不同品系小鼠精子冷冻及冻融精子体外受精的研究

采用小鼠精子冷冻、冻融精子体外受精的方法,进行小鼠保种、引种、生物净化及品系标准化的可行性研究,并初步探究小鼠精子冷冻的影响因素。实验选用同一年龄5种不同品系小鼠分别进行精子冷冻、复苏,并比较各品系冷冻效果及冻融精子的体外受精(IVF)率。结果显示,冷冻后各品系小鼠精子复苏存活率约在15%～50%之间;冻融小鼠精子体外受精结果随遗传背景的不同差异显著,受精率分别为:KM小鼠68.4%、ICR小鼠30.3%、DBA/2J小鼠47.2%、C57BL/6J小鼠6.8%、BALB/cA小鼠25%。冻融精子IVF得到的胚胎可以耐受体外培养。     

大肠杆菌LTB增强PRRSV-GP5蛋白免疫反应的研究

以猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)主要中和表位所在的糖蛋白GP5为模式抗原,采用肌肉注射、皮下注射和滴鼻免疫方式免疫6～8周龄ICR小鼠,利用间接ELISA检测血清抗体,MTT法检测淋巴细胞增殖.结果表明:三免后GP5弗氏佐剂乳化组小鼠血清抗体的水平最高,LTB+GP5免疫组的抗体水平显著高于单独GP5免疫组,肌肉注射免疫组的抗体水平明显高于皮下注射组,滴鼻免疫组没有检测到特异性血清抗体;各GP5免疫组均能不同程度地诱导脾脏B淋巴细胞增殖,其中GP5弗氏佐剂乳化组、LTB+GP5肌肉注射和LTB+GP5皮下注射组B淋巴细胞增殖显著,除了GP5弗氏佐剂乳化免疫组外,其他各免疫组均无明显的脾脏T淋巴细胞增殖反应.     

克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响

[目的]研究克林霉素对雄性小鼠生殖细胞的影响。[方法]取48只健康成年雄性小白鼠,随机分为试验A组、B组、C组和对照组,每组12只小鼠。试验A、B和C组分别注射克林霉素15、30和60 mg/kg.d,对照组腹腔注射生理盐水。29 d后,脱臼处死小鼠,观察小鼠精子的活率、畸形率、精子膜低渗肿胀率。[结果]试验B、C组小鼠精子活率和尾膜肿胀比率低于对照组,而畸形率高于对照组;试验A组小鼠精子活率、畸形率以及尾膜肿胀比率与对照组相比无显著差异。[结论]克林霉素使用剂量等于或超过重度感染使用剂量时会影响雄性小鼠精子的正常功能。     

氟对小鼠睾丸间质组织中炎症细胞因子mRNA表达的影响

[目的]研究氟中毒时睾丸中炎症相关因子的表达情况,探讨其与自身免疫性睾丸炎的相同与不同点。[方法]试验将24只雄性小鼠随机平均分为3组,分别为对照组、NaF组、实验性自身免疫性睾丸炎(EAO)模型组,对照组与EAO组饮用去离子水,NaF组饮用含有100mg·L-1的NaF去离子水,50d后取材,HE染色观察睾丸组织结构的变化,通过qRT-PCR检测睾丸间质组织细胞中炎症相关细胞因子mRNA含量表达量的改变。[结果]试验表明NaF组与EAO组睾丸结构均有不同程度破坏,均出现了生精细胞脱落等情况,在炎症相关因子mRNA的表达情况上,与对照组相比,EAO组IL-6、IL-1β、TNF-α的表达量均显著升高,而IL-23的表达量显著下降,NaF组IL-6、IL-23的表达量显著升高,IL-1β与TNF-α无显著性。[结论]过量氟不仅对睾丸造成了明显的病理学损伤,而且影响了睾丸间质组织炎症因子mRNA的表达,与EAO模型具有一定相似性。     

水体中铝对雄性小鼠的遗传损伤作用

[目的]探讨氯化铝对雄性小鼠生殖细胞的遗传损伤作用。[方法]选用雄性昆明种小鼠为研究对象,研究不同浓度的氯化铝腹腔染毒对小鼠睾丸脏器系数、精子数目、存活率、活动率、畸形率及精母细胞微核率的影响。[结果]小鼠睾丸脏器系数、精子数量明显降低,小鼠精子存活率及活动能力也逐渐降低;精子畸形率和精母细胞的微核发生率也随之升高,各染毒组与对照组均有显著差异(P<0.01)。氯化铝可影响雄性小鼠的生长发育,干扰精子的发生和成熟,损伤小鼠生殖细胞的染色体。[结论]氯化铝对雄性小鼠的生殖细胞具有明显的遗传损伤作用。     

