源基因的表达,体外培养24 h后获得了33.6%的转染效率。120枚蛋在整个孵化期中共有33枚鸡胚发育,但最终无孵化成活鸡。在13个鸡胚中检测到有外源基因的存在,阳性率为10.8%。PCR扩增禽类W染色体特异性的重复序列发现,8只嵌合体公鸡的性腺都嵌合了供体异性的细胞。研究结果表明所采用的嵌合体制作方法制备转基因禽类是可行的。鸭PGCs能够迁移并定居到鸡胚性腺中,并有可能在鸡性腺中增殖分化成有功能的配子。     

猪基因转移技术的新进展

前言过去十年里,随着重组 DNA 技术的发展,科学家们已能分离单一基因,分析和修饰核苷酸的结构,复制分离到的基因,并将外源基因转移到动物的基因组中。这种对遗传物质的直接操作被称作“遗传工程”。“转基因动物”则是指基因组中含有重组 DNA 的动物1983年,作者与 Ralph 致力于生产转基因猪的研究,并获得了首例转基因猪(Ham-mer 等,1985)。本文扼要介绍转基因猪生产技术的研究现状。1 转移猪基因的方法生产转基因猪的微注射过程与小鼠相似,只是猪卵母细胞不透明,其原核很难辨认。我们发现,将猪卵母细胞以10000～     

用转染的胎儿成纤维细胞进行核移植产生表达人IX因子的转基因羊

自从１９８５年建立转基因方法以来，将外源性ＤＮＡ注射到受精卵的原核内是唯一可行的产生转基因家畜的方法。然而，仅有少部分动物（约５％）把注入的外源ＤＮＡ整合入基因组中。另外，由于整合时间和整合位点是随机的，许多转基因系不能高效表达外源基因或外源基因不能...     

利用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数体系的建立

黑素皮质素受体4(Melanocortin receptor 4,MC4R)基因是影响猪生长肥育性能的主效基因之一,是参与调控体重、采食和能量平衡的关键信号物质。动物转基因技术目前主要应用于生产珍贵蛋白、基因治疗、器官移植、动物品种改良和建立疾病模型等方面。目前人们已经获得了如羊、牛、小鼠、猪等多种转基因克隆动物。确定外源基因的拷贝数和整合位点是对后续外源基因功能探讨和表型研究的前提条件。本研究将MC4R基因转入猪PK15细胞中,挑单克隆,通过3对特异性引物对转染细胞做PCR扩增检测出阳性细胞,实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数,初步建立了检测外源基因拷贝数的实验体系。     

北方农户转基因动物养殖意愿调查与分析

<正>转基因动物是通过向受精卵或早期胚胎中导入外源基因,有目的地对生物的遗传物质基础进行修饰、改造、培育新的品系。若外源基因与动物本身的基因(染色体)整合在一起,外源基因就能随生物细胞的分裂而增殖,在体内得到表达,并能稳定地遗传给后代。目前,已经有转基因小鼠、兔、绵羊、山羊、猪、牛、鸡和鱼等多种转基因动物问世。转基因动物是目前社会上讨论广泛、倍受人们关注的一个焦点,也存在很多争议。当前,农户是否愿意饲养转基因动物、     

转基因技术在鸡的应用

转基因技术是当前生物技术领域研究的热点之一,其科学意义和应用价值重大。有关转基因牛、羊、猪、小鼠等的研究已引起国内外普遍关注。目前,转基因鸡的研究业已成为国外研究热点,而国内研究则较少。本文主要介绍以下四个方面。1　鸡卵原始胚细胞的弹道转染自从Sanford等于1987年用高速微弹穿过细胞壁将外源基因导入植物细胞以来,弹道转染技术已广泛地应用于动物组织细胞、原核细胞、甚至于细胞器的基因转染。该技术中两大基本组成部分(粒子加速系统、粒子包装系统)已得到极大的改进。鸡胚胎所具有的一系列特点使它更适于弹道转染:1鸡胚材…     

