烟草花叶病毒系统诱发抗性的研究

用烟草花叶病毒诱发接种4种枯斑寄主:心叶烟、三生NN烟、珊西NC烟和蔓陀罗,可使接种植物对烟草花叶病毒、烟草蚀纹病毒及马铃薯X病毒的侵染表现很强的诱发抗性.这种抗性主要表现为处理的枯斑直径及枯斑数目比对照减少50%～75%.诱发抗性具有非特异性和广谱性.抗性在诱发接种后2～4天开始出现,7～8天达到最高抗性水平,且至少保持25天以上.     

云南天竺葵上发现番茄斑萎病毒

[目的]在云南省昆明市植物园中发现症状表现为叶片褪绿和环斑的天竺葵,怀疑其为番茄斑萎病毒属病毒侵染。[方法]将病叶汁液摩擦接种至本氏烟,显症后取样与原样一起用3种番茄斑萎病毒属病毒的抗体采用Dot-blot ELISA方法进行检测,并用RT-PCR方法对本氏烟叶片进行检测。[结果]接种本氏烟的系统叶片在7 d后表现典型的花叶、卷曲和枯斑等症状,天竺葵病叶和接种显症的本氏烟系统叶Dot-blot ELISA和本氏烟叶片RT-PCR检测结果均表明其病原为番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)。RT-PCR产物的测序结果显示其N基因与TSWV-LE分离物核苷酸相似性达99.74%。[结论]天竺葵病样为TSWV侵染所致,这是首次在中国天竺葵上发现TSWV,对该病毒的防治工作具有参考价值。     

河北省辣椒(Capsicum frutescens)主要出口基地辣椒病毒病毒源种类鉴定——1.Ⅰ—17、Ⅱ—44、Ⅲ—59和Ⅳ—34分离物的鉴定

从辣椒上分离到的Ⅰ—17、Ⅱ—44、Ⅲ—59、和Ⅳ—34四个病毒分离物,根据其病毒形态、大小、血清反应、蚜虫传毒特性、体外稳定性、寄主范围和症状特点,Ⅰ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59分离物鉴定为黄瓜花叶病毒(CMV)的三个不同分离物,Ⅳ—34鉴定为烟草花叶病毒(CMV)。CMVⅠ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59三个分离物的病毒形态为球状,直径约28nm,免疫琼脂双向扩散试验结果:它们与 CMV 有密切的亲缘关系,三个分离物均由棉蚜、桃蚜以非持久性方式传播;钝化温度:Ⅰ—17为55—60℃,Ⅱ—44为66—70℃,Ⅲ—59为60—65℃,三个分离物的稀释限点均为10~(-4)—10~(-5),体外保毒期均为5天;在辣椒、黄瓜、心叶烟和普通烟等寄主上引起系统花叶,在奎宁藜、豇豆、蚕豆等植物上引起局部枯斑,不侵染十字花科植物。Ⅰ—17、Ⅱ—44和Ⅲ—59三个分离物在心叶烟、黄花烟、普通烟、蚕豆、蕃茄、曼陀罗等寄主上的侵染性及症状反应不同,在不同辣椒(甜椒)品种上的症状反应也存在差异。TMVⅣ—34分离物病毒粒子形态为直杆状,大小约为300×18nm,免疫琼脂双向扩散试验表明它与烟草花叶病毒(TMV)存在亲缘关系;不能由蚜虫传毒,致死温度为95°—100℃,稀释限点为10~(-10)—10~(-11),体外保毒期2个月以上;在普通烟、毛叶烟、三生烟、辣椒、蕃茄等寄主上表现系统花叶,在心叶烟、曼陀罗、奎宁藜、黄色藜、枯斑三生烟等寄主上引起枯斑症状,不侵染黄瓜和蚕豆等植物。     