香烟烟雾对雄性小鼠生育能力的影响

为了研究香烟烟雾对雄性小鼠生育能力的影响,将40只C57BL/6J雄性小鼠随机分成烟雾处理组和正常对照组,将2组雄性小鼠分别与未经处理的母鼠一对一交配。统计观察亲本小鼠睾丸组织学改变、精子总数、活动精子比率,以及子代小鼠的平均产仔数、存活率等。结果发现,烟雾处理2周后,子代小鼠的平均产仔数比对照组的低26.03%,仔鼠存活率(吸烟组为87.96%,对照组为93.84%)低6%;精子总数(1.26×105个/mL)和活动精子比率(36%)均分别低于对照组(2.13×105个/mL)和(71%),二者间呈现显著性差异(P<0.001和0.05);组织切片HE染色结果显示:处理组小鼠睾丸组织的正常结构遭到破坏,变得松散,其中的精子数量减少,形态异常。结果表明,香烟烟雾可引起雄性小鼠睾丸组织生精功能障碍,出现精子减少、精子形态异常等病理变化,导致子代出生数和存活率下降。     

氟中毒对小鼠睾丸间质组织细胞中IL-17相关基因的影响

[目的]旨在研究氟中毒对小鼠睾丸间质组织细胞IL-17相关基因表达的影响。[方法]将24只健康的ICR雄性小鼠随机分成对照组,中氟组和高氟组3组,每组8只,对照组饮用去离子水,其余2组分别饮用含50mg·L-1和100mg·L-1 NaF的去离子水。染氟50d,取出附睾及输精管进行精子质量的检测,取出睾丸撕膜后通过I型胶原酶分离提取出睾丸间质组织细胞,采用qRT-PCR技术检测IL-17A,IL-17RA和IL-17RC基因表达水平。[结果]结果显示,与对照组相比,在中氟组和高氟组精子活力和活率显著降低(P0.05),在高氟组精子密度显著降低(P0.05),在中氟组和高氟组精子畸形率显著升高(P0.05);IL-17A,IL-17RA和IL-17RC的基因表达水平在高氟组中都显著升高(P0.05)。[结论]表明过量NaF摄入小鼠体内会增加睾丸间质组织细胞中IL-17相关基因的表达,产生睾丸炎,进而引起睾丸生殖毒性。     

干扰雄性小鼠睾丸Clock基因对胎鼠发育的影响及机制研究

[目的]研究干扰雄性小鼠睾丸Cloc k基因后,对小鼠胚胎着床及后期胎鼠发育的影响,并从甲基化的角度探讨引起胎鼠发育异常的原因.[方法]将成年雄性小鼠分为干扰组和对照组,分别于睾丸中注射干扰质粒和阴性质粒,与经过促排处理的雌鼠合笼,研究比较两组胚胎着床情况,观察两组胎鼠的外形及体重等指标的差异;观察胎鼠组织结构,比较两...     

不同品系成年小鼠乳腺干细胞差异分析

以干细胞常用的评定标准,对C57BL/6、Balb/c以及ICR 3个品系小鼠的乳腺形态及乳腺干细胞比例进行比较分析。结果显示,ICR小鼠乳腺形态与其他2个品系差异较大,且有炎症反应。3个品系小鼠乳腺干细胞形成3D能力具有显著差异。     

黄芪总黄酮对小鼠佐剂性关节炎的治疗作用

[目的]研究黄芪总黄酮(TFA)对小鼠佐剂性关节炎的影响。[方法]采用弗氏完全佐剂建立小鼠佐剂性关节炎模型,设立空白组、模型组、阳性组及黄芪总黄酮高、中、低剂量组,测定小鼠足趾肿胀度和脾脏指数,通过Griess法测定血清中NO的含量,ELISA法测定血清中IL-1β的含量。[结果]黄芪总黄酮能减轻佐剂关节炎小鼠足趾肿胀度,下调脾脏指数,抑制血清NO和IL-1β的分泌。[结论]该研究表明黄芪总黄酮对佐剂性关节炎小鼠起到很好的治疗作用,为临床上的应用提供了可靠的试验依据。     

