吕梁黑山羊成纤维细胞培养过程中霉菌污染的清除

为建立和完善细胞在体外培养过程中清除霉菌污染的方法,挽救珍贵的细胞资源,试验在被霉菌污染的吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞培养液中分别添加2.5,25,250μg/m L的两性霉素B,每天洗涤、换液一次,连续处理14 d,比较不同浓度药物的清除效果。结果显示,细胞培养液中添加25μg/m L的两性霉素B后,细胞中无霉菌生长,细胞生长良好,药物处理过程中可正常传代,处理后细胞生长曲线与对照组细胞无明显差异。说明细胞培养液中添加25μg/m L两性霉素B既能清除霉菌污染又不会对细胞造成影响,该浓度是清除霉菌污染适宜的质量浓度。     

赤狐耳成纤维细胞的体外培养及核型分析

建立赤狐的耳成纤维细胞的分离和培养体系,为狐的核移植,转基因狐的研究奠定基础。采用组织块培养法分离狐耳成纤维细胞的原代细胞,再利用胰酶短暂消化法进行纯化传代培养,观察成纤维细胞的形态,并进行染色体分析。结果表明,组织块培养法可获得成纤维细胞,经过纯化培养,可获得均一、稳定的狐耳成纤维细胞。可以作为核移植的供体细胞,推动特种动物的转基因研究。     

梅花鹿耳成纤维细胞体外培养及转染条件优化

为开展目标蛋白质在梅花鹿耳成纤维细胞的功能研究提供理论和技术依据,培养梅花鹿耳成纤维细胞,优化脂质体转染梅花鹿耳成纤维细胞的条件,以获得最优质粒转染参数。采用组织块贴壁法和差速贴壁法分离梅花鹿耳成纤维细胞,观察细胞基本形态特征变化,免疫荧光法鉴定波形蛋白（Vimentin）的表达;以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因为标记基因,利用LipofectamineTM 3000介导外源DNA转染梅花鹿耳成纤维细胞,探讨质粒DNA与脂质体比例（1.0∶1.0,1.0∶1.5,1.0∶2.0,1.0∶2.5,1.0∶3.0）、质粒用量（0.5,1.0,1.5,2.0,2.5μg）、细胞传代次数（第2～6代）、细胞初始接种密度（50%,60%,70%,80%,90%）、转染效果观测时间（12,24,36,48,60 h）对转染效率的影响。结果表明：组织块贴壁法培养的梅花鹿耳成纤维细胞在倒置荧光显微镜下可见长梭形细胞生长,细胞免疫荧光检测波形蛋白（Vimentin）的表达结果为阳性;筛选的最佳转染条件：当质粒DNA与脂质体比例为1.0∶2.0,质粒DNA用量为1.5μg,细胞传代次数为第3代,细胞初...     

延边奶山羊耳成纤维细胞体外培养的研究

为了给延边奶山羊转基因核移植及乳腺生物反应器研究提供足够且状态良好的细胞,采取延边奶山羊耳部组织块,利用组织块贴壁法进行原代培养和传代培养,对于纯化了的成纤维细胞观察其生长状态,并对4代以后的成纤维进行生长曲线、核型分析,并对细胞进行冷冻复苏试验,检测细胞活力.结果表明,4～13代体外培养成纤维细胞的细胞形态及核型基本正常,13代以后,细胞染色体变异比例增加,15代以后,细胞生长速度减慢;冷冻复苏后的细胞除生长速度减慢外,其它细胞生物学特征均正常,基本符合体细胞克隆、转基因等试验的基本要求,可以用于试验研究.     