北疆地区辣椒上两个TMV分离物的鉴定

依据在鉴别寄主上的反应,从北疆辣椒上分离得到的90—15和90—24两个TMV类型病毒,经测定,前者致死温度为85℃,侵染普通烟表现系统坏死,苋色藜表现系统花叶,与TMV普通株系抗血清部分融合,外壳蛋白分子量为17 782Dalton,由161个氨基酸组成,没有组氨酸,但有一个蛋氨酸,后者致死温度为90℃,侵染普通烟表现系统花叶,苋色藜表现局部枯斑,与TMV普通株系抗血清完全融合,外壳蛋白分子量为16 982Dalton,由157个氨基酸组成(不包括色氨酸),含组氨酸和蛋氨酸各一个。两者在苋色藜上有交互保护作用。     

氨基寡糖素与镁锌混配对烟草TMV的防控效果及生理分析

通过三生烟草(Sam Sun N.N)枯斑试验和接种TMV病毒的K326品种烟株体内生理指标分析,研究了氨基寡糖素与中微肥混配对烟草花叶病毒(TMV)的体外钝化、侵染抑制效果和综合防病效果,以及由其引起的烟叶叶绿素、防御酶活性及病程相关蛋白等生理指标变化。结果表明:三生烟草枯斑试验中,氨镁锌混配剂对TMV病毒有明显的体外钝化和侵染治疗效果,病毒抑制率分别比单独施用氨基寡糖素提高20.6和10.1个百分点;K326品种烟株接种TMV病毒施用相应药剂,接种后7、11和30 d时的病情指数均以氨镁锌混配剂处理氨基寡糖素单剂CK;而上述烟株体内叶绿素的含量和SOD、POD和PAL酶活性则以氨镁锌混配剂处理总体最高;氨镁锌混配剂处理诱导病程相关蛋白PR3和PR5相对表达量显著性升高,达到对照的0.79倍和1.51倍。这说明,氨基寡糖素与镁锌混配对抑制TMV侵染和提高烟株抗性的效果比单独施用氨基寡糖素好。     

烟草花叶与黄瓜花叶病毒复合或重复侵染番茄后在体内TMV浓度及致病性的比较

1980至1982年的试验结果表明,北京郊区番茄抹上主要病毒类型是烟草花叶病毒(TMV),其次为黄瓜花叶病毒(CMV),以及部分由它们的复合侵染所造成的花叶、厥叶和茎坏死条斑等症状,其中以 TMV 起主导作用,它占总病毒数的50%以上。用测定 TMV 浓度的增量来估计不同组合接种的作用可以看出,单独侵染 TMV 的呈现系统花叶症、疱斑和部分叶片畸形;混合侵染的则表现一般:重复侵染的比前两种处理的症状表见更轻些,而单独侵染 CMV 的症状则表现最轻。不同方式组合的TMV 枯斑数量测定结果也同上述症状表现一致。症状的轻重与枯斑数量的多少成正比。单独侵染 TMV 的不同稀释度(5 mg/ml)的枯斑数量,比两种复合侵染的多。用数学方法所得 TMV 的致病性稀释曲线图同上述结果一致。由于复合侵染中CMV 对 TMV 浓度的增量产生一定的抑制作用,因此,在症状的表现上和枯斑数量也相应减轻和减少。     

壳寡糖的诱导抗性及对TMV的体外钝化研究

以摩擦接种法和半叶枯斑记数法调查了壳寡糖诱导枯斑寄主对TMV侵染的抑制率.试验结果表明,被壳寡糖诱导后的烟苗病斑率减少42.8%,被诱导植株的病斑小;壳寡糖在活体外对TMV粒子有钝化作用;壳寡糖钝化病毒液处理植株在1～5个小时内处理的病斑数比对照的减少80%左右,但其钝化作用在一定时间内有效,体外钝化处理超过15 d后钝化效果消失.壳寡糖液浓度为0.5×10～5 μg/ml以内,对病毒有明显的钝化作用,病斑率降低94.9%～77.6%,当浓度低于0.9×10～6μg/ml时,对病毒的体外钝化作用消失.     

