鸡脂肪酸脱氢酶基因多态性及其与脂肪酸含量的关联分析

利用PCR-SSCP技术检测安卡鸡、文昌鸡和如皋鸡△9-脂肪酸脱氢酶基因的单核苷酸多态性(SNP),并对不同基因型与胸肌脂肪酸含量进行关联分析.结果表明:在外显子6没有检测到SNP突变,在外显子2检测到T101C和C197T 2+SNP突变,共3种基因型,其中A为优势等位基因,其频率在3个鸡种中均大于0.81,该位点在各品种中均处于Haray-Weinberg平衡(P>0.05).脂肪酸含量的最小二乘检验表明,AB基因型个体的多不饱和脂肪酸(PUFA)和必需脂肪酸(EFA)含量显著高于AA和BB基因型个体(P<0.05),提示AB型可能对脂肪酸含量有重要的影响.     

武定鸡和大围山微型鸡脂肪酸含量及FADSFADS2基因表达差异研究

脂肪酸是影响家鸡肉品质的重要风味物质,Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(FADS2)是不饱和脂肪酸生物合成过程中的关键酶。研究以武定鸡和大围山微型鸡为研究对象,检测肌肉组织中脂肪酸含量及FADS2基因表达量,比较不同鸡种脂肪酸含量及FADS2基因表达差异。结果显示,整体上,武定鸡腿肌中饱和脂肪酸(SFA)、单不饱和脂肪酸(MUFA)、不饱和脂肪酸(USFA)、多不饱和脂肪酸(PUFA)、必需脂肪酸(EFA)及总脂肪酸含量和FADS2 m RNA表达量均显著高于大围山微型鸡,且在部位和周龄上存在显著差异。研究表明,武定鸡风味比大围山微型鸡优良,FADS2基因是影响家鸡肉品质的重要候选基因。     

ELOVL6基因研究现状

ELOVL6基因是超长链脂肪酸延伸酶(ELOVLs)家族成员之一,可以催化饱和和单不饱和脂肪酸的延伸,主要参与脂肪酸延伸和脂酰CoA的生物合成。目前对ELOVL6基因的研究主要集中在脂肪酸代谢、氧化应激、炎症反应等多种代谢性疾病方面,其在抑制某些肿瘤细胞中也发挥着重要的作用。ELOVL6作为牛的重要的脂肪酸代谢调控基因,国内外的研究相对较少,文章对国内外关于该基因的结构、表达情况和生理功能以及牛ELOVL6基因的研究进展进行了较为详细的综述。     

FADS2基因在奶牛乳腺细胞中的过表达和干扰研究

为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量的影响。针对FADS2基因的CDS序列设计siRNA和过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP,转染奶牛乳腺细胞检测FADS2基因过表达和干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响及细胞中甘油三酯含量的变化。结果显示,试验成功获得过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP和干扰片段,转染细胞后具有良好的过表达和干扰效果。FADS2基因过表达后,1-酰基甘油磷酸酰基转移酶(AGPAT1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、3-磷酸甘油转移酶(GPAM)、脂肪酸延长链5(ELOVL5)、乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)、脂肪酸脱氢酶1(FADS1)、二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因显著下调(P<0.05),脂滴蛋白2(PLIN2)基因极显著上调(P<0.01)。FADS2基因干扰过后可引起AGPAT1、GPAM、ELOVL5、ACAA1、PLIN2和FADS1基因显著上调(P<0.05),脂肪酸合成胰岛素诱导基因1(INSIG1)极显著上调(P<0.01),DGAT1和PPARα基因显著下调(P<0.05)。甘油三酯检测结果显示,FADS2基因过表达和干扰均可降低奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。综上所述,在奶牛乳腺上皮细胞中,FADS2基因能调控脂质合成相关基因的表达,对乳腺脂质合成具有调控作用。     

