小鼠不同生长阶段骨骼肌组织中Myf5的表达

肌源性因子5(Myf5)是转录因子基本螺旋-环-螺旋家族的一员,它作为肌原性因子,对肌细胞的分化具有重要作用,在肌肉分化或肌细胞生成中也具有关键作用。试验分别选取幼年、性成熟、体成熟和老年期4个发育阶段的健康小鼠,采用HE染色、免疫组织化学、荧光定量PCR等方法主要研究Myf5在小鼠不同生长时期骨骼肌中的表达情况。结果显示,小鼠骨骼肌细胞核及肌纤维的生长在不同发育时期明显不同,其中,幼年小鼠的细胞核多位于细胞中央且排列较密,肌纤维的横切面近似圆形,性成熟、体成熟、老年的小鼠发育指标依次降低;Myf5主要在细胞核中表达,幼年期表达量高,老年期表达量最低;Myf5 m RNA在小鼠的不同发育阶段均有表达,但在不同阶段的表达量存在差异,其中,老年阶段的表达量最高,幼年、性成熟、体成熟阶段小鼠骨骼肌中Myf5表达水平极显著低于老年小鼠。Myf5的表达量与小鼠的生长发育阶段具有一定的相关性。     

Myf5在不同生长阶段小鼠心肌中的定位与表达

Myf5是生肌调节因子MRFs家族的重要成员,在肌细胞的增殖和发育过程中发挥着重要的调控作用。通过对心肌组织进行HE染色和免疫组化试验,观察心肌纤维细胞核的大小和数量、肌纤维体积和肌纤维之间的间隙变化,了解心肌组织不同发育阶段的显微结构,对比各组的阳性着色部位和着色程度的变化,从而对Myf5因子在不同发育阶段小鼠心肌组织的表达进行初步定性、定量和定位分析。并通过实时荧光定量PCR技术对小鼠的不同发育阶段中的心肌组织的Myf5基因表达做出准确的定量分析。结果表明,在小鼠心肌组织发育的不同阶段,Myf5均显示阳性,幼年鼠表达量最高;Myf5 m RNA表达量幼年鼠最高,性成熟鼠最低,呈现先降低后缓慢上升的趋势,并且幼年阶段与性成熟、体成熟阶段呈现极显著差异,与老年阶段无明显差异。研究表明,Myf5表达与小鼠心肌组织发育具有相关性,可进一步揭示Myf5在心脏发育的病理状况差异性和调控机制。     

不同发育时期小鼠心肌MyoG基因的表达分析

肌细胞生成素MyoG基因一直是肌肉研究中的一个热点基因,其在肌肉中的表达水平对该肌肉的生长发育至关重要。试验通过HE染色、免疫组织化学和q PCR技术研究了不同发育阶段小鼠心肌中MyoG的表达差异。结果表明,MyoG在幼年、性成熟、体成熟和老年4个时期的小鼠心肌胞质中均有表达,且其随着年龄增长逐渐下降,尤其在老年鼠中表达显著降低。结果提示,MyoG基因在心脏中的表达与心肌生长发育密切相关。     

鹌鹑MyoD基因多态性与生长性状的相关性分析

[目的]研究MyoD基因与鹌鹑生长性状的相关性。[方法]以朝鲜鹌鹑为研究对象，应用HRM技术检测群体中MyoD基因的多态性，测定其生长性状，并进行关联分析；qPCR检测3种基因型胚胎肌肉组织中MyoD基因的表达量。[结果]MyoD基因在群体中存在AA、Aa和aa 3种基因型，AA和Aa基因型个体的胸围显著高于aa基因型(P<0.05)。胚胎发育的7～15 d均能检测到MyoD基因表达，MyoD基因的表达量从11 d开始升高，15 d达到峰值。AA和Aa基因型MyoD基因表达量提高速度高于aa基因型。[结论]MyoD基因A等位基因为朝鲜鹌鹑胚胎生长发育的优势基因，可用于生长发育快的个体基因型育种选择。     

