宁夏苦马豆内生真菌的分离与鉴定

为研究苦马豆（Swainsona salsula）中内生真菌的种属分类,对采自宁夏的苦马豆内生真菌进行分离培养和形态观察,对分离菌株的ITS序列进行扩增、测序和系统发育分析。从宁夏苦马豆植株的叶和茎中共分离出4个真菌菌株,编号分别为SS_NXB1、SS_NXF1、SS_NXG2、SS_NXA1,因植株未表现出任何病害症状,故确定其为内生真菌。根据形态特征和ITS序列,确定前3株真菌为枝顶孢属（Acremonium）真菌。因菌株SS_NXA1未产生分生孢子及GenBank数据库中缺少同源菌株的分类信息而未确定其分类地位。     

禾草内生真菌的多样性及意义

禾草内生真菌是一个多样性十分丰富的微生物类群,因其具有重要的生理和生态作用而成为当前国内外研究的热点。禾草内生真菌的多样性主要有种的多样性、宿主多样性、生境多样性、形态多样性以及遗传多样性。主要是感染冷季型禾草的香烛菌属(Epichloё)及其无性态Neotyphodium属。全球生态环境复杂、宿主植物多样性丰富,导致内生真菌的多样性更加丰富,从而会发现更多新的真菌分类单元,这在菌种收集和保藏方面独具优势。内生真菌可使禾草提高抗逆性并适应逆境甚至极端环境条件,这对于深入探讨内生真菌-宿主之间的相互作用,有目的性和科学性地构建新的禾草内生真菌共生体及植物微生态系统的研究都具有十分重要的意义。     

酿酒葡萄‘赤霞珠’叶内生真菌多样性研究

为探讨酿酒葡萄‘赤霞珠’叶片内生真菌群落结构和分布特征,本文采用贴片法对采自4个不同生境的 ‘赤霞珠’叶片可培养内生真菌进行分离,并通过分子生物学方法对分离的内生真菌进行鉴定。结果从采自四个生境的600个‘赤霞珠’叶片中共分离到内生真菌583株,归属于42个种22个属,其中链格孢属和黑孢属为优势属。德钦和石河子两地内生真菌分离率比较高, 大于1。而丘北的内生真菌多样性指数较其他生境高,为2.20。三种叶片中嫩叶的内生真菌的分离率和多样性指数明显低于成熟叶和老叶的。对不同生境‘赤霞珠’叶片的内生真菌的多样性指数及相似性分析结果表明,酿酒葡萄‘赤霞珠’叶片内生真菌菌群丰富存在一定的宿主专一性, 但多样性偏低。     

宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌的分离及鉴定

对宁夏黄花棘豆中产苦马豆素内生真菌进行分离和鉴定,为进一步研究疯草内生真菌合成苦马豆素的分子调控机理提供菌种和奠定基础。分离并纯化黄花棘豆植物组织中的真菌,采用气相色谱质谱联用法对各菌株菌丝中的苦马豆素进行分析,筛选能产生苦马豆素的内生真菌;紫外线照射和黑暗交替培养诱导内生真菌产孢;提取真菌DNA,扩增和测定真菌甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GPD）、内部转录间隔区（internal transcribed space,ITS）和线粒体核糖体小亚基（mitochondrial small subunit,mt SSU）基因序列,进行同源性比对和遗传进化分析,对其进行种属分类和命名。本研究从宁夏黄花棘豆中共分离到5株真菌,其中菌株NX-FEL001菌丝中含有苦马豆素,经诱导培养,该菌株能产生分生孢子及分生孢子梗等结构;序列同源性和系统发育分析结果表明,该菌株与Undifilum真菌的亲缘关系最近,根据形态结构和分子进化分析结果将菌株NX-FEL001鉴定为Undifilum oxytropis。     

产苦马豆素疯草内生真菌及苦马豆素研究进展

疯草(Locoweed)是黄芪属、棘豆属和苦马豆属中含苦马豆素(swainsonine, SW)有毒植物的统称,具有抗旱耐寒,分布广泛的特性。牲畜长期采食疯草会引起蓄积性中毒,严重时导致死亡,严重危害了我国草原畜牧业的可持续发展。疯草内生真菌是疯草具有毒性的根本原因,其毒性代谢产物即苦马豆素。论文对疯草在中国的种类与分布、疯草与内生真菌互作关系、疯草内生真菌种属及检测方法、疯草内生真菌传播方式与内生真菌育种;苦马豆素的来源、毒理机制及生物合成通路最新研究进展做一综述,以期为疯草植株及其内生真菌的改造利用方面提供参考。     