血清体积分数对培养黑山羊成纤维细胞的影响

为了建立并完善吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞培养体系,为进一步的克隆试验提供最佳生长状态的供体细胞,在常规培养液的基础上添加不同浓度的新生牛血清(0,5%,10%,20%,40%),每天在倒置显微镜下观察培养细胞的生长状态,并用台盼蓝染色法统计细胞数目,连续观察7 d,绘制生长曲线,比较不同血清体积分数的培养液对吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞体外培养的影响。结果表明,吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞虽然在不同血清体积分数的5组中均有生长增殖,但生长状态不同,差距较大;其中,10%的血清培养液试验组培养的细胞生长状况最好,细胞形态完整清晰,增殖快,数量多,更适合此细胞的生长。不同体积分数血清的培养液对成纤维细胞的生长具有一定影响,10%血清体积分数的培养液最适合吕梁黑山羊耳缘成纤维细胞的培养。结果可为进一步研究克隆、基因转染、构建基因文库等提供生物学材料。     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型,Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞,２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代增减２的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２－３代后,可获得纯化的成纤维细胞。     

兔成纤维细胞的分离与体外培养

用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。２．５ｇ／Ｌ胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经２～３代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第１３代与第１１代,传代后染色体数目不变。     

吕梁黑山羊的体细胞克隆

研究旨在尝试利用体细胞克隆技术进行地方优良品种吕梁黑山羊的克隆保种。剪取吕梁黑山羊耳缘组织,通过组织块培养法获得了吕梁黑山羊皮肤成纤维细胞,使用第6代的皮肤成纤维细胞作为供体细胞进行核移植,将重构胚胎通过手术移植到受体辽宁白绒山羊母羊体内,结果成功获得了2只体细胞克隆黑山羊,生长发育状况良好,且与供体黑山羊一致,表明体细胞克隆技术是可行的。这是山西省首例吕梁黑山羊克隆个体,它的成功为优良地方品种改良、保种等研究提供了有效可行的方法,为下一步进行吕梁黑山羊的转基因育种研究奠定了技术基础。     

吕梁黑山羊特色产业发展思考

吕梁黑山羊是山西省优良的地方山羊品种,具有适应性强、耐粗饲、易抓膘、抗病抗逆、肉质好等特点,主要分布在晋西吕梁山脉一带。保护并开发利用好这一优质特色种质资源,将资源优势转化为品牌优势和效益优势,对促进吕梁市特色畜牧经济发展和农民脱贫致富具有现实意义。阐述了吕梁黑山羊产业发展现状,分析了其产业发展潜力,并对其保护及特色产业发展提出建议。     

山羊成纤维细胞体外培养研究

分别采用组织块法与消化法对山羊耳成纤维细胞进行原代培养,比较两种方法的培养效果.结果表明,组织块法培养的细胞生长稳定,5～7d有细胞生长,15～18d长满单层;消化法培养的细胞,通过简化酶作用时间及用量的调控,可得到较为单一的成纤维细胞,且经过4～7d生长后能形成单层.同时对细胞培养过程中常遇到的污染问题及解决方法进行了探讨,为动物组织培养研究提供了实验依据.     

用胶原酶消化法培养德保矮马耳缘组织成纤维细胞初探

 将德保矮马耳缘组织经胶原酶消化法培养成原代细胞，并成功建立起该组织成纤维细胞系。这种细胞贴壁生长，具有密度接触性抑制性质；该方法获得的原代细胞经传代后接种，细胞群体倍增时间（PDT）为35.9 h；细胞染色体众数2n = 64的细胞数占91.3%～92.8%；乳酸脱氢酶（LDH）、苹果酸脱氢酶（MDH）同工酶分析，没有其它细胞系污染；细菌、真菌、病毒、支原体检测阴性。该系符合ATCC要求的细胞系鉴定项目，成为保护矮马这一国家重要畜禽品种的宝贵遗传资源，并为相关遗传学研究提供了有效的试验材料。同时得出胶原酶消化培养法比组织块培养法在获得原代细胞速度快；组织块培养法的细胞群体倍增时间（PDT）为48 h。     

麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养与核型分析

为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞,本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞,用胰酶轻度消化后传代3～4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞,并经过免疫荧光鉴定;麇鹿染色体数目为2n=68,核型式为2（M）＋64（A）,XY（A,M）;含10％NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长;复苏后可获得87．78％的贴壁率。     

