山黧豆β-ODAP与硫代谢关系研究进展

山黧豆(Lathyrus sativus)是干旱、半干旱地区和贫困地区的重要饲料和粮食作物。长期以来,对于其内源毒素非蛋白氨基酸β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α,β-diaminopropionicacid,β-ODAP)的过度强调导致山黧豆优良的农艺性状和在膳食平衡中的作用遭受无视。随着全球气候变化,山黧豆优良的综合抗逆性重新引起了科学家的正视。本文根据山黧豆作为传统有毒作物的定位,对其β-ODAP代谢与硫代谢以及抗旱性关系的研究进行了综述,并指出含硫营养的改善是山黧豆育种的重要方向。     

南充地区引种扁荚山黧豆栽培情况及开发途径

<正> 山黧豆系一年生或多年生豆科草本植物,本属有100余个种,多分布在北半球温带地区,有广泛的适应性。在我国主要用于倒茬养地做绿肥和饲料。南充地区引种的萹荚山黧豆,系一年生或越年生豆科植物,原产于葡萄牙。     

山黧豆对动物繁殖的慢性毒性试验

该研究通过在饲料中加入特定比例的山黧豆粉,饲喂动物并进行繁殖试验,检测其受孕率、活产率、出生存活率和哺育成活率,证明山黧豆毒素(BOAA)未侵害生殖系统,不影响动物的繁殖生育。     

山黧豆低毒品种的筛选及栽培利用技术研究

对国内外引进的６５个山黧豆品种，经３年观察和农艺性状的测定以及β－草酰氨基丙酸（ＢＯＡＡ）、营养成分的分析，筛选出产量，蛋白质含量高，毒素含量低，经毒理学实验为安全饲用的黑龙江山黧豆－１，黑龙江山黧豆－２，西德山黧豆３个品种供生产中应用，还针对山黧豆作为饲草（料）推广应用中的播种量，磷肥施用量，压青及根茬肥效等栽培利用措施进行了探讨。     

紫花苜蓿MsZIP基因RNAi表达载体的构建及苜蓿转化

根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用农杆菌介导的方法,将该干扰载体成功转化到苜蓿中,得到9株抗性苗,选取其中的3株进行PCR鉴定,结果表明成功得到转基因苜蓿。     

草原山黧豆生长特性与营养成份分析

采集俄罗斯的草原山黧豆（Lathyrus pratensis L．）,在呼和浩特地区进行引种栽培试验,对其物候期、生长速度、根蘖性、物生量、根部结瘤量等生长特性进行观察和测定,并对牧草的常规营养成分进行分析。结果表明,草原山黧豆在呼和浩特地区的适应性较强,生长迅速,草产量高,在生长第4～5年鲜草产量可达26-32t／hm^2,单位面积分枝数3196-4600个／m^2,草层茂密,厚度可达15-27cm;有性生殖力弱,无性繁殖力强;叶量丰富,花期（鲜重）叶占66．99％,茎叶比为1：2．02;现蕾期干物质中粗蛋白含量为21．62％,粗脂肪为3．43％,茎叶柔嫩多汁。     

山黧豆毒素生物化学及去毒研究进展

对近年来山黧豆毒素的生物化学和去毒研究进展作了综述.毒素生物化学包括毒素的化学成分、生物合成以及外界环境对毒素生物合成的影响;去毒研究主要涉及毒素的遗传和低毒品种的选育、组织培养和遗传转化及食用前种子去毒方面的近况.就毒素的可能生物学意义进行了扼要讨论,对今后山黧豆的研究方向作了简要展望.     

五脉山黧豆开花动态及有性繁育系统的研究

观测了五脉山黧豆的开花动态,并用杂交指数(OCI)、花粉-胚珠比(P/O)方法测定了其有性繁育系统类型。结果表明,五脉山黧豆的花期持续45 d左右,盛花期为6月下旬左右。开花的日动态呈明显的双峰现象,2峰分别在8:00-11:00和14:00-15:00时出现。五脉山黧豆的杂交指数(OCI)=3,繁育系统为自交亲和,有时需要传粉者;花粉-胚珠比(P/O)=2 286.21,为兼性异交。得出其繁育类型为混交繁育系统,即自交和异交并存。五脉山黧豆的传粉系统不完善和虫害是结实率低的主要原因。     

山黧豆根腐病病原菌亚洲镰孢菌的分离鉴定

为了明确山黧豆(Lathyrus sativus)根腐病病原菌的分类地位,本研究于2018年8月在四川省南充市采集山黧豆根腐病病样,经组织分离法进行分离纯化,采用形态学和翻译延伸因子(Translation elongation factor 1-agene,EF-1α)基因序列分析相结合的方法对致病菌进行鉴定.结果表...     