苦豆子植物生物碱的提取及TLC分析

本试验采用稀酸水、有机醇结合超声波提取法对苦豆子生物碱进行了提取、薄层层析(TLC)检查、氯仿萃取,提取获得4种生物碱成分,其中有两种生物碱分别与标准参碱、标准槐果碱和标准槐定碱对应,有待进一步定性分析;试验结果表明,采取稀酸溶液和90%的有机醇溶剂结合超声波的提取方法对苦豆子植物中生物碱的提取切实可行。     

甘肃中华羊茅内生真菌形态多样性

本研究以采自甘肃夏河桑科草原和甘加草原的野生中华羊茅(Festuca sinensis)为材料,通过对种子和茎髓部内生真菌带菌的检测,并在PDA培养基上进行分离培养,总共得到48个内生真菌菌株.再经水琼脂培养基次级培养以促进产孢,依据菌落生长形态、分生孢子、分生孢子梗等形态学特征的现察与测定,最终可将其分为3个形态群....     

甘肃棘豆内生真菌种群多样性

将采集于青海省祁连县甘肃棘豆的茎和叶部表面消毒后分别置于黑暗和光照条件以及PDA和BDA 2种培养基上进行内生真菌分离纯化,采用形态学和分子生物学分析技术鉴定种属,并计算多样性指数。结果显示,629块植物样品中共分离到内生真菌433株,分属9个科15个属28种,不同的培养条件下优势菌属不同;多样性指数计算结果显示,香农-维纳指数（H）为1.99,均匀度指数（E）为0.60,辛普森指数（D）为0.257。结果表明,采集于青海省祁连县的甘肃棘豆内生真菌多样性比较丰富,可为今后深入探讨甘肃棘豆内生真菌遗传多样性奠定基础,并为产苦马豆素目标菌株的筛选,提供丰富的内生真菌后备菌株。     

棘豆属植物中产苦马豆素内生真菌的研究进展

苦马豆素(SW)是棘豆属(Oxytropis)植物引起家畜中毒的主要原因,而苦马豆素的产生与棘豆属植物的内生真菌有关。目前,棘豆属植物中能够产生苦马豆素的内生真菌不断被发现,所以文章对产苦马豆素内生真菌的寄主植物、形态、培养条件及其与苦马豆素的关系、对寄主植物的影响等进行了综述,为棘豆属植物的有效利用及家畜中毒的防治提供理论依据。     

甘草内生真菌多样性及群落结构

以新疆塔里木盆地的光果甘草(Glycyrrhiza glabra)和胀果甘草(G.inflate)为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术研究甘草内生真菌的多样性及群落结构。结果显示,光果甘草和胀果甘草间及同一种类不同组织间的内生真菌多样性和群落结构均存在明显差异。其中,胀果甘草根(B1)的内生真菌多样性最丰富,光果甘草果(L4)的内生真菌多样性最差。对DGGE条带进行回收测序,共获得25条序列,归于枝顶孢属(Acremonium)、绿僵菌属(Metarhizium)、绿僵虫草属(Metacordyceps)、镰刀菌属(Fusarium)、链格孢属(Alternaria)、枝孢属(Cladosporium)、锤舌菌属(Leotiomycetes)、链格孢属(Alternaria)、帚枝霉属(Sarocladium)、假裸囊菌属(Pseudogymnoascus)、曲霉属(Aspergillus)11个真菌属,其中链格孢属为优势菌属,占总数的32%。甘草根、茎、叶、果、皮组织的内生真菌存在丰富的多样性,其中根与茎组织多样性最丰富。研究结果表明,新疆塔里木盆地药用植物甘草蕴藏着丰富的内生真菌资源,可作为一种较理想的分离内生真菌的植物来源。     