Myogenin在不同发育阶段小鼠骨骼肌中的表达差异

Myogenin是骨骼肌生长发育过程中的重要调控因子之一。采用H.E.染色法观察小鼠骨骼肌组织不同发育阶段的形态特征,通过免疫组织化学法观察在不同发育阶段因子是否表达,并通过实时荧光定量PCR技术对Myogenin在不同发育时期的表达量进行分析,旨在研究不同发育阶段小鼠骨骼肌中Myogenin的表达差异。结果表明,Myogenin在不同发育阶段小鼠骨骼肌的表达位置均为细胞质,且在4个阶段的表达量间存在显著差异,幼年时期表达量最高。     

Trx及其抑制因子TcNIP基因在发育不同阶段牛体外胚胎中的转录与表达

[目的]研究Trx及其抑制因子TcNIP基因在牛卵母细胞及不同发育阶段体外受精胚胎中的表达变化.[方法]采用实时荧光定量PCR方法,检测牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞、受精卵、2-4细胞胚胎、8-16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚中Trx1、Trx2和TcNIP基因mRNA的相对表达量.[结果]Trx1和Trx2基因在GV期卵母细胞和不同发育阶段的胚胎均有不同程度的表达.GV期卵母细胞Trx1 mRNA表达量最高,随着卵母细胞的成熟及受精后胚胎的发育逐渐降低,囊胚期胚胎表达量又急速升高.Trx2基因在受精前的卵母细胞中高表达,受精后表达量逐渐下降,囊胚期胚胎Trx2 mRNA的表达量最低.内源性抑制因子TcNIP基因在2-4细胞胚胎阶段之前都是高表达,从8-16细胞胚胎阶段表达下降,在囊胚期胚胎表达量最低.[结论]牛卵母细胞及附植前胚胎自身的抗氧化能力在发育的不同阶段可能有所不同,而Trx1、Trx2及TcNIP基因在卵母细胞和不同发育阶段胚胎中的表达模式可能起到了重要的调控作用.     

黑木耳多糖对体外高糖培养乳鼠心肌细胞的保护作用

[目的]探讨黑木耳多糖(Polysaccharides From Auricularia Auricula,PFAA)对体外高糖培养乳鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其机制。[方法]将Wistar乳鼠原代细胞随机分为4组,即空白对照组;高糖组;0.4 mg/mL PFAA组;0.8 mg/mL PFAA组。用荧光显微镜测定各组细胞凋亡情况,RT-PCR法检测bcl-2、caspase-3基因表达量的变化。[结果]经PFAA干预后,凋亡细胞明显减少,bcl-2表达增加,caspase-3表达减少。[结论]PFAA抑制体外高糖培养的乳鼠心肌的凋亡,其机制可能与抑制caspase-3、激活bcl-2表达有关。     

福建黄兔肌纤维性状及Myh6基因表达水平分析

选取我国地方品种福建黄兔为研究对象,利用冰冻切片技术对不同发育阶段福建黄兔背肌和腿肌的肌纤维性状进行研究,通过荧光定量聚合酶链式反应技术分析在肌肉发育过程中起重要作用的Myh6基因在福建黄兔不同发育阶段表达水平的差异,并与肌纤维性状进行相关性分析。结果显示:2、4、6、8、10和12周龄福建黄兔的白肌纤维密度均显著大于红肌纤维和中间型肌纤维,白肌纤维的面积显著高于红肌纤维,长径和短径的大小排列为白肌纤维中间型肌纤维红肌纤维,但差异无统计学意义;在6周龄前,背肌和腿肌中各类肌纤维长径、短径和面积呈显著增大的趋势,而6周龄后增大趋势逐渐变缓;Myh6基因在公母兔背部和腿部的表达均呈先上升后下降的趋势,其中母兔在4周龄表达量最高,公兔在6周龄表达量最高;Myh6基因的表达量与肌纤维面积、长径和短径的变化一致。表明Myh6基因与肌纤维类型和肌纤维的生长发育密切相关。     

