凡纳滨对虾抗传染性皮下及造血组织坏死病毒感染的初步研究

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)可导致凡纳滨对虾罹患慢性矮小残缺综合征,引起对虾的产量降低、经济效益下降,对对虾的养殖业危害严重。本试验通过于第3腹节肌肉注射100μL/g IHHNV的方法对不同家系的对虾攻毒,联合应用PCR和组织病理学检测并鉴定病毒。结果发现14个家系的对虾未感染IHHNV的比率79.3%~96.7%;联合两种方法可快速、灵敏、特异地检测出对虾感染IHHNV的状况。试验结果为对虾流行病调查、健康养殖及无特定病原(SPF)种群选育提供了有效的检测手段。     

泰国输华斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的检测与分析

为研究进口斑节对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus,IHHNV)的风险,本文采用了世界动物卫生组织(OIE)2015版手册中推荐的PCR方法,对2015年从泰国输华的329批次斑节对虾进行了IHHNV检测分析。结果发现,其阳性率高达36.8%,且主要是感染1型和2型,以及风险不明的未知型。因此,来自泰国的斑节对虾具有较高的IHHNV传入风险,应加强针对IHHNV的进口监测,减少其对我国对虾养殖的影响。     

传染性皮下及造血器官坏死病毒诱导南美白对虾抗白斑综合征病毒感染的初步研究

为进一步研究对虾抗病毒免疫方法,使用实验室动物病毒感染死亡率分析,研究传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)和白斑综合征病毒(WSSV)在感染南美白对虾后的相互作用机制。结果显示,预感染IHHNV后的对虾在进行WSSV攻毒后,对虾的存活率得到了提高。荧光PCR检测病毒量的结果显示,预感染IHHNV再用WSSV攻毒,存活虾体内的IHHNV含量比死亡虾高。研究结果初步证明,IHHNV和WSSV在对虾体内存在相互作用机制,且IHHNV具有抑制WSSV复制的作用。     

实时荧光定量PCR法检测对虾皮下和造血器官坏死病毒

应用实时荧光定量PCR最常用的TaqMan探针技术设计了探针和引物,并且用质粒技术构建了含有传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)基因片段的阳性质控品,建立了检测IHHNVV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR的主要因素进行了优化,Mg2+浓度、引物和探针浓度、退火温度等均对扩增效率有明显影响。当Mg2+浓度为3.0-4.5mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳扩增效果。灵敏性试验表明该反应可检测体系中10拷贝的病毒核酸;该体系检测IHHNV具有很高特异性;对临床样品检测结果表明,该方法能快速、准确地检测样品中的IHHNV。     

凡纳滨对虾Rab6A基因的克隆及表达

为研究凡纳滨对虾免疫调节因子Rab蛋白在对虾机体的免疫调节过程中的作用机理,克隆了凡纳滨对虾Rab6A基因,并对其在感染对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)对虾不同组织中的表达情况进行了研究。根据日本对虾Rab蛋白基因设计引物,采用RT-PCR方法克隆了长为558bp的Rab6A基因的部分cDNA序列,其开放阅读框为442bp,可编码147个氨基酸,推算其分子质量约为16.977ku,理论等电点为4.828,Rab6A与其他物种的Rab基因比对发现,该基因氨基酸序列具有较高的保守性。半定量PCR结果显示,Rab基因在不同组织中的表达情况没有明显的组织特异性,肝胰腺中表达量比其他组织略高,而在感染IHHNV的对虾心脏、肝胰腺、肠道、胃、腮、肌肉、血液组织中比正常组织中表达量增加,表明Rab蛋白参与抗病毒免疫反应。     

2015—2017年天津市虾肝肠胞虫流行情况调查

为了解天津市对虾肝肠胞虫（EHP）流行情况,2015—2017年从汉沽区、大港区、塘沽区、宁河区、静海区、津南区和西青区等7个对虾养殖主产区,采集养殖对虾及饵料生物等样品,应用PCR法进行EHP检测。检测结果显示：在2015—2017年分别检测的79、105、140批次样品中,EHP阳性率分别为56.96%、69.52%、29.28%;在凡纳滨对虾的仔虾、幼虾、中成虾养殖阶段均可检出EHP,但幼虾、中成虾的阳性率高于仔虾;鱿鱼、沙蚕和桡足类等对虾饵料生物携带有EHP。结果表明,天津市EHP流行率呈显著下降趋势,说明严格控制亲虾品质及引进无病毒感染种苗、加强检疫监测等措施,可以有效控制EHP流行。     

