雷公藤内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

目的:从雷公藤根(Tripterygium wilfordii)茎及叶中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。方法:采用微生物纯化方法分离雷公藤植物的内生真菌,根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用HCT-8(人结肠癌细胞)、Bel-7402(人肝癌细胞)、BGC823(人胃癌细胞)、A549(人肺癌细胞)为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果:从雷公藤不同器官中分离得到64株内生真菌,经形态观察鉴定为3目,5科,11属。其中5株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。结论:雷公藤内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株筛选

[目的]筛选冬凌草内生真菌抗肿瘤活性菌株,为开发利用冬凌草内生真菌资源提供依据。[方法]以药用植物冬凌草为试验材料,分离筛选能产抗肿瘤活性物质的内生真菌。通过组织分离法,从贵州省施秉县产冬凌草中分离到152株植物内生真菌,利用抗肿瘤体外细胞增殖抑制筛选模型(SRB法)对其进行活性检测。[结果]结果表明,20株内生真菌(占总分离菌株的13.1%)对人慢性髓性白血病K562细胞具有显著的增殖抑制活性。[结论]冬凌草内生真菌是寻找抗肿瘤活性代谢产物的良好资源。     

海南粗榧内生真菌抗肿瘤活性菌株筛选

利用镰刀菌筛选模型和肿瘤细胞筛选模型对190株分离自海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis L.)的内生真菌进行了抗肿瘤活性筛选。结果显示,16株内生真菌的乙酸乙酯提取物对人慢性髓原白血病细胞K562、急性早幼粒白血病细胞NB4、人肝癌细胞Hep G-2抑制率大于50%,具有细胞毒活性,其中菌株JFL3007a和BWL6045的乙酸乙酯提取物对人慢性髓原白血病细胞K562、急性早幼粒白血病细胞NB4、人肝癌细胞Hep G-2均有较好的抑制作用。为进一步寻找其生物活性成分奠定了基础。     

喜树内生真菌的分离及其对植物病原菌的抑菌活性测定

采用组织分离法,以PDA培养基为分离培养基,从喜树的枝条、叶片、果实和根中分离获得28株内生真菌.对峙试验结果显示,28株内生真菌对6种植物病原菌均有不同程度的抑制作用;其中G-4菌株作用最明显,对苹果腐烂病菌(Valsa mali miyabe et Yamada)、茄褐纹病菌[Phomopsis vexans(Sacc.et Syd.)Harter]的抑制率分别为89.68%和83.88%.对G-4菌株生物学特性测定结果表明,G-4菌株生长最适温度为28℃,最适pH范围为6.4～8;在麦芽浸粉培养基上G-4菌丝生长迅速;果糖为最佳碳源.     

喜树内生真菌的分离与鉴定

以我国特有药用植物——喜树(Camptothecaa cuminata Decne.)为试验材料,对喜树的根、茎、叶、种子进行内生真菌的分离,共分离得到菌株151株。对其中70株内生真菌进行了鉴定,鉴定为15个属,11个科,10个目,5个纲,分属3个亚门。鉴定结果在一定程度上反映了喜树内生真菌的生物多样性,并为筛选产喜树碱及其类似物的菌株奠定了一定的基础。     

喜树内生真菌的研究进展

介绍了喜树内生真菌的生物活性代谢产物,对其内生真菌的生物多样性及其与寄主植物的关系进行了综述,并对喜树内生真菌的研究方向进行了展望。     

雷公藤属内生真菌研究（Ⅱ） 昆明山海棠内生真菌的分离鉴定及抗肿瘤活性菌株筛选

为从昆明山海棠根及茎中分离鉴定内生真菌,并对其发酵产物乙酸乙酯提取物进行体外抗肿瘤活性筛选,采用微生物纯化方法,从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌, 根据菌落形态和显微特征对菌株进行分类鉴定。选用Bel-7402（人肝癌细胞）、A549（人肺癌细胞）、BGC823（人胃癌细胞）、HCT-8（人结肠癌细胞）为指标,采用MTT法对发酵产物进行体外抗肿瘤活性筛选。结果表明,从昆明山海棠不同器官中分离得到37株内生真菌,经形态观察鉴定为2目、4科、8属。其中3株内生真菌发酵产物对不同肿瘤细胞具有显著选择性细胞毒作用。研究结果为国内首次从昆明山海棠植物中分离得到内生真菌,昆明山海棠内生真菌种类多样,具有潜在的研究和应用价值。     