侵染烟草的黄瓜花叶病毒研究

从我省主要烟区烟草花叶病标样中所分离的毒源,在鉴别寄主苋色藜上形成局部枯斑,在心叶烟上则为系统侵染。病毒致死温度65～70℃,体外保毒期2～3天,稀释终点为1:1000～2000。电镜观察病毒粒体为球形和血清学试验不与烟草花叶病毒和芜菁花叶病毒起反应。根据这些特性,初步认为属典型的黄瓜花叶病毒(Cucumber Mosaic Virus)。本文用反向间接血凝反应、皂土凝聚反应、琼脂双扩散反应、试管沉淀反应和玻片凝聚反应对黄瓜花叶病毒进行了检测比较试验,其中以反向间接血凝法灵敏度最高,病株抽提液稀释至三万倍仍可检出,敏感度比琼脂双扩散试验高256倍,其诊断效率亦较好,均比其它测定法优越。     

马铃薯M病毒生物学特性研究

测定马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)寄主范围,并作PVM接种条件优化试验。结果表明,PVM仅侵染15种指示植物中的4种,各种植物症状表现不同。苋色黎(Chenopodium amaranticolor)和千日红(Gomphrena globosa L.)接种叶片上产生枯斑,可作为PVM枯斑寄主;36号烟(Nicotiana occidentalis"pi")系统发病,新生叶片产生皱缩、泡斑、叶边缘卷曲等症状,植株长势矮小,可作为PVM系统侵染鉴定寄主;PVM系统侵染番茄(Lycopersicon pimpinellifolium)速度快,但无症状,番茄可作为PVM繁殖寄主。PVM虽可侵染不同生育期寄主,以接种中上部叶位侵染效果最好,但在不同寄主不同叶位分布并不一致,番茄体内中部叶片病毒含量相对较高,在苋色黎上则分布较均匀。明确PVM最适培养温度为23~29℃。最高稀释度64倍时(OD405=0.201)仍可成功侵染苋色黎。为PVM纯毒源扩繁及制备该病毒抗血清提供基础数据。     

大豆的烟草环斑病毒(TRSV)生物学性状的鉴定

大豆的烟草环斑病毒(TRSV),系种子带毒传病,它是引起产量严重损失的大豆病毒病害之一。我国是否发生未见报道。本研究系在美国依阿华大学采用该地分离的毒原,对大豆 TRSV 的生物学性状如毒原繁殖、病毒接种指示植物鉴定及寄主范围、病毒汁液性质的常规测定等进行了试验。所得结果为:大豆的烟草环斑病毒接种于豇豆叶上产生红褐枯斑;接种于黄瓜叶上产生淡黄环斑,系统性;接种于普通烟—白贝菜(White Burley)叶上,初形成同心纹环斑,后转为系统轻花叶症;接种于克利夫兰烟叶上也是先生同心环斑,后转为轻花叶症,在蔓陀萝叶上表现花叶症;在千日红叶上表现褪绿小枯斑等。TRSV 的寄主范围颇广;茄科、藜科、豆科、葫芦科均受侵染,但不侵染禾本科和茄科及豆科里某些品种。其失毒温度为60℃;稀释限点为10~(-6)(但在10~(-3)时侵染率已下降);体外存活11天。     

超敏蛋白BaPE1对烟草马铃薯Y病毒的诱导抗性

为了探究超敏蛋白对烟草马铃薯Y病毒病的诱导抗性影响,采用半叶枯斑法和田间效果试验研究超敏蛋白BaPE1提取物对枯斑三生烟和普通烟的诱导抗性和促生作用。结果表明,超敏蛋白BaPE1能诱导烟株对烟草马铃薯Y病毒产生抗性,并对烟草有一定的促生作用。接种前48h喷施500μg/mL超敏蛋白BaPE1预防效果达70.46%,接种后24h、48h喷施500μg/mL超敏蛋白BaPE1治疗效果达61.30%和60.59%,均显著高于对照组;喷施500μg/mL超敏蛋白后烟草在株高、茎围、最大叶面积等方面表现出较好的生长势,并高于其他处理。因此,超敏蛋白BaPE1不仅可以提高烟草抗性而且还能促进烟株生长、提高烟叶经济效益。     