紫花苜蓿光敏色素A基因片段的克隆及其RNA干扰载体的构建

苜蓿(Medicago sativa L.)的秋眠性是一种光周期效应。研究植物体内重要的光受体-光敏色素A(phyto-chromeA,phyA),可能揭示其调控苜蓿秋眠性的机理。为研究其与苜蓿秋眠性的关系,本研究根据RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术原理,以紫花苜蓿幼嫩叶片为材料,提取总RNA,选取基因cDNA序列同源性较低区域设计特异性引物,并引入相应的酶切位点,利用RT-PCR克隆phyA正、反向片段,经过3次亚克隆,构建了phyA的RNAi表达载体,制备了适合转染植物组织的农杆菌菌液,为获得缺失phyA植株创超了条件。     

紫花苜蓿MsCOL1基因RNAi表达载体的构建及转化

根据紫花苜蓿CONSTANS类似基因MsCOL1基因(登录号:DQ661682)序列,设计含有酶切位点的两对特异性引物,以紫花苜蓿cDNA为模板,分别合成用于构建干扰载体的正反义片段,将正反义片段分别插入表达载体pART27的相应位置,构建含有发夹结构的RNAi载体pART-S-A.利用农杆菌介导方法,将pART-S-A转化到紫花苜蓿中,经PCR检测,获得了7株转基因植株.经RT-PCR检测,证明转基因植株中MsCOL1基因表达量有所下降,其中5株的表达量明显的降低.结果表明,已构建成功具有发夹结构的RNAi载体pART-S-A,它可有效的抑制紫花苜蓿MsCOL1基因.     

捻转血矛线虫Hc38基因的克隆及其RNAi载体的构建

根据RNAi目标序列的选取原则和捻转血矛线虫Hc38基因(登录号AY749124)产物的保守结构域所在核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从绵羊捻转血矛线虫雌性成虫中扩增出约400bp cDNA序列,与AY749124序列同源性为99%.将目的序列亚克隆到RNAi载体L4440中,经PCR和酶切鉴定证明,成功构建了捻转血矛线虫对应于Hc38基因的RNAi载体L4440-Hc38.     

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

用PCR技术从腐蹄病C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原0.85kb纤毛蛋白基因（pili基因），利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取C型节瘤拟杆菌染色体DNA；用所设计的专一性引物进行PCR，扩增出pili基因；将pili基因克隆于TE载体，TE－pili重组质粒pili基因序列测定结果正确，用EcoRI酶切，低熔点胶回收pili基因片段，经klenow补平后，用T4DNA连接酶将其与中间载体pPLλ连接，将pili基因克隆于pPLλ载体，经BamHI、BamHI HindⅢ、Dral酶切鉴定pili基因正向插入pPLλ载体；扩增pPLλ-pili重组质粒，用BamHI酶切出2.1kb大小片段，回收后，与PME290表达质粒连接，转化宿主细胞PAK／2pfs中，对获得的重组质粒用BamHI酶切，出现2.1kb大小的带,证明含有目的基因。     

山黧豆种子萌发特异性蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

蛋白酶在种子萌发过程中参与了储藏蛋白水解等多种生理过程,为植物的生长发育提供氮源并在种子萌发的生化机制中有重要作用。本研究采用明胶酶谱法检测了山黧豆种子在不同萌发时间的蛋白酶表达情况。利用盐析、离子交换层析等方法从萌发6d的山黧豆种子中分离纯化了蛋白酶并对其基本酶学性质进行了研究。结果表明,山黧豆种子萌发特异性蛋白酶造成了种子萌发过程中高分子质量蛋白质的水解和较低分子质量蛋白质的积累。对纯化蛋白酶进行总蛋白含量、酶活力、酶比活力等检测表明,山黧豆蛋白酶的纯化倍数为6.58,蛋白得率为7.97%。山黧豆蛋白酶对金属离子的耐受性较高,添加Fe³⁺可以引起蛋白酶活性的显著增加。此外,该蛋白酶对血红蛋白和明胶的反应活性最高,其最适反应pH和温度分别为pH7和60℃。本研究为进一步研究山黧豆种子萌发过程中蛋白质水解与其内源毒素β-N-草酰-L-α,β-二氨基丙酸积累的相互关系奠定了基础。     

RNAi基因沉默的动力学研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种由小双链RNA介导的转录后基因沉默现象。在RNAi发挥基因沉默效能的过程中,许多因素都会直接或间接的影响最终的沉默效率和沉默时间。论文从siRNA类型的选择、siRNA的递送和细胞内的RNAi途径3个方面对RNAi途径中各个影响其效能发挥的因素及其解决方法做一综述,同时对描述RNAi基因沉默动力学的数学模型及其应用进行了介绍。     

山羊Zfy基因克隆分析及其敲除载体构建

旨在对西农萨能奶山羊Zfy基因进行克隆和生物信息学分析,并利用CRISPR/Cas9技术成功获得敲除Zfy基因的奶山羊成纤维细胞株,为进一步探索Zfy基因功能及性别调控提供基础数据.本研究以健康的西农萨能奶山羊为对象,采集3只3月龄公山羊睾丸组织并提取总RNA.根据NCBI中预测的山羊Zfy基因mRNA序列信息(Gen...     

牛皮蝇Hypodermin B 基因的克隆及原核表达载体构建

参照牛皮蝇Hypodermin B(HB)基因的核苷酸序列,设计一对引物,以牛皮蝇总RNA为模板利用RT—PCR扩增牛皮蝇HB基因,并对扩增基因进行克隆测序。序列分析表明,克隆的牛皮蝇HA基因与GenBank中已经登录的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97．2％和99．3％。同时,将该基因与原核表达载体．PGEX-4T-1连接,构建并获得阳性重组表达载体。