相对定量法分析小鼠CRBN基因表达

[目的]研究CRBN基因与常染色体隐性遗传非综合征轻型精神发育迟滞（ARNSMR）的关系,探讨小鼠CRBN基因mRNA在不同组织中的表达情况。[方法]应用RT-PCR和Real-time PCR技术,研究了小鼠CRBN基因在肺、肝、心脏、肾和大脑中的表达情况。[结果]小鼠CRBN基因mRNA在肺、大脑中表达量较高,在心脏中表达量最低。[结论]小鼠CRBN基因广泛表达于不同组织,除了与学习、记忆功能相关外,可能还有其他功能。     

基因KLF4在人源Her2高表达转基因小鼠中的表达研究（英文）

[目的]研究人源Her2高表达转基因小鼠的生物学特性,并检测基因KLF4的表达变化。[方法]在以往构建的Her2高表达转基因小鼠稳定遗传体系基础上,传代扩大种群。用PCR方法鉴定子代基因型,绘制体重-周龄曲线。RT-PCR方法检测基因KLF4(FL)及其分型KLF4α的表达。[结果]Her2高表达乳腺癌阳性小鼠体内基因在乳腺癌发生过程中总表达量略微下降;基因的表达量与正常小鼠相比明显增加;然而在乳腺癌阳性小鼠体内KLF4总基因的表达量却呈下降趋势。[结论]该研究能填补KLF4在动物模型水平上研究的空白,使KLF4与乳腺癌发生发展关系的研究更具完整性。     

牦牛不同发育阶段睾丸中KDM2A的表达

旨在研究KDM2A在牦牛睾丸发育和精子发生中的作用,为提高牦牛繁殖性能提供理论依据。提取牦牛胎儿时期(5～6月龄)、幼年时期(1～2岁)、性成熟时期(3～4岁)睾丸的总RNA,通过实时荧光定量PCR和免疫组化检测KDM2A在牦牛睾丸中的表达情况。结果显示:3个时期牦牛睾丸中均有KDM2A基因表达,且表达量随年龄增长呈递增趋势,性成熟时期睾丸中KDM2A mRNA与蛋白质的表达量均显著高于胎儿时期和幼年时期;胎儿时期仅在精原干细胞及支持细胞中表达,幼年和性成熟时期睾丸中精原细胞、支持细胞、初级精母细胞、圆形精子及精子形成期均呈阳性。表明KDM2A在牦牛不同发育阶段的睾丸中表达,在牦牛睾丸发育及精子生成中发挥重要作用。     

人α干扰素转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人α干扰素（interferon-α,IFN-α）转基因小鼠,为研究IFN-α在抗病毒中的作用提供模型动物。[方法]将人IFN-α基因插入CMV启动子下游,构建转基因表达载体,通过原核显微注射法建立IFN-α转基因小鼠。[结果]通过特异性引物PCR法和South-ern杂交法检测出4只阳性转基因小鼠。分离4个转基因鼠系F1代PCR阳性小鼠血液中的淋巴细胞进行RT-PCR检测,其中3个鼠系为阳性。收集阳性小鼠血清,用ELISA方法和微量板染色测定法检测出3个转基因鼠系均有IFN-α表达。[结论]成功建立了CMV启动子启动的表达人IFN-α基因转基因小鼠,为研究干扰素抗病毒机制及对其他动物进行抗病毒感染基因工程育种研究奠定了基础。     

IL-11对小鼠骨骼肌发育和能量代谢相关基因mRNA表达的影响

利用IL-11激活Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活子3(STAT3)信号通路,研究该通路对骨骼肌发育和能量代谢相关基因mRNA表达水平的影响。对雄性健康昆明小白鼠用IL-11连续皮下注射15 d,定期测量体质量和体温,小鼠处死后取腿肌提取总RNA,利用RT-PCR检测JAK2/STAT3信号通路关键因子JAK2和STAT3、骨骼肌发育相关基因成肌分化因子(MyoD)和生肌决定因子(Myf5)及能量代谢相关基因肝X受体(LXRα)和解偶联蛋白3(UCP3)mRNA表达。结果显示:处理组小鼠的体质量和腿部肌肉质量显著高于空白对照组(P0.05);两组小鼠体温均维持在正常浮动范围内。与空白对照组相比,处理组小鼠JAK2和STAT3 mRNA表达量上升(P0.05);骨骼肌发育相关基因MyoD和Myf5 mRNA表达量均上升(P0.05);能量代谢相关基因LXRαmRNA表达量不变(P0.05),UCP3 mRNA表达量上升(P0.05)。表明IL-11激活JAK2/STAT3信号通路后可通过提高骨骼肌发育和能量代谢相关基因的mR-NA表达而调节骨骼肌发育和能量代谢。     