喜树内生真菌的分离及其代谢产物的初步研究

采用组织块法对喜树(Camptotheca acuminata Decne)不同组织内生菌进行了分离,共纯化得到55株内生真菌。初步分类鉴定、拮抗性的测定和部分菌株发酵液中代谢产物的研究结果表明:①供试菌可归为5个属和1个无孢类群。其中无孢类群数量较多,为26株,占47.3%。5个属依次为根串珠霉属、小卵孢属、梨孢属、匙孢霉属和盘长孢属。②喜树内生真菌代谢产物的种类比较多,尤其是生物碱类、黄酮及其苷类、酚类和萜类物质的产生比较普遍。有6株菌可能产生喜树碱(Camptothecin,CPT)的类似物。③内生真菌普遍对棉花立枯病菌有较强的拮抗性,46.81%的菌株拮抗圈直径大于1.5 cm,59.57%的菌株有抗性;对假丝酵母的拮抗性最弱,仅有17.02%的菌株存在弱抗性。     

苦参内生真菌菌株的杀菌活性筛选

从药用植物苦参的茎、叶中分离得到10种内生真菌,并对这几种内生真菌杀菌活性进行筛选,获得高拮抗性菌株.     

虫生真菌粗提物抗肿瘤活性的研究

以中国仓鼠卵巢CHO细胞株作为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对42株虫生真菌次生代谢产物进行体外抗肿瘤活性试验.结果发现有10株菌株对CHO细胞的抑制率超过了50%.并进一步用不同溶剂对这10株虫生真菌次生代谢物质进行提取,并进行体外抗肿瘤活性试验,结果发现菌株RCEF0800的甲醇相活性最高,对CHO细胞的IC50为97.80 μg·mL-1.     

40株虫生真菌菌丝体提取物抗肿瘤活性的初步研究

以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对40株虫生真菌菌丝体的提取物进行体外抗肿瘤活性试验.结果表明,黄山被毛孢Hirsutella huangshanensis菌株RCEF0851和RCEF0868菌丝体提取物对CHO细胞株的抑制活性最强,其乙酸乙酯和二氯甲烷混合溶剂提取物在100 μg·mL-1时对CHO细胞的抑制率分别为(98.58±1.12)%、(98.47±2.11)%;其甲醇提取物在100 μg·mL-1浓度时对CHO细胞的抑制率也分别达到(97.30±1.83)%和(96.28±1.96)%.复筛的结果表明,RCEF0851和RCEF0868菌丝体提取物对CHO细胞的半数抑制浓度IC50分别为29.24 μg·mL-1和28.87 μg·mL-1.另外,环链拟青霉Paecilomyces cateniannulatus菌株RCEF0508菌丝的乙酸乙酯和二氯甲烷混合溶剂提取物在100 μg·mL-1时对CHO细胞的抑制率也达(95.96±2.01)%,这些菌株值得进一步深入研究.     

珍珠相思叶状柄水提物的化感效应研究

探讨不同浓度珍珠相思叶状柄的水提液对3 种茄科植物（番茄、茄子和辣椒）生长的影响。通过种子萌 发试验,测定不同浓度叶状柄水提液对受体植物的化感效应指数、萌发率和幼苗生长特性影响,分析是否存在化感 效应和潜在的生态风险。低浓度（0.02 g/mL）叶状柄水提液条件下,茄子种子萌发率的化感指数为0.06;番茄的芽长 化感效应指数和综合指数分别为0.37、0.09,而较低浓度（0.04 g/mL）下分别为0.30 和0.01,表现为一定的促进作用; 此外的其他指数均为负值,体现出较强的抑制作用。叶状柄水提液中所含的化感物质对3 种茄科植物种子萌发及幼 苗生长表现有所不同。不同浓度水提液对番茄幼苗生长具有低促高抑的双重浓度效应,而对辣椒和茄子幼苗生长均 具明显的抑制作用,且在其作用范围内具有浓度依赖性。     