DDK品系小鼠遗传特异性的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对DDK,C57BL/6,BALB/c,KM,PWK 5个品系的小鼠进行了遗传分析.选用130个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增.根据电泳结果,其中31个引物扩增出明显的多态性条带,共检测到345条扩增片段,其中多态性片段277条,占80.3%,反映了5个品系间的遗传变异.多态性统计分析表明,C57BL/6与BALB/c之间的遗传距离指教为0.013 29,遗传关系最近;DDK与KM,C57BL/6遗传距离指数相似分别为0.014 73,0.0147 6,遗传关系较近,与PWK遗传距离指数为0.016 86,遗传关系最远.结果显示DDK品系小鼠与其他实验室品系之间有遗传的相似性,也存在差异.同时也证明了RAPD技术可以作为分子标记,很好地检测实验室近交系小鼠间的亲缘关系及其遗传特异性.     

不同品系小鼠腹腔巨噬细胞对LPS的反应性初步比较研究

为初步探究不同品系小鼠腹腔巨噬细胞对LPS的反应性区别,通过对C57BL/6小鼠、BALB/C小鼠和昆明小鼠腹腔注射硫乙醇酸盐(Thioglycollate,TG)以诱导巨噬细胞聚集。4d后收集细胞,计数并培养。使用脂多糖(LPS)分别刺激3种细胞,测定并对比炎症因子的分泌情况。结果表明:腹腔注射TG后,C57BL/6小鼠诱导率最高;LPS刺激细胞后,C57BL/6小鼠的腹腔巨噬细胞分泌的TNF-α、IL-6、iNOS和COX-2的分泌量均较其他2种小鼠高。     

乌贼墨多糖对环磷酰胺介导小鼠睾丸氧化应激损伤的干预效应

[目的]探讨乌贼墨多糖对环磷酰胺致小鼠睾丸氧化应激损伤的保护作用.[方法]随机将70只成年雄性昆明小鼠分成7组：正常组、模型组、治疗组1、治疗组2、治疗组3、治疗组4和治疗组5,通过对小鼠腹腔注射环磷酰胺进行造模,灌胃乌贼墨多糖作为化疗保护剂,检测小鼠的体重、睾丸和附睾重量、睾丸指数和附睾指数、精子畸形率、睾丸中抗氧化指标,同时观察睾丸组织结构.[结果]乌贼墨多糖能提高小鼠体重和睾丸重量,降低精子畸形率,提高睾丸组织中抗氧化酶SOD和CAT活性,降低MDA含量,修复睾丸病理学损伤.乌贼墨多糖明显缓解环磷酰胺对睾丸的氧化损伤,其最佳灌胃剂量为80 mg/kg.[结论]乌贼墨多糖有可能作为临床上的化疗辅助药物.     

猪源马链球菌兽疫亚种类M蛋白原核表达及其小鼠免疫保护力分析

为了原核表达猪源马链球菌兽疫亚种去除信号肽的类M蛋白质,并分析该蛋白质对小鼠的免疫保护力,克隆了马链球菌兽疫亚种CY菌株去除信号肽的类M蛋白质基因Szp,并将Szp基因插入p ET28a表达载体,IPTG诱导,获得重组类M蛋白质,弗氏佐剂乳化重组类M蛋白质后,3次免疫小鼠,用同源菌株CY攻击。诱导获得分子量约5.8×104的重组蛋白质,免疫印迹结果表明该重组类M蛋白质能够被马链球菌兽疫亚种猪多抗识别。类M蛋白质免疫小鼠的存活率为60%,弗氏佐剂乳化灭活CY免疫小鼠的存活率为70%,PBS对照组小鼠攻毒后6 d内全部死亡。表达的类M蛋白质可以给予ICR小鼠部分的免疫保护力,保护效果略低于CY全菌灭活苗,提示可以对马链球菌兽疫亚种多种免疫保护性抗原进行联合,从而进一步提高对动物的免疫保护力。     

液态甲醛对雄性小鼠生殖系统的毒性作用研究

为探讨液态甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒性和致突变作用,选用雄性昆明种小鼠为研究对象,进行液态甲醛腹腔染毒,7 d后测定睾丸脏器系数、精子数目、精子形态及精子畸形率及精子微核率。结果表明:中、高剂量组(2.0、20.0 mg/kg)甲醛具有明显的生殖毒性,小鼠睾丸指数、精子数量明显降低,小鼠精子存活率、活动率都受到显著影响;中、高剂量组的精子畸形率、微核率与阴性对照组比较,有显著性差异。由此说明,液态甲醛对雄性小鼠的生殖细胞具有明显的毒性和致突变作用。     