漂盘培养液中TMV含量对烟草花叶病发病情况的影响

[目的]为提高烟叶产量和品质提供参考。[方法]以普通烟K326和心叶烟为材料,用12．7、1．27、0．127、0．0127μg/ml烟草花叶病毒（TMV）液对K326进行漂盘培养,培养5、10、15、20、25d后随机取各处理K326叶片得叶片提取液,用各处理提取液接种8叶期心叶烟叶片,调查K326的发病情况及心叶烟的枯斑数。[结果]12．7ug／mlTMV处理K326表现出发病症状,其他处理未表现明显发病症状;随着培养液中TMV浓度的升高,各处理烟叶提取液接种心叶烟产生的枯斑数逐渐增多,且枯斑数随病毒接种时间的延长迅速增加;12．7、1．27μg/mlTMV处理K326叶片提取液接种20d后心叶烟枯斑数最多,0．127、0．0127μg／mlTMV处理K326叶片提取液接种25d后心叶烟枯斑数最多。[结论]烟草花叶病的发病率和病情指数与培养液中TMV的浓度有关。     

TMV与CMV不同组合侵染番茄后TMV致病性与浓度关系的数学模型与统计分析

由烟草花叶病毒(TMV)与黄瓜花叶病毒(CMV)三种不同组合接种番茄幼株(北京早红)后,再由接种侵染的番茄株体中分别捉取的 TMV 以不同的浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据,应用植物病毒侵染与浓度关系的理论模型 y=B_1ln(1+B_2V),采用 Gauss-Newton 法与 Marguardt 洪两种方法,分别实现了模型的参数计算,得到了三种组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的致病性与浓度关系的数学模型与最优曲线拟合,并对两种计算方法的效果进行了比较。本文还对由不同组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的不同浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据进行了统计分析,证明 TMV 与 CMV 的不同处理组合间的 TMV 侵染的半叶平均枯斑数差异是极显著的,TMV 各接种浓度间侵染的差异性也是极显著的,而这两者的交互作用侵染的差异性则不如前两种情形显著,这些结论与实验结果完全一致。     

白花蛇舌草抗烟草花叶病毒作用机理的研究

[目的]研究白花蛇舌草提取液对烟草花叶病毒（TMV）的抑制作用及其防治效果,为植物源抗病毒类生物农药的研制提供依据。[方法]以心叶烟和K326为试验材料,采用常规摩擦接种,分别于接种病毒前24h和接种后24h分别喷施白花蛇舌草10倍液;接种处理3～5d后,调查枯斑数量,计算枯斑抑制率;普通烟接种处理后调查病情指数、计算防效;采用间接ELISA法[4]测定各处理的病毒浓度;将提纯的TMV与白花蛇舌草10倍液等体积混合不同时间后,采用负染法在电镜下观察病毒粒子的形态变化。[结果]对心叶烟的抑制率为84.6%,对系统寄主K326的防效为76.6%;在接种病毒前24h喷施药剂,枯斑抑制率和对系统寄主的防效分别为62.2%和61.5%;接种病毒后24h喷药试验结果表明,药剂能抑制植株体内病毒的增殖;电镜观察结果表明,病毒粒子有断裂现象,混合时间越长,破坏作用越强。[结论]白花蛇舌草对TMV还具有较强的体外抑制作用,作用时间越长,抑制率越高。     