肉牛肌生成抑制素成熟蛋白编码序列的克隆与原核表达

[目的]原核表达肉牛肌生成抑制素成熟蛋白编码序列基因并进行功能验证,为后期的小鼠接种实验打下基础。[方法]采用RT-PCR方法扩增肉牛MSTN成熟蛋白编码序列基因,该扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pET28a（＋）中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blot检测重组目的蛋白的表达结果。[结果]经Anti-His-Tag鉴定正确。[结论]肉牛MSTN成熟蛋白编码序列基因在原核表达系统中得到正确表达。     

GALNTL5基因在不同月龄湖羊附睾中的表达模式及其miRNA的预测

[目的]本文旨在探究不同发育阶段湖羊附睾(头、体、尾)中GALNTL5(polypeptide N-acetylgalactosaminyltransferase-like protein 5)的表达规律及其microRNA(miRNA)预测。[方法]选取3、9、24月龄(M)雄性湖羊各5只,屠宰后采集附睾(头、体、尾)组织。采用RT-qPCR和Western blot技术检测不同发育阶段湖羊附睾中GALNTL5 mRNA和蛋白表达水平;用免疫组化技术对其进行定位分析;用RNAhybrid和miRanda 2种软件分别预测GALNTL5对应的miRNA并取交集,同时检测候选miRNA在附睾尾中的表达规律。[结果]GALNTL5 mRNA和蛋白在附睾体、尾中表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05);GALNTL5 mRNA在附睾头中表现为24 M显著高于3 M和9 M(P0.05),但3 M与9 M之间差异不显著(P0.05)。除了GALNTL5蛋白在9 M与24 M附睾尾中差异显著外,其余均差异不显著(P0.05);GALNTL5蛋白在附睾头、体中的表达规律一致;GALNTL5定位于附睾主细胞、基细胞及精子中。预测获得11个候选miRNA,按评分高低进行排序,选取miR-487a-5p、miR-485-5p、miR-329b-5p和miR-27a这4个miRNA进行验证,发现miR-487a-5p表达水平表现为性成熟后(9 M和24 M)显著高于性成熟前(3 M)(P0.05),而miR-485-5p和miR-27a呈现相反趋势。[结论]GALNTL5在精子成熟过程中扮演着重要的角色;miR-485-5p和miR-27a可能与GALNTL5存在靶向关系。     

朗德鹅体组织中MTP基因的发育表达及其在填饲后的变化研究

[目的]研究MTP基因在朗德鹅体组织中的表达量及填饲后的变化。[方法]采用RT-PCR方法,以朗德鹅为研究材料,研究了1、10、13、14和16周龄朗德鹅肝脏、小肠、脑、胸肌、腹肌、腹脂、皮脂和心肌组织以及填饲后肝脏与小肠组织中MTP基因的表达量。[结果]1周龄,MTP基因仅在朗德鹅小肠组织中表达;10周龄,除在肝脏和小肠组织中外,首次发现MTP基因在朗德鹅脑组织中也有表达;MTP基因在肝脏和小肠中的表达量随周龄的增加呈逐步上升的趋势(P<0.05); 1～13周龄,MTP基因在朗德鹅小肠中的表达量高于肝脏;14～16周龄,MTP基因在朗德鹅小肠中的表达量低于肝脏;填饲后MTP基因在朗德鹅肝组织中的表达量降低,而MTP基因在小肠组织中的表达量升高。[结论]MTP基因在朗德鹅脂肪沉积和转运过程中具有极重要的调控作用。     