4个黄芩内生真菌菌株的鉴定及抗菌活性研究

通过形态学观察和ITS序列系统发育分析确定了4个黄芩内生真菌菌株的分类学地位,N.SBA9为密实链格孢Alternaria compacta,N.SBA10为链格孢属的种Alternaria sp.,N.SBA 34为节菱孢属的种Arthrinium sp.,N.SBA 35为粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea,其有性型为淡色生赤壳菌Bionectria ochroleuca。以枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、致病性大肠埃希氏菌Enteropathogenic Escherichia coli(EPEC)、肠炎沙门氏菌Salmonellae enteritis、九州镰孢霉Fusarium kyrushuense等7种指示菌对上述4个菌株的发酵液原液、发酵液乙醇提取物和菌丝体乙醇提取物进行抑菌活性测定的结果表明,各菌株的发酵液原液的抗菌谱较广,分别可拮抗3~6种指示菌;发酵液和菌丝体的醇提物的抗菌谱较窄,分别可拮抗1~2种指示菌,且抑菌活性普遍较高,抑菌圈直径大多大于20 mm。     

银杏产黄酮内生真菌的分离与鉴定

为了保护银杏资源,寻找生产黄酮类物质的替代品,采用选择性培养基,从银杏Gingkgo biloba L.的根、茎和叶中分离7株内生真菌,经高效液相色谱分析,证实3株内生真菌可产生槲皮素和山萘素类黄酮物质,其中内生真菌Enf 7的黄酮产量最高,达到70mg·100g-1干菌丝,可作为生产银杏黄酮的候选菌株.根据真菌的孢子结构、菌丝形态、菌落生长速度等形态学特征,结合核糖体RNA基因的居间序列(internal transcribed spacer,ITS)的碱基差异,确定3株产黄酮内生真菌分别属于安培菌属的白粉菌寄生菌Anpelomyces humuli、茎点霉属的头状茎点霉Phoma glomerata和镰孢属的茄镰孢Fusarium solani.     

汉麻内生菌的分离及抑菌活性研究

本研究以汉麻为植物材料,对其内生菌进行较为系统的分离,并进行抑菌活性的筛选,以期得到能够产生较高杀菌活性物质的菌株。为筛选具有生防作用的汉麻内生菌提供理论依据和技术支持。筛选出的汉麻新菌种可以用作生物农药,与多种生物肥料复配,生产出新型复合微生物菌剂。     

滇重楼内生真菌抗菌活性的筛选和菌株鉴定

以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)为指示菌种,采用滤纸片法对分离自滇重楼[Paris polyphylla Smith var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.]的10株内生真菌进行抗菌活性检测.结果发现,10株被测菌株的发酵物乙醇提取物中有3株无抗菌活性,另外7株均只对金黄色葡萄球菌有抑制作用.其中菌株YL0401发酵物乙醇提取物具有较高的抗菌活性,抑菌圈直径为30.7 mm,抑菌效果为72.7％.结合形态学特征和ITS-rDNA序列分析确定菌株YL0401为墙粘鞭霉(Gliomastix murorum).     

一株产高三尖杉酯碱内生真菌gyzy-6的分离与鉴定

高二尖杉酯碱(HHT)是重要的抗自血病药物,主要从珍稀濒危三尖杉属植物中提取.从贵州蓖子三尖杉中分离培养出20株菌落形态和显微结构有明显差异的菌株,经HPLC分析各菌株的发酵提取物,初步证明菌株gyzy-6能够生产高三尖杉酯碱.gyzy-6菌株ITS序列的系统发育分析结果表明gyzy-6为裂褶菌属真菌.     

鱼腥草中产槲皮素内生真菌的分离鉴定

【目的】探索鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）中是否存在产槲皮素的内生真菌。【方法】采用组织块法对鱼腥草内生真菌进行分离培养,分离纯化后收集菌丝利用薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）检测其代谢产物中的槲皮素,并分析其产量。采用形态学和内部转录间隔区（internal transcribed spacer,ITS）序列分析鉴定产槲皮素的内生真菌。【结果】从鱼腥草不同部位共分离得到9株内生真菌,其中由根中分离得到的菌株YXC-G1具有产生槲皮素的能力,为笋顶孢属（Acrostalagmus sp.）真菌,菌丝中槲皮素的含量为8.296 mg/g。【结论】从鱼腥草根部分离到1株产槲皮素的内生真菌YXC-G1,其可作为生产槲皮素的备选菌株。