牛科家养动物硬脂酰辅酶A脱氢酶1基因的研究进展

硬脂酰辅酶A脱氢酶1(stearoyl-CoA desaturase-1,SCD1)是哺乳动物脂肪细胞中饱和脂肪酸转换为单一不饱和脂肪酸的关键酶,对动物机体及动物产品中脂肪酸的组成和含量有重要的影响。本文对普通牛、水牛、山羊和绵羊等牛科常见家养动物的SCD1基因的结构与功能、变异类型及其与经济性状关联的研究进展进行了综述,并对该基因的未来研究进行了展望。     

FADS2基因在奶牛乳腺细胞中的过表达和干扰研究

为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量的影响。针对FADS2基因的CDS序列设计siRNA和过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP,转染奶牛乳腺细胞检测FADS2基因过表达和干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响及细胞中甘油三酯含量的变化。结果显示,试验成功获得过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP和干扰片段,转染细胞后具有良好的过表达和干扰效果。FADS2基因过表达后,1-酰基甘油磷酸酰基转移酶(AGPAT1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、3-磷酸甘油转移酶(GPAM)、脂肪酸延长链5(ELOVL5)、乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)、脂肪酸脱氢酶1(FADS1)、二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因显著下调(P0.05),脂滴蛋白2(PLIN2)基因极显著上调(P0.01)。FADS2基因干扰过后可引起AGPAT1、GPAM、ELOVL5、ACAA1、PLIN2和FADS1基因显著上调(P0.05),脂肪酸合成胰岛素诱导基因1(INSIG1)极显著上调(P0.01),DGAT1和PPARα基因显著下调(P0.05)。甘油三酯检测结果显示,FADS2基因过表达和干扰均可降低奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。综上所述,在奶牛乳腺上皮细胞中,FADS2基因能调控脂质合成相关基因的表达,对乳腺脂质合成具有调控作用。     

牦牛和雄性不育犏牛睾丸FABP5和FABP9基因mRNA水平及能量代谢相关酶活力的比较

本研究旨在测定牦牛表皮细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP5)和睾丸型脂肪酸结合蛋白(FABP9)基因序列,比较其在牦牛和雄性不育犏牛睾丸中的表达,并结合睾丸中部分能量代谢相关酶的活力分析,以探索这两个基因及能量代谢与犏牛雄性不育之间的联系。试验从牦牛睾丸中提取总RNA,采用PCR方法获得了牦牛FABP5和FABP9基因的cDNA序列,编码区长度分别为408和399bp,与普通牛相比分别有1个和6个碱基差异,后者导致FABP9基因推导的氨基酸序列存在5个氨基酸差异。实时荧光定量PCR分析显示,FABP5基因在犏牛睾丸中的表达量极显著大于牦牛,而FABP9基因表达量差异不显著。犏牛睾丸中异柠檬酸脱氢酶活力极显著高于牦牛(P0.01),而β-羟脂酰CoA脱氢酶和乳酸脱氢酶活力与牦牛接近。犏牛睾丸中FABP5基因表达上调以及参与三羧酸循环的柠檬酸脱氢酶活力提高,可能提示雄性不育犏牛睾丸组织在脂肪酸氧化供能水平上高于成年牦牛。     

鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定

为初步鉴定鸡补体受体2（ChCR2）基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1 113 bp的ChCR2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温（16 ℃）诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512 000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。     

禽致病性大肠杆菌CE129 Ⅵ型分泌系统主要亚单位基因hcp1、hcp2缺失株的构建与验证

为获得禽致病性大肠杆菌(APEC)CE129 Ⅵ型的hcp1、hcp2基因缺失株,本研究利用Red同源重组系统对APEC野生株CE129的Ⅵ型分泌系统(T6SS)hcp1和hcp2基因进行敲除,获得hcp1、hcp2基因单缺失株CE129△hcp1、CE129△hcp2和双缺失株CE129△hcp1△hcp2。将hcp1、hcp2基因分别克隆到表达载体pBR322和pACYC184中,构建相应的基因回补株CE129△hcp1/phcp1、CE129△hcp2/phcp2和CE129△hcp1△hcp22/phcp1phcp2。通过PCR特异性检测和基因测序显示,上述突变株与回补株均成功构建,且均能够稳定遗传。上述基因缺失株和回补株的成功构建,有助于深入了解APEC CE129菌株T6SS的作用机制,为进一步研究APEC的致病机理及其防控奠定了基础。     