禽类转基因生产及其应用的研究现状和进展

1.7 精子载体转基因法（Sperm mediated gene transfer) 1.7.1 辐射精子作载体法 Pandoy和Patchell用致死剂量辐射带有选择标记的鸡精液进行授精（制造假妊娠），然后再用同种精液进行正常受精，以此来进行品种标记基因的转导。该试验以羽色和蛋壳色基因为标记，用此法在后代中获得3.5%的后代可表达外源基因。这种方法可以准确地使DNA进入核内，同时解决分离、提供插入所需基因的困难，但是无特异性，遗传频率不能预知，而且会导入不需要的基因。Bumstead［6］从对马立克氏病敏感和淋巴白血病抗性的母鸡得到转基因鸡，发现这种转基因鸡蛋对两种疾病都表现敏感而不表现抗性。这一实验直接证实了辐射精子发生非特异性整合的事实。 1.7.2 精子载体法 在禽类中精子载体转基因法能够在子代中获得1/300的携带外源基因个体。1990年法国国立发育生物学研究所的以色列研究者用此法导入外源基因，用Southern杂交法检测出阳性个体。但是至今未能获得F1代。Gruenbaum等以LacZ和CAT作为标记基因，用吸附该基因的鸡精子进行人工授精，对获得的胚胎及雏鸡进行Southern杂交和PCR分析，结果在所检测样本中30%～60%整合有外源DNA，在部分组织中检测到外源基因表达产物，在传代试验中，证明外源DNA能遗传给后代。Squries等根据精细膜的特性和相似相溶原理，用脂质体包装外源DNA与精子共同孵育，然后进行人工授精，在鸡上获得成功，阳性率为15%～25%。     

转基因技术在畜牧生产中的应用

80年代早期 ,产生了将外源基因显微注射到受精卵 ,产生携带外源基因的动物品系新技术 ,这种携带有外源基因的动物称为“转基因动物”。随着现代分子生物学技术的发展 ,相继出现了 DNA体外重组、某些重要生产性状基因的分离、基因融合、胚胎体外操作等转基因相关技术 ,并在畜牧生产中得到了广泛的应用。目前已报道的转基因动物有线虫、果蝇、海胆、两栖动物、鱼类、小鼠、猪、牛、羊、鸡、兔等。本文就目前转基因的方法及该技术在提高畜禽生产性能、抗病育种、疾病治疗等方面的应用作一论述。1　外源基因转移方法1 .1　显微注射法　 Jaenis…     

转pGH基因猪繁殖性能及外源基因的传代

为探讨外源pGH基因对转基因猪繁殖性能的影响及其在F1代中的遗传情况,对转pGH基因长白猪与普通长白猪繁殖性能的各项指标进行了测定和比较,并对转基因猪F1代仔猪进行了外源基因的检测。结果显示,除转基因母猪F1代仔猪断奶个体质量差异显著(P0.05)外,转pGH基因猪与非转基因猪繁殖性能其他指标均差异不显著;转基因公猪和转基因母猪F1代仔猪转基因阳性率分别为50.00%和47.83%,外源pGH基因对转基因猪的繁殖性能未产生显著影响,并可遗传给下一代。本研究为规范合理选育转pGH基因猪提供了理论依据,为进一步研究节粮型高瘦肉率转基因猪及其在实际生产中的应用奠定基础。     

转基因动物研究进展

Ｇｏｒｄｏｎ等（１９８０）将重组ＤＮＡ用显微注射法导入小鼠受精卵原核，首次获得了整合有外源基因的转基因小鼠，此后的十几年中，建立了许多整合有外源基因的转基因小鼠和大鼠、转基因兔、猪、羊、牛，使得转基因动物这一技术在基础研究和实际应用方面展示出良好的前...     