传染性造血组织坏死病病毒(IHNV)的危害、检疫及防治

传染性造血组织坏死病病毒(Infectious Hematopoietic NecrosisVirus,IHNV)属弹状病毒科(Rhab-doviridae)诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus),是传染性造血组织坏死病(Infectious HematopoieticNecrosis,IHN)的病原体,主要感染鲑鱼科的各种鱼类,常造成鱼苗或幼鱼70%-90%的死亡率,在某些病例中甚至接近100%,对世界鲑鱼的水产养殖业造成了巨大的经济损失。IHNV是口岸鱼类的第一类检疫对象。随着我国进口鲑鱼和养殖鲑鱼的发展,成品鲑鱼及鱼苗、鱼卵的引进可能造成IHNV的传入和传播。1990年,辽宁本溪某养殖场首次报道了我国第一例IHN,…     

2015年河南省规模化奶牛场BHV-1感染情况调查

为了解河南省规模化奶牛场牛疱疹病毒1型(BHV-1)的感染情况,课题组于2015年2~8月,对河南省5个地区的12个规模化奶牛场进行了分层随机抽样,共采集了440头牛的鼻腔和/或阴道拭子样品,采用qPCR方法进行BHV-1的病原学检测。结果:共检测出阳性奶牛68头,总体阳性率为15.45%;场阳性率为100%,其中阳性率最高场达到了68.00%,最低场为6.67%;5个地区的阳性率由低到高依次为豫东(10.00%)、郑州地区(10.78%)、豫北(12.04%)、豫西(20.00%)、豫南(35.82%);不同年龄段奶牛的阳性率不同,犊牛、后备青年牛、1胎、2胎、3胎、4胎以上牛分别是3.57%、6.67%、23.53%、26.22%、14.55%、28.57%;患病牛阳性率为28.13%,明显高于外观健康牛的13.23%。结果表明,2015年河南省调查的5个地区普遍有BHV-1感染,其中豫西、豫南地区的阳性率较高,明显高于豫东、豫中和豫北地区;随着奶牛年龄和胎次的增加,阳性率整体呈上升趋势;BHV-1感染与奶牛的临床健康状况密切相关,其中患有乳房炎牛群的阳性率最高。本试验首次利用qPCR对河南省规模化奶牛场进行了较为系统的BHV-1病原学调查,直接揭示了牛群中BHV-1的感染情况,分析了BHV-1感染与奶牛的年龄、机体健康状况、牛场地理环境等的关系。     

浙江省南美白对虾苗种五种流行病病原检测与分析

为了解浙江省南美白对虾主产区苗种主要病原的携带情况,对杭州、宁波、嘉兴和绍兴4个地区的苗种场开展了病原检测。129批次样品的检测结果显示:有4种病原检出阳性,阳性检出率分别为南美白对虾白斑综合症病毒(WSSV)1.55%、传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)20.93%、虾肝肠胞虫(EHP)31.78%、虾血细胞虹彩病毒(SHIV)37.21%,而桃拉综合症病毒(TSV)未有阳性检出。结果表明,SHIV、EHP、IHHNV是浙江省对虾苗种携带的主要病原,需要重点加以防范。从整体分布看,宁波市南美白对虾苗中携带的病原种类最多,且携带率较高,提示宁波市需要加强防控。从苗种来源看,来自福建省虾苗的IHHNV携带率最高,为38.10%;来自海南省和广东省虾苗中存在WSSV感染,检出率分别为2.17%和2.27%;来自广东省虾苗的EHP和SHIV携带率最高,分别为43.48%和41.30%。由于浙江省南美白对虾苗种主要依靠外地输入,而这些输出地区的苗种病原感染率较高,因此浙江省需要加强从这些地区引入苗种的检疫工作。     