苦豆子种子萌发特性研究

用NaCl和NaNO₃处理苦豆子(Sophora alopecuroides L.)种子,以不同土壤类型和不同深度播种研究其萌发率、萌发指数、相对盐害率、胚根和胚轴生长及解除胁迫后生理指标的变化。结果表明:随着盐浓度的增加,苦豆子种子的萌发率、萌发指数、胚根、胚轴生长均呈下降趋势。低浓度NaCl和NaNO₃(25～150 mmol·L^-1)对种子萌发抑制作用不明显;高浓度的NaCl和NaNO₃(>200 mmol·L^-1)显著抑制种子萌发。盐胁迫解除后,萌发率随着原盐胁迫浓度的增加呈升高趋势。不同播种深度及土壤类型以1～3 cm沙土中生长较好,黑钙土、栗钙土次之,大于等于7 cm时则抑制其出苗。在同一深度条件下,出苗率表现为沙土>黑钙土>栗钙土。     

苦豆子总碱对小鼠急性毒性试验研究

采用改良寇氏法测定苦豆子总碱提取物对小鼠腹腔注射的急性毒性,评价其安全性,为临床安全用药提供依据。给试验组小鼠灌服不同浓度的苦豆子总碱提取物,观察给药后小鼠的临床表现与死亡情况,采用改良寇氏公式计算LD50及LD50的95%可信限,结果表明,苦豆子总碱经腹腔注射的LD50为559.24 mg/kg,95%可信限为471.95-663.59 mg/kg。试验结果提示,苦豆子总碱的毒性较低,临床用药安全可靠。     

甘肃苦豆子中挥发性成分分析研究

对甘肃地区苦豆子全草中挥发油组分进行提取、分析和鉴定,测得苦豆子全草挥发油含量为1.9%,并用GC/MS法从其挥发油中分离出22种化合物,用峰面积归一法通过数据处理系统得出各化学成分在挥发油中的百分含量为61.89%。     

苦豆子种子形态特性及发芽条件研究

野生苦豆子种子硬实率高,因种皮不透水和不透气,而具有深休眠性。本研究观测了野生苦豆子种子的形态特征、种子大小、千粒重和硬实率,并对H₂SO₄破除种子硬实的处理浓度和时间,植物生长调节剂和聚乙二醇(PEG)处理对种子萌发和幼苗生长的影响,以及种子田间萌发的适宜土壤含水量和播种深度进行了研究。结果表明:苦豆子种子长为3.865mm,宽为3.358mm,厚为2.321mm,千粒重为20.775g,硬实率达99%;破除硬实处理适宜的H₂SO₄浓度为65%,时间是20min;0.02%GA3对提高种子发芽速度和幼苗生长量具有显著的作用,此外PEG处理种子能显著提高幼苗的生物量;苦豆子种子田间萌发的适宜土壤含水量为8%～12%,播种的最适深度是1～3cm。     

桑树内生真菌的分离、鉴定及其多样性分析

用组织分离法从不同桑树品种的器官组织中共分离出内生真菌114株,经显微形态观察,鉴定114株内生真菌分别归属于镰孢霉属Fusarium、链格孢属Alternaria、柱霉属Scytalidium等21个属,表明桑树内生真菌具有丰富的生物多样性。不同桑树品种树体内的内生真菌分布有一定差异。同一桑树品种不同器官组织的内生真菌种类和数量差异较大,根中最多,茎中次之,叶中最少。其中:镰孢霉属为根中优势种群,链格孢属为茎、叶中的优势种群;丛梗孢属Monilia和镰孢霉属菌株在根、茎、叶中均能分离到,其它属的菌株只存在于其中的某一个或两个器官组织。研究结果有助于进一步探讨桑树内生真菌与生理活性物质的关系。     

环境因子对苦豆子种子萌发和幼苗生长的影响

研究光照、温度、水分和土壤盐分等因子对苦豆子(Sophora alopecuroides L.)种子萌发的影响。结果表明:在持续光照、持续黑暗和16 h光照/8 h黑暗下种子萌发最适宜的温度为25℃;在16~8 h光暗交替下,25℃/16℃昼夜变温发芽率最高;种子萌发对光照不敏感;种子萌发最适土壤含水量为8%~13%;种子发芽期对NaCl的耐受浓度为1.2%。     