转基因动物的研究进展及其在畜牧业上的应用

转基因动物技术始于20世纪80年代,近30多年来,随着研究的深入,转基因动物的研究工作取得了突破性的发展,并且是目前生物技术领域研究的热点之一,具有重大的科学意义和应用价值。这项技术是继连锁分析、体细胞遗传和基因克隆之后的第四项技术。转基因动物是通过向受精卵或早期胚胎中导入外源基因,有目的地对生物的遗传物质基础进行修饰、改造、培育新的品系。若外源基因与动物本身的基因（染色体）整合在一起,外源基因就能随生物的分裂而增殖,在体内得到表达,并能稳定地遗传给后代。目前,已经有转基因小鼠、兔、绵羊、山羊、猪、牛、鸡和鱼等多种转基因动物问世。     

转基因技术在畜牧业中的应用

1973年美国首先成功地将基因在体外 重组并通过质粒转入细菌内,进行无性繁 殖,基因工程从此应运而生.基因工程或称 基因重组技术,是将不同生物的基因在体外 人工剪切组合并和质粒、噬菌体、病毒的载 体DNA连接,然后转入微生物或细胞内进 行扩增,并使转入的基因在细胞内表达,产 生所需的蛋白质.一些转基因技术已经在 家畜和家禽中得到应用.例如,猪体导入人 生长激素基因,使猪膘厚减少,瘦肉率提高; 在转基因猪中表达了人的血红蛋白,在转基 因山羊奶中,获得堪称血友病人救星的药物 蛋白,转基因鸡的生长激素显著提高;将人 的基因导入产蛋鸡,其输卵管中合成了人类 促红细胞生成素,等等.不久的将来,转基 因技术将在动物疾病控制、品种改良和药物 开发方面发挥举足轻重的作用. (晓红辑)     

信息大观

上海有关政府部门日前透露，随着国际上动物转基因前沿领域的转基因鸡技术的发展，上海出现了全国第一家转基因鸡产业开发公司。这家公司在全国已率先开发通过鸡蛋清表达外源基因的技术。据技术鉴定专家说，这一接近国际水平的转基因鸡技术，其主要成果在于：构建了能在鸡蛋清中表达外源基因的表达载体；建立了有效的转基因技术，转基因效率在３０％至７０％之间；在２０％以上的转基因鸡所产的鸡蛋清中检测到了实验用的外源基因“人瘦素蛋白”，其中最高表达量在每升蛋清中含１０毫克至３０毫克。“如此高的含量，在国内还从来没有过”。这…     

世界首例ROSA26基因敲入猪模型诞生

中国兽药信息网按转基因猪在农业新品种培育和生物医药研究中具有非常重要的应用价值。长期以来，由于缺乏猪胚胎干细胞，转基因猪的制备主要依赖体细胞基因修饰和体细胞核移植技术。而目前，对体细胞的基因修饰主要依赖将外源基因随机插入猪基因组的方法，导致外源基因在猪基因组中的整合位点和拷贝数不可控，     

家畜（禽）转基因研究现状

家畜（禽）转基因研究现状李光鹏严云勤徐立滨（东北农业大学生物工程系·哈尔滨·１５００３０）收稿日期：１９９６－０４－３０１转基因家畜（禽）研究概述１．１猪最早进行的转基因猪研究，是将人生长激素（ｈＧＨ）基因导入猪的基因组中。但ｈＧＨ基因在猪中的表达，...     

原核注射法转基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律

应用非同位素标记染色体原位杂交技术，对9头不同世代的转OMT－PGH帮6头原代转hDAF基因猪外源基因整合位点的分布及其遗传规律进行了研究。结果表明，4头原代转OMT－PGH基因猪外源基因分别整合在第7，13，2和8号染色体上，6头原代转hDAF基因猪外源基因分别整合在第13，6，11，2，7和7号染色体上，证实了用原核注射法转基因猪外源基因的整合是“随机”的，来自同一亲本，不同世代的5头转OMT－PGH基因猪，其外源基因均存在于第13号染色体上，与共同祖先原代转基因猪的整合位点相一致，表明转基因猪外源基因可以传递给后代，且整合位点的遗传是相对稳定的。