鸡补体受体2基因克隆、蛋白表达纯化及其多克隆抗体的制备和鉴定

为初步鉴定鸡补体受体2(ChCR2)基因,本试验设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增ChCR2基因。利用同源臂连接的方法构建去掉跨膜区的ChCR2-△TM基因的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM,将两个原核质粒转入大肠杆菌表达系统中表达GST-ChCR2-△TM和His-ChCR2-△TM蛋白。将纯化后的GST-ChCR2-△TM蛋白免疫BALB/c小鼠制备血清多克隆抗体,以His-ChCR2-△TM蛋白为包被原,ELISA检测血清多克隆抗体效价。利用间接免疫荧光试验和Western blotting对抗原抗体的特异结合性进行鉴定。结果显示,扩增到了一条大小为1 113 bp的ChCR2基因条带。成功构建了去掉跨膜区的原核表达载体pGEX-6P-1-ChCR2-△TM、pET-32a-ChCR2-△TM和真核表达载体pCMV-HA-ChCR2-△TM。诱导表达的GST-ChCR2-△TM蛋白在低温(16℃)诱导条件下可溶,而His-ChCR2-△TM蛋白以包涵体的形式存在。经ELISA测定,GST-ChCR2-△TM蛋白免疫的BALB/c小鼠血清效价为1∶512 000。间接免疫荧光试验和Western blotting结果显示,制备的抗GST-ChCR2-△TM蛋白血清多克隆抗体可与ChCR2蛋白发生特异性结合。本研究结果为ChCR2基因的进一步鉴定及鸡乃至禽类的相关免疫学研究提供了参考依据。     

散放饲养对猪脂肪酸组成和脂质氧化的影响

作者研究了散放饲养 (可自由接触牧场 )、RN基因型和性别对猪肉品质特征 ,包括肌肉内脂肪酸组成 ,脂质氧化水平的影响。将 6 0头汉普夏杂交猪散放饲养 2个月 ,使其可自由接触到青绿饲料。而另外 6 0头猪在整个饲养期舍饲于 12 0 m2 的大圈舍内。从这 12 0头猪中选取 4 4头进行肉品质分析。本试验结果表明 ,RN基因型对肉品质基本技术指标影响最大 ,而饲养条件和性别影响较小。与舍饲相比 ,散放饲养提高了肌间脂肪中多不饱和脂肪酸 ( P =0 .0 2 6 )和VE( P=0 .0 30 )的水平。性别和 RN基因型对脂肪酸组成也有一定影响 :与去势公猪相比 ,母猪不饱和脂肪酸含量较高( P=0 .0 0 3) ,而饱和脂肪酸水平较低 ( P=0 .0 11)。携带 RN基因猪的ω- 3脂肪酸 ( P=0 .0 4 7)和 C2 2 :5 ( P=0 .0 12 )含量比非携带者高。将屠宰后的猪肉在 - 2 0℃条件下贮存 3个月 ,研究结果表明 ,瘦肉率高的猪 ,如携带 RN-基因的母猪或散放饲养的猪 ,脂质氧化产物丙二醛的水平高。     