植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

辣椒轻斑驳病毒辽宁分离物的鉴定及序列分析

采用鉴别寄主、血清学及RT-PCR检测的方法对采自辽宁省葫芦岛地区的辣椒病毒进行了分离与鉴定,并将克隆得到的病毒CP基因进行测序及同源性比较。结果表明:该病毒分离物可侵染辣椒(Capsicum frutescens)产生局部枯斑、系统斑驳或花叶;局部侵染普通烟(Nicotiana tabacum)、心叶烟(Nicotiana glutinosa)、三生烟(Nicotiana tabacum.var.samsun)、矮牵牛(Petunia hybrida)产生坏死枯斑,在曼陀罗(Datura stramonium)、洋酸浆(Physalis pubescens)和苋色藜(Chenopodium amaranticolor)上引起褪绿斑;不能侵染番茄(Lycopersicon esculentum)、葫芦(Lagenaria siceraria)、甜瓜(Cucumis melo)、黄瓜(Cucumis sativus)、千日红(Gomphrena globosa)、白菜(Brassica pekinensis)、百日草(Zinnia elegans)、蚕豆(Vicia faba)和玉米(Zea mays)。辣椒病叶、病果和种子及表现症状的鉴别寄主叶片经DAS-ELISA检测均证实存在辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)。通过RTPCR技术成功克隆获得该病毒CP基因,测序并分析其同源性表明,该分离物与GenBank上已报道的13个国内外PMMoV分离物同源性很高,核苷酸和氨基酸同源性均为94%~100%。将该分离物与其他13个PMMoV分离物的CP基因序列一起构建系统发育进化树分析表明,该分离物与各亚洲分离物亲缘关系密切,并与国内各分离物可能具有相同的进化祖先。综上所述,辽宁辣椒上发现的病毒可鉴定为辣椒轻斑驳病毒辽宁分离物(PMMoV-LN),此为辽宁辣椒生产区首次报道。由于PMMoV具有典型的种传特性,而我国目前尚未将其列为检疫对象,这将促进病毒的快速扩展蔓延,因此应重视该病毒的危害性及对我国辣椒生产的潜在威胁,并加强其抗病育种和检验检疫工作以达到对PMMo V防控的目的。     

壳寡糖诱导烟草抑制TMV增殖的研究

采用ELISA-DSM法和半叶枯斑法,研究了壳寡糖诱导对普通烟(Nicotiana tabacum)体内TMV 增殖的影响。结果表明,普通烟经50μg/mL壳寡糖溶液诱导处理后,其对TMV的侵染表达了高水平的系统抗病性,显症推迟4～7 d,平均严重度降低了82．9％。ELISA-DSM法检测结果表明,壳寡糖诱导处理的普通烟植株体内病毒浓度明显降低;在接种后10 d,接种叶片OD值仅为0．400,相当于同期不诱导对照的23．0%;新生叶片OD 值为0．190,相当于同期不诱导对照的38．7％。以发病普通烟叶片为接种体,利用半叶法接种心叶烟(Nicotiana glutinosa),结果表明,壳寡糖诱导处理大大减少了枯斑数目;以接种后10 d的壳寡糖处理叶片为接种体,平均半叶枯斑数为9．25,仅为不诱导对照的19．5%;以同期新生叶为接种体,平均半叶枯斑数为0．630,为不诱导对照的 25．0%。以上两种方法的检测结果均证明,壳寡糖诱导处理可以有效抑制普通烟体内的TMV增殖。通过对壳寡糖 (低分子质量)处理与壳聚糖(高分子质量)处理的比较发现,分子质量的差异不影响其对病毒增殖的抑制效果。     

叶面抗菌剂对烟草病毒病的防效研究

以心叶烟为枯斑寄主,测定了叶面抗菌剂J-1室内盆栽试验,结果表明,叶面抗菌剂J-1先接种后施药、先施药后接种以及病毒与叶面抗菌剂混合处理的抑制效果中,原液的抑制效果分别为74.17%、35.73%和89.08%,表明叶面抗菌剂具有体外钝化作用。田间防效测定结果表明:叶面抗菌剂J-1对PVY、CMV和TMV的防效优于常规药剂3.95%病毒必克500倍液和2%菌克毒克250倍液。     

抑制烟草花叶病毒侵染的植物提取物的筛选

用半叶枯斑法,在心叶烟上测试了33种植物乙醇提取物水溶液对烟草花叶病毒(Tobacco mosaicvirus,TMV)侵染的抑制效果。结果表明,雪松、桉树提取物能较好地抑制病毒(TMV)侵染,抑制率达到89.7%,78.3%;此外,菟丝子、红花蔷薇、桑、红千层、杜鹃、桂花、香石竹、滇厚朴、荠菜、芦荟等植物提取物也具有抑制烟草花叶病毒(TMV)侵染的效果,抑制率均在50%以上。     

植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。