中年C57BL/6和ICR小鼠感觉运动能力的改变

探讨中年C57BL/6和ICR小鼠感觉运动能力的改变及实验装置对结果的影响.结果表明在10 mm和14 mm直径钢质平衡杆上,中年C57BL/6小鼠的平衡时间缩短,且雌鼠和雄鼠在10 mm直径钢杆上均可显示年龄效应.中年C57BL/6小鼠在紧绳实验中的悬挂时间和转换分也减少,但仅转换分在雄鼠显示年龄效应;中年ICR鼠在6 mm和14 mm直径钢杆上的平衡时间延长,且雌鼠和雄鼠在2种钢杆上均可显示年龄效应,但紧绳任务的悬挂时间和转换分均无年龄和性别差异.这些结果提示中年小鼠有感觉运动能力改变,但改变模式因任务和品系而异,平衡木的大小和形状影响年龄效应检测的有效性.     

高脂肪饮食诱导糖尿病小鼠模型

[目的]探讨以高脂肪纯化饲料诱导的遗传背景和环境因素共同起作用的C57BL/6J小鼠用于糖尿病药物早期筛选的最短诱导周期.[方法]雄性4周龄C57BL/6J小鼠20只适应性喂养7d后随机分为2组,同时饲喂高脂肪饲料.葡萄糖耐受性试验（OGTT）中1组C57BL/6J小鼠口服生理盐水（对照组）,另1组口服磷酸西他列汀（阳性药组）.喂养期间对禁食后血糖（FBG）和体重（BW）进行连续监测,同时进行OGTT试验并监测血浆胰岛素（PINS）水平.[结果]高脂喂养1周后小鼠体重升高迅速,并表现为中心型肥胖.第4周FBG和PINS较前3周显著性升高,2周OGTT给糖15 min阳性药组血浆胰岛素水平较对照组有显著性升高.[结论]仅饲喂高脂饲料4周的C57BL/6J可用于糖尿病药物药效试验的筛选.该模型方法简单易行,周期短,稳定性好,与人类自然发病过程相似,是较为理想的降血糖药物筛选模型.     

C_(57)BL/6N、BALB/C近交系小鼠的染色体组型研究及y染色体的识别

本文采用骨髓细胞直接制片方法,并结合C分带技术,对C_(57)BL/6N和BALB/C近交系小鼠的染色体组型特征及Y染色体在染色体组中的位置进行了比较研究。结果表明:小鼠品系间组型无明显差异;C_(57)BL/6N的第19号染色体为该品系的标志染色体;Y染色体在两个不同品系中的相对位置不同。     

苗药铁筷子挥发油对大鼠佐剂性关节炎的作用及机制研究

[目的]观察苗药铁筷子挥发油对佐剂性关节炎大鼠的作用,并初步探讨其作用机制。[方法]设立正常对照组、模型对照组、阳性药物组和铁筷子挥发油高、中、低剂量组(生药量10.0、5.0和2.5 g/kg);除正常对照组外,其余各组于大鼠左后跖皮下注射弗氏完全佐剂建立佐剂性关节炎模型;各组于造模当天开始给药,连续给药21 d,观察铁筷子挥发油对佐剂性关节炎大鼠模型关节肿胀、免疫器官脏器系数以及病理形态的影响,采用放免法测定铁筷子挥发油对各组大鼠血清中白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响。[结果]与模型组比较,铁筷子挥发油对大鼠足肿胀有明显的抑制作用,对免疫器官没有明显影响;铁筷子挥发油还可明显降低佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1β以及TNF-α的含量。[结论]铁筷子挥发油对佐剂性关节炎大鼠具有一定治疗作用,其机制可能与减少细胞因子的生成有关。     

小鼠营养性肥胖模型的建立

[目的]建立与人类肥胖最为接近的高脂饲料所致单纯性肥胖模型,为肥胖理论研究奠定基础。[方法]选用ICR和KM 2个品系的小鼠,雌雄各半,按体重随机分为高脂饲料试验组和普通饲料对照组,测定小鼠体重L、ee’s指数、脂肪湿重、同视野脂肪细胞数量及血液指标。[结果]ICR雌性小鼠各项指标与对照组相比均有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。[结论]不同品系的小鼠对高脂饲料的要求不同,相同品系不同性别的小鼠也需要不同的高脂饲料诱导营养性肥胖模型。