2010—2012年中国部分地区鸡传染性支气管炎流行病学调查

鸡传染性支气管炎(IB)已经成为严重影响中国养禽业正常发展的传染性疾病,为了解中国主要养殖区域鸡传染性支气管炎流行情况,瑞普生物诊断研究服务中心在2010—2012年间从全国采集的3 132份发病鸡群肺和气管样本,利用RT-PCR及基因测序方法鉴定出410份IBV阳性样品,通过从时间、地域、发病特征、种群类型等方面进行了统计研究。结果发现:1)3年间IBV总检出率为13.1%,其中26.7%的IBV阳性样品为多重病原感染,以AIV-H9+IBV和NDV+IBV居多;2)白羽肉鸡的IBV检出率最高,为13.6%;3)IBV发病有较明显的季节性,从当年的11月份到次年的5月份,是IB的高发时段;4)IBV对感染鸡群造成的临床症状以肾大和呼吸道症状为主,其次是产蛋下降和腺胃炎;5)白羽肉鸡3~5周IBV检出率最高,商品蛋鸡IBV检出高峰有两个时段为3~5周及25~30周。通过本次全国范围的IBV流行病学调查,为我国有效防控传染性气管炎提供了科学依据,对制定防控鸡传染性支气管炎有效策略具有重要意义。     

2015—2016年广西梧州市主要病毒性猪病的检测与分析

采用RT-PCR及PCR技术,对广西梧州市7个县（市、区）屠宰场2015—2016年送检的1 304份猪组织样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行高致病性蓝耳病病毒（HPRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）核酸检测,对7个规模场送检的70份病死猪组织病料样品（肺脏、淋巴结、脾脏）进行HPRRSV、CSFV、伪狂犬病病毒（PRV）、圆环病毒（PCV）核酸检测。采用ELISA技术,对梧州市7个县（市、区）送检的8 572份血清检测猪瘟免疫抗体,对2 066份血清检测猪蓝耳病免疫抗体。结果显示：HPRRSV、CSFV核酸检测均为阴性;规模场病死猪组织病料的PRV核酸阳性率为14.3%,PCV为57.1%;猪瘟免疫抗体合格率为90.41%,蓝耳病免疫抗体合格率为73.48%。监测结果表明：梧州市流行的生猪高热病主要涉及猪伪狂犬病和猪圆环病毒病2种病毒病;猪蓝耳病和猪瘟的强制免疫,有效控制了该地主要猪病毒性疫病的发生与流行。     

2015年-2016年度南宁部分地区猪戊型肝炎病毒基因型分析

为了解广西猪群中戊型肝炎病毒(HEV)基因型,利用套式RT-PCR用对南宁周边猪场采集到的104份新鲜猪粪便进行HEV检测、分离并成功扩增和克隆了11株阳性毒株的ORF2基因部分保守片段.序列测定结果表明,11株HEV ORF2序列自身核苷酸同源性为97.7%~100%,推导编码的氨基酸同源性为97.9%~100%;与4型HEV代表毒株Ch-S-1、Ch-T11、swGX40等的核苷酸同源性为84.6%~90.6%,而与其他各型之间的同源性较低.系统发育进化树结果表明,11株HEV广西株为基因4型,其中,10株HEV为4a亚型,1株毒株为4e亚型.结果表明,广西猪群中流行的HEV均为基因4型,且以4a亚型为优势流行毒株.     

2016—2017年山东省济南市犬布鲁氏菌病血清流行病学调查

为初步了解山东省济南市犬布鲁氏菌病流行情况,2016—2017年,在济南市5个辖区采集502份犬血样,利用竞争ELISA抗体试剂盒、虎红平板凝集试验,分别检测光滑型（猪、牛、羊种）和粗糙型（犬种）布鲁氏菌抗体。结果显示,济南市犬布鲁氏菌光滑型、粗糙型抗体阳性率分别为8.76%、1.99%。结果表明,济南市宠物犬中的光滑型布鲁氏菌感染率较高,潜在传播风险较大,应引起高度重视。     

2015—2016年欧洲牛结节性皮肤病流行状况分析

2015年牛结节性皮肤病（LSD）首次传入欧洲,并持续在巴尔干半岛地区扩散和蔓延。为了解该病的流行形势,对2015—2016年欧洲LSD流行情况进行了分析。结果显示：从时间分布来看,疫情呈明显的季节性,主要集中于6—9月;从空间分布来看,疫情在巴尔干半岛地区沿东南向西北方向传播,且多集中于疫情国家边界区域;从群间分布来看,疫情主要发生于小规模牛场,且以散发为主。依据分析结果,本文提出了预防LSD传入我国的建议,如严格禁止从疫情国家进口牛及相关产品、加强LSD宣传培训、强化LSD主动监测和媒介控制、制定防控应急预案或防控技术规范、做好技术研究储备等。     