牦牛成纤维细胞的体外培养研究

采用组织块培养法,分别以DMEM(高糖)和DMEM/F12两种合成培养基为基础液,添加15mL·L-1胎牛血清(FBS)为细胞生长液对牦牛耳组织进行原代培养.同时,比较不同冷冻程序对细胞冷冻的影响,探讨牦牛体细胞在体外环境下的生长参数及染色体变化.结果表明,组织块在第6天开始有细胞游离,14天长至单层,两种基础培养基对细胞生长的影响差异不显著(P＞0.05).细胞在-20℃短时间(不超过1h)冷冻效果较好,但平衡时间过长对细胞解冻后生长影响差异极显著(P＜0.01).染色体分析显示,牦牛成纤维细胞在体外条件下生长,不同传代次数(3代和12代)细胞染色体核型稳定,在所得的中期分裂相细胞中,二倍体细胞都在96%以上.可用于体细胞核移植操作和其他研究.     

猪成纤维细胞的简易分离培养

比较了不同来源、不同状态组织和不同分离方法对猪成纤维细胞的影响,结果表明,离体组织长时间乙醇预处理和长时间储运会降低细胞活力,使生长速度减慢;初始原代细胞种类比较多,生长不均匀,只有传代培养3代以上,才能得到比较纯的成纤维细胞。     

吕梁黑山羊血浆酶活性与体型性状关系

以山西吕梁黑山羊为研究对象,用比色法分别测定血液GOT、GPT、Amy、CK、LDH酶活性和CP含量,用SAS软件分析其与6个体型性状指标的相关性,以期寻找一个有效的遗传标记,用于间接选择,为山西吕梁黑山羊育种研究提供新的理论基础。结果表明:吕梁黑山羊乳酸脱氢酶(LDH)活力与管围呈显著正相关(r=0.533,P<0.05);血清铜蓝蛋白(CP)含量与体高和背高呈极显著负相关(r=-0.848、r=-0.646,P<0.01),与管围呈显著负相关(r=-0.490,P<0.05)。改变他们的活力,可以改变生长性状。所以LDH和Cp可作为早期辅助选种指标。     

吕梁黑山羊品种资源亟待保护和利用

<正>1品种形成与数量分布吕梁黑山羊主要产于山西省西部黄土高原的吕梁山区一带,该品种的形成在本地的一些县志有少量相关记载,但无据可查。据了解其饲养史可     

小鼠胚胎成纤维细胞分离培养研究

为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学特性.结果表明,在实验室条件下,12.5～14.5 d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;最佳培养基为DMEM添加15;小牛血清;第3代细胞增殖最旺盛;室温条件下,0.125;胰蛋白酶消化MEF时间以8～10 min为宜.在培养ES细胞时,应选择第3～5代的MEF作为饲养层细胞.研究获得了可在实验室分离制备MEF的方法,为实验室进一步分离培养ES细胞奠定基础.     

波尔山羊及黄牛耳部成纤维细胞的体外培养

为了获得丰富的核移植供核体细胞,通过活体采集波尔山羊及黄牛耳部皮肤,利用组织块和消化法开展原代培养,并进行传代培养和培养细胞的冷藏、冷冻保存实验.建立了简易的波尔山羊和黄牛成纤维细胞体外培养程序.     

潮阳草鸡胚胎成纤维细胞的体外培养

以潮汕地区地方优质鸡种——潮阳草鸡胚胎组织为材料,采用组织块贴壁培养法进行了成纤维细胞的体外的原代培养和传代培养.结果表明,实验在体外成功培养了成纤维细胞,并进行了传代和冷冻保存,复苏后细胞的存活率仍达到90％以上,为潮阳草鸡的育种在细胞学方面提供了一定的科学依据.     

藏猪耳部成纤维细胞的分离与培养

用组织块法分离培养藏猪耳部成纤维细胞,并进行体外传代和冷冻,冷冻复苏后的藏猪耳部成纤维细胞仍可以正常培养和传代,冻存前后活率都在90%以上;其生长曲线呈典型的“S”型,细胞接种后,在经历0-2 d的潜伏期后,第3 d细胞开始迅速生长,进入对数生长期,到第10 d细胞开始发生接触抑制,生长缓慢进入平台期。研究结果表明,已成功分离培养到藏猪的耳部成纤维细胞,这将为藏猪的体细胞克隆和保种等方面的研究奠定基础。