固始鸡胸肌脂肪酸组成特征及其关键调控基因鉴定

为揭示固始鸡胸肌脂肪酸组成特征及其关键调控基因，试验采用气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）技术分析了14、22和30周龄固始鸡胸肌组织的脂肪酸组成，通过权重基因共表达网络分析鉴定了主要脂肪酸含量相关的核心基因。结果显示：三个发育阶段胸肌组织中均检测到49种脂肪酸，且多数脂肪酸含量在不同发育阶段间差异不显著（P>0.05）；胸肌组织中优势脂肪酸为C16∶0、C18∶0、C18∶1N12、C18∶1N9C、C20∶4N6、C18∶1N7、C18∶2N6和C14∶1T，含量占总脂肪酸含量的86%以上。另外，共鉴定到blue、brown、purple、lightyellow、grey60和red共6个特异性转录模块，从中筛选到104个与C14∶0、C16∶0、C17∶0、C18∶1N12、C18∶2N6、C18∶3N6、C20∶1、C20∶2和C20∶3N6等脂肪酸含量相关的核心基因，功能涉及脂肪酸代谢相关的许多生物学过程和信号通路。结果表明，固始鸡胸肌脂肪酸含量在不同生长时期存在动态变化且为微效多基因共同调控的复杂数量性状。     

不同羊毛纤维直径细毛羊MYL6基因克隆及差异表达研究

试验以苏博美利奴羊为研究对象,探讨肌球蛋白轻链6(MYL6)基因在不同羊毛纤维直径的苏博美利奴羊中的表达模式。通过克隆肌球蛋白轻链6(MYL6)基因,结合生物信息学方法对其进行遗传进化和理化性质分析,且预测其二级蛋白结构,又通过RT-PCR相对定量方法以2~(-△△ct)值检测MYL6基因在苏博美利奴羊上的表达规律。结果表明:苏博美利奴羊MYL6基因大小为152036915 bp,MYL6基因的CDS全长序列为696 bp,共编码了105个氨基酸,与绵羊、山羊、牛、猪、老鼠、兔子、鸡、狗和斑马鱼的CDS同源分别为96%、95%、40%、40%、40%、40%、0%、60%、0%。分别在1、220~336、415~864 bp位点上有3个开放式阅读框(ORF)。遗传理化性质研究显示MYL6蛋白含有1个信号肽,在苏氨酸上有5个磷酸化位点、6个N-糖基化位点和3个O-糖基化位点,可能是一种非分泌性蛋白;MYL6蛋白的二级结构以无规则卷曲为主,β-折叠区域占-2.00%;扭曲度占-0.16%;等电荷在-1.60~0.05。研究结果表明,苏博美利奴羊MYL6基因在超细型细毛羊皮肤组织表达量显著高于细型细毛羊的表达量(P0.01,差异倍数为2.048)。本研究将为开展肌球蛋白轻链基因在细毛羊皮肤转录水平上的研究提供数据理论基础。     

白色念珠菌缺失株△ptc2/△pph3的表型试验

本试验利用野生型白色念珠菌RM1000菌株为对照,对实验室提供的△ptc2/△pph3双基因缺失株的表型进行了初步研究。结果显示,与野生型相比,△ptc2/△p ph3双基因缺失株生长缓慢,对数生长期延迟,对SDS敏感。试验结果为深入研究PTC2和PPH3基因的功能奠定了基础。     