2015—2016年湖南省长沙市活禽批发市场禽流感流行病学调查

为了解当地活禽批发市场的禽流感病毒污染状况,提升禽流感防控针对性,2015—2016年先后4次对长沙市两大活禽批发市场进行了禽流感流行病学调查,共在35个摊位分离到禽流感病毒,发现群阳性率为43.6%,禽流感病毒总分离率为14.24%,分离到H3、H5、H6、H7、H9和H10等6种亚型禽流感病毒。其中,H9和H5亚型禽流感病原阳性率较高,分别为8.7%和3.8%。调查结果表明,长沙市活禽批发市场中的禽流感病毒污染面较广。建议加强活禽市场管理,特别要做好市场的清洗消毒工作。     

2015—2017年酒泉市部分地区羊肉制品食源性病菌污染情况调查

为初步了解并分析酒泉市部分地区羊肉制品中食源性致病菌的污染情况,于2015—2017年对酒泉市5个县市随机采集羊肉制品827份,参照食品国家安全标准对采集的样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血性孤菌和单核细胞增生李斯特菌污染情况进行了调查。结果显示:共有116份样品被检测出携带食源性致病菌,检出率14.03%,其中金黄色葡萄球菌74份(8.95%)、沙门氏菌23份(2.78%)、副溶血性孤菌12份(1.45%)、单核细胞增生李斯特菌7份(0.85%),没有检出大肠杆菌O157:H7;2015—2017年检出率分别为24.05%、12.09%和7.75%;不同羊肉制品中以油炸肉检出率最高(48.65%),生肉最低(5.67%)。说明酒泉市羊肉制品中食源性病菌污染较为严重,其中主要以沙门氏菌和金黄色葡萄球菌为主,给消费者健康造成潜在的威胁,相关部门需要提高食品安全监管力度。     

2019—2021年北京市种猪场猪伪狂犬病病毒感染情况调查

为了解北京市种猪场猪群伪狂犬病病毒（PRV）感染情况,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,对2019—2021年3个区采集的10 850份血清样品进行PRV感染抗体（gE抗体）检测。结果显示：2019—2021年,北京市3个区种猪场群体表观阳性率分别为84.38%、77.78%、64.71%,群体真实阳性率分别为86.10%(95%CI:73.95%～98.24%)、79.37%(95%CI:60.39%～98.34%)、66.03%(95%CI:43.22%～88.83%),下降趋势不显著（P> 0.05）;个体表观阳性率分别为53.95%、41.52%、35.59%,个体真实阳性率分别为55.05%(95%CI:53.05%～57.05%)、42.37%(95%CI:40.90%～43.84%)、36.32%(95%CI:34.85%～37.79%),呈显著下降趋势（P <0.05）。育成猪、经产母猪和后备母猪个体阳性率逐年下降,而育肥猪个体阳性率逐年升高,由2019年的38.45%,提高到2021年的60.79%。结果表明,北京市种猪场PRV感染得到一定的控制,但感染...     

张家口坝下地区鸡弓形虫感染情况调查

为了解张家口坝下地区鸡弓形虫的感染情况,采用间接凝集试验(IHAT)对张家口坝下地区的345份散养鸡血清和235份笼养鸡血清进行弓形虫的血清学检测.结果表明,散养鸡阳性率为11.01%(38/345);笼养鸡阳性率为2.13%(5/235),其中,阳性鸡血清杭体滴度分布在1:64的占74.42%(32/43),1:256的占25.58%(11/43).     

A Biopsy Procedure for the Nondestructive Determination of Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus (IHHNV) Infection in Penaeus vannamei

Abstract

The shrimp Penaeus vannamei is frequently an asymptomatic carrier of infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus (IHHNV). In addition, there is increasing evidence that P. vannamei may also suffer severe disease from infection by IHHNV under some culture conditions. Hence, a nondestructive technique has been developed that has the potential to replace the old method of destructive subsampling, at least with this penaeid species. The new procedure is simpler, faster, less labor intensive, and equally precise when compared with the old method. The procedure involves the excision of the first pereiopod, followed by standard histological examination of the appendage nerve cord for the presence of pathognomonic Cowdry type A intranuclear inclusions. The nondestructive nature of this new technique may be its most important asset; animals tested for IHHNV via this method need not be sacrificed and are thus still available for use as brood stock.