GPx5基因在绵羊附睾上的时空表达特性

【目的】研究谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)基因在绵羊附睾及附睾不同发育时期的表达特性。【方法】采用荧光定量PCR技术、免疫印迹技术及免疫荧光等方法,分别检测GPx5基因在绵羊附睾不同发育时期、不同部位上mRNA和蛋白的表达及分布情况。【结果】荧光定量PCR结果表明,青年羊附睾GPx5基因在头部的mRNA表达量显著高于体部和尾部(P0.05);青年羊附睾头部GPx5基因mRNA表达量显著高于羔羊和老年羊附睾头部(P0.05)。免疫印迹结果表明,羔羊附睾无GPx5蛋白表达;青年羊附睾各部位均有表达,而老年羊附睾头部和体部有表达、尾部无表达。灰度分析结果表明,青年羊附睾头部GPx5相对表达量显著高于其他部位(P0.05),且青年羊附睾头部GPx5蛋白相对表达量显著高于老年羊附睾头部(P0.05)。免疫荧光结果表明,在羔羊附睾未检测到GPx5蛋白表达信号;青年羊附睾各部位均有荧光信号表达,且附睾头部和体部荧光强度明显高于尾部,并在附睾管液体中也发现有荧光信号;老年羊附睾头部和体部有荧光信号,荧光遍布于附睾管假复层上皮细胞的细胞核及细胞质中。【结论】GPx5基因mRNA在绵羊附睾不同发育时期均有表达,但在不同部位具有表达差异性;GPx5蛋白于附睾管假复层上皮细胞表达,且在性成熟前羔羊附睾及老年羊附睾尾部未表达,因此推测GPx5蛋白的表达与绵羊性发育时期有密切关联。     

猪瘟病毒E2基因疫苗在小鼠肌肉中的分布及表达

以昆明小白鼠为实验动物,研究了猪瘟病毒（Ｈｏｇｃｈｏｌｅｒａｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ）Ｅ２囊膜糖蛋白（Ｅ２ｅｎｖｅｌｏｐｅｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ,Ｅ２）基因疫苗（ＨＣＶＥ２基因疫苗）在小鼠肌肉中的分布及表达,ＨＣＶＥ２基因疫苗ｐＣＤＳＴ接种小鼠胫前肌后,原位杂交检测结果表明,肌纤维间和肌浆中的疫苗质粒被迅速降解,细胞核内的疫苗质粒可免受降解而保存较长时间;ＨＣＶＥ２基因已被转录为ｍＲＮＡ,免疫后１１ｄ左右转录达到高峰。免疫组化法检测结果表明,表达的Ｅ２抗原主要分布于肌纤维膜上,少量分布于肌纤维间,免疫后１３ｄ左右肌肉中Ｅ２抗原量最多。     

小鼠心肌细胞的体外培养

对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明体外培养的小鼠心肌细胞具有与在体心肌细胞相似的功能。     

Trx及其抑制因子TXNIP基因在发育不同阶段牛体外胚胎中的转录与表达

【目的】研究Trx及其抑制因子TXNIP基因在牛卵母细胞及不同发育阶段体外受精胚胎中的表达变化.【方法】采用实时荧光定量PCR方法,检测牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞、受精卵、2-4细胞胚胎、8-16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚中Trx1、Trx2和TXNIP基因mRNA的相对表达量.【结果】Trx1和Trx2基因在GV期卵母细胞和不同发育阶段的胚胎均有不同程度的表达.GV期卵母细胞Trx1mRNA表达量最高,随着卵母细胞的成熟及受精后胚胎的发育逐渐降低,囊胚期胚胎表达量又急速升高.Trx2基因在受精前的卵母细胞中高表达,受精后表达量逐渐下降,囊胚期胚胎Trx2 mRNA的表达量最低.内源性抑制因子TXNIP基因在2-4细胞胚胎阶段之前都是高表达,从8-16细胞胚胎阶段表达下降,在囊胚期胚胎表达量最低.【结论】牛卵母细胞及附植前胚胎自身的抗氧化能力在发育的不同阶段可能有所不同,而Trx1、Trx2及TXNIP基因在卵母细胞和不同发育阶段胚胎中的表达模式可能起到了重要的调控作用.