哺乳动物细胞内源产物n-3和n-6脂肪酸

多不饱和脂肪酸(PUFA)是哺乳动物日粮的重要组成成分,众多研究结果证实,n-3 PUFA在人类的生长发育和心脑血管疾病患者的健康中发挥有益的作用。线虫是少数几种能产生亚油酸(LA,18∶2n-6)和-亚麻酸(ALA,18∶3n-3)2种必需脂肪酸的动物之一。这些必需PUFA是由单不饱和脂肪酸(MUFA)在脂肪酸去饱和酶作用下连续去饱和转化而成。将线虫△12和n-3脂肪酸去饱和酶的cDNA编码序列分别放置在真核启动子控制的后面,同时通过腺病毒转导转入到HC11鼠的乳腺上皮细胞。结果发现,来自于转导细胞的磷脂同对照组相比,显著降低了MUFA与PUFA、n-6与n-3脂肪酸比率,同时MUFA和花生四烯酸(20∶4n-6)含量显著下降,但亚油酸(LA)、-亚麻酸(ALA)和二十碳五烯酸(EPA,20∶5n-3)必需脂肪酸含量增加;此外,转导细胞甘油三酯的脂肪酸组成同对照组相似,很少受到影响。这些结果表明了线虫脂肪酸去饱和酶在哺乳动物细胞内的功能。这些脂肪酸去饱和酶如果能在反刍动物体内表达,或许可以弥补瘤胃微生物氢化作用对反刍动物产品脂肪酸组成的影响,有望发展成为新型的、来自陆地的n-3多不饱和脂肪酸来源。     

脂肪酸结合蛋白生物学特性及对脂肪代谢调控的研究进展

脂肪酸结合蛋白是一族小分子蛋白质,对长链脂肪酸有很高的亲和力,能把脂肪酸从细胞膜转运到氧化和合成的部位,在长链脂肪酸的代谢中发挥着重要的作用。文中就脂肪酸结合蛋白的结构、功能及其对脂肪酸代谢调节以及脂肪酸结合蛋白基因方面的研究进行了综述,并从分子水平阐述了猪脂肪酸结合蛋白基因表达对肉品质的影响。     

日粮蛋白水平对北京鸭生产性能和脂肪代谢的影响

试验研究了日粮蛋白质水平对生长肉鸭生产性能及脂肪代谢的影响,重点考察了0～28日龄北京鸭生长性能指标和相关的血液生化指标,另外还测定了肉鸭肝脏脂肪合成酶类(苹果酸脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)的指标,试验的目的是探讨不同蛋白质水平对肉鸭生产性能和脂肪酸合成酶类(特别葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性值)的影响。试验结果表明:①从尿素氮和白蛋白及总蛋白总的分析来看,蛋白质水平高低可以影响肉鸭蛋白质的沉积,对于北京鸭后期生长14%的低蛋白水平即可满足其生长。②不同蛋白质水平对肉鸭苹果酸酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的活性影响不显著(P<0.05),但是随着日龄的增加,苹果酸酶活性值出现增加的趋势。     

大肠杆菌FliC基因敲除后对大肠杆菌生物膜形成的影响

利用无疤痕基因敲除方法,构建大肠杆菌FliC基因敲除突变株。基因重组PCR结果显示:在重组转化体中FliC基因完全被卡那抗性基因和CcdB替代,获得Ⅰ型突变株(△1FliC);同时利用基因突变技术,对FliC基因起始密码子进行点突变,将ATG突变为AAA,再次进行基因重组后获得Ⅱ型FliC基因沉默菌株(△2FliC)。利用96孔微量板法,分别对野毒株、△1FliC和△2FliC进行生物膜表型检测,结果显示:△1FliC和△2FliC生物膜形成能力明显低于野毒株,从而为临床上大肠杆菌病的预防及疫苗的研制提供一定的理论基础。     

牛二酰甘油酰基转移酶2基因（DGAT2）研究进展

二酰甘油酰基转移酶（DGAT）是一种催化二酰甘油与脂肪酸酰基结合生成三酰甘油的关键酶,包括DGAT1和DGAT2两种类型。综述了DGAT2基因的发现、结构和定位、生物学功能以及DGAT2基因多态性与牛经济性状的关系,并对DGAT2的研究前景进行了展望。     

牛二酰甘油酰基转移酶2基因(DGAT2)研究进展

二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是一种催化二酰甘油与脂肪酸酰基结合生成三酰甘油的关键酶,包括DGAT1和DGAT2两种类型。综述了DGAT2基因的发现、结构和定位、生物学功能以及DGAT2基因多态性与牛经济性状的关系,并对DGAT2的研究前景进行了展望。