苦豆子根、茎、叶浸提液对4种牧草种子萌发的化感作用

牧草种子的萌发直接关系牧草的生产,本文通过苦豆子根、茎、叶浸提液对紫花苜蓿、红豆草、无芒雀麦和老芒麦4种种子萌发的影响,发现不同部位、不同浓度的苦豆子浸提液对4种牧草种子萌发均存在不同程度的化感作用。通过所测指标,发现苦豆子不同部位浸提液浓度升高至0.065 g·mL^-1时,4种牧草种子萌发均受到了明显抑制(P<0.05)。其中,从化感综合效应指数来看,苦豆子化感作用的强弱与浸提液浓度有关,高浓度下抑制作用更为明显。因此,本研究结果期望为植物化感作用能够在草地农业生态系统中的实际应用提供一定的参考依据。     

青藏高原不同海拔梯度黄花棘豆内生真菌多样性研究

为了分析不同海拔梯度黄花棘豆（Oxytropis ochrocephala）内生真菌的多样性及群落结构,进而为调控其主要成分-苦马豆素产量提供新的途径。本试验采用高通量测序技术测定青藏高原不同海拔梯度（2 512,3 005,3 490,3 977和4 493 m）黄花棘豆中内生真菌的ITS序列,观测真菌多样性和群落组成随海拔升高的变化情况,并运用CANOCO 5.0软件对真菌优势群落与植物营养和土壤环境因子间的关系进行冗余分析（Redundancy analysis,RDA）。结果表明：不同海拔梯度植物营养成分及土壤理化性质间均差异显著;从5个海拔梯度的黄花棘豆的样本中获得3615854条ITS序列,在97%序列相似性基础上可划分为750个分类单位（Operational Taxonomic Units,OTUs）。真菌群落的丰富度（Chao1）指数以海拔4 493 m最高,为254.10,而多样性（Shannon）指数以海拔3 005 m最高,为3.05。子囊菌门（Ascomycota）和担子菌门（Basidiomycota）是青藏高原黄花棘豆内生真菌的优势类群。RDA分析结果显示,真菌优势类群与海拔、粗灰分和土壤有机碳呈极显著相关（P<0.01）,与氮、磷和无氮浸出物呈显著相关（P<0.05）。海拔、植物营养及土壤养分含量均会影响黄花棘豆内生真菌多样性。     

Effect of Alcohol Extract from Different Parts of Sophora alopecuroides on the Motility of Isolated Rat Small Intestine

To explore the effect of extract from different parts of Sophora alopecuroides picked in autumn on gastrointestinal motility, alcohol extract of bean, pod, leaf and shoot apex of Sophora alopecuroides at increasing dose(0.5% to 8.0%) were added to Tyrode's solution where rat isolated small intestine were bathed.The motility of small intestine was recorded by biological signal processing system.The results showed that the contract frequency and amplitude were significantly decreased when the concentration of each parts of Sophora alopecuroides reached 2.0% to 4.0% compared with that before treatment(P<0.05) and it was the dose dependent relation ship, but had no significant effect on the contract tension(P>0.05).Moreover, the inhibition effect of bean was the strongest among the four parts.Alcohol extract of bean at a dose of 2.0% inhibited the excitatory effect caused by cholinergic M-agonists, bethanechol, and the inhibition couldn't be reversed.The results concluded that different parts of Sophora alopecuroides could inhibit the contraction of rat small intestine, and the inhibition might happen partly by blocked M-receptor, indicating that Sophora alopecuroides are expected to be used to relieve gastrointestinal over contraction due to some reasons.     

苦豆子生物碱抑菌抗炎作用研究

将苦豆子生物碱配制成不同的浓度,通过试管法测定其最小抑菌浓度;以小鼠为实验动物,选用0.3 mL不同浓度(0.5,1.0,1.5 mg/mL)的苦豆子生物碱注射剂研究苦豆子生物碱的抗炎作用。结果表明,苦豆子生物碱对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌、无乳链球菌、多杀性巴氏杆菌均有一定的抑制作用。1.0 mg/mL浓度对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀、小鼠棉球肉芽肿及小鼠CMC囊中的白细胞游出均有极显著的抑制作用(P<0.01),对二甲苯所致小鼠皮肤毛细血管通透性增高有显著抑制作用(P<0.05);1.5 mg/mL浓度对上述4个实验的小鼠均有极显著抑制作用(P<0.01)。苦豆子生物碱具有抑菌作用,其注射剂具有抗炎作用,作用与浓度呈正相关性。