RAPD技术在植物遗传多样性研究中的应用

从品种鉴定、分类、种质分析与收集、物种起源和进化、濒危植物检测 5个方面就RAPD技术在植物遗传多样性研究中的应用进行了综合评述 ,并对RAPD技术的局限性及其改进途径进行了讨论     

垂枝杉种质资源的RAPD鉴定及遗传多样性研究

利用RAPD标记对垂枝杉种质资源进行了遗传多样性分析，并与杉木其它类型作对照，对其进行鉴定。结果表明：垂枝杉群体具有较高的遗传多样性，群体间变异占总变异的15．6％；3个垂枝杉群体遗传相似度高，与其它杉木类型的遗传相似度低；垂枝杉具有稳定的遗传性和一致的表现型。从分析结果可以得出垂枝杉是杉木的一个自然变异类型。     

芸薹种蔬菜遗传多样性的RAPD初步分析

本文对芸薹种蔬菜基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ初步分析,并就ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应条件的优化进行了探讨。结果表明：各个亚种或变种的品种之间存在着丰富的遗传多样性。     

菊属植物遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD分子标记技术分析了菊属10个野生种和12个栽培品种间的遗传关系和多样性。从50个随机引物中筛选出了14条引物,对供试材料的DNA进行扩增,共获得169条清晰可辨的谱带,多态位点比率为96.4%,多态性较高。POPgene32软件计算结果表明:种(品种)间相似系数变幅在0.195 4~0.565 6;平均有效等位基因数为1.515 8,平均Nei’s基因多样性指数为0.321 6,平均Shannon信息指数为0.479 4。并且菊属野生种的多态条带、多态位点比率、平均有效等位基因数(Ne)、平均Nei’s基因多样性指数(He)及Shannon信息指数值均高于栽培菊花,表明野生种的遗传多样性比栽培菊花丰富。根据Jaccard相似系数进行UPGMA聚类结果表明,"若狭滨菊"与栽培菊花关系较近,野菊和小红菊与栽培菊花亦较近.栽培菊花基本可以按照花径聚类。     

辣椒遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD标记对从国内外收集的灯笼椒、长椒、圆锥椒和簇生椒等1年生辣椒(CapsicumannuumL.)自交系和杂交组合的遗传多样性进行了研究.采用14个随机引物、22个参试材料共扩增出1258条带,其中多态条带比率(PPB)接近50%,表明供试辣椒之间的遗传基础较窄.D=0.69时,聚类分析将供试材料分为3类:灯笼椒,圆锥椒,第三类包括簇生椒(朝天椒)和长辣椒(牛角椒);D=0.75时,供试材料分成4类,将簇生椒和长辣椒区分开来;D=0.77时,进一步区分长椒的杂种一代和自交系.聚类分析结果表明,4个辣椒变种中,簇生椒与长椒亲缘关系较近,与圆锥椒次之,与灯笼椒最远.     

柴松遗传多样性的RAPD分析

以柴松现存2个居群各50个个体为样本,利用随机扩增多态DNA(RAPD)标记研究了其遗传多样性。50条引物共扩增出349个位点,其中多态位点为321个。用POPGEN32版软件对数据进行了分析,结果表明:(1)柴松的遗传多样性水平很高。在物种水平上,多态位点百分率(PPB)为92.51%,Nei’s基因多样度指数(H)为0.317 3,Shannon多样性信息指数(I)为0.478 2,总基因多样度(Ht)为0.317 4。在居群水平上,平均多态位点百分率为89.92%,H和I平均值分别为0.302 5和0.456 6;(2)居群间的遗传分化较低。居群间遗传分化系数(Gst)为0.046 7,基因流(Nm)为10.201 8,Shannon’s居群分化系数((Isp-Ipop)/Isp)为0.045 2。表明柴松的遗传变异主要存在于居群内,占总变异的95%以上,居群间的遗传变异不足5%。并根据柴松的遗传多样性现状提出了相应的保护策略和措施。     

广西眼镜蛇遗传多样性RAPD分析

对广西眼镜蛇的血液基因组进行RAPD扩增,从30条随机引物中筛选出18条可扩增出清晰多态条带的引物。结果表明,18条随机引物共产生了257个位点,其中多态性位点152个,多态率为59.1%;个体间的平均遗传相似系数为0.8186;个体间平均遗传距离为0.1814,群体Shannon信息指数为0.3170;Nei’s基因多样性指数为0.2112;等位基因观察数为1.3563;有效等位基因数为1.5914。表明广西眼镜蛇具有较强的遗传多样性。     

花生RAPD反应体系的优化及其遗传多样性分析

为保护和利用花生种质资源,对花生RAPD反应条件进行了优化及遗传多样性分析.优化后的RAPD总反应体积为20μL,其中,2×Taq PCR Mix 10μL、引物1.6 pmol、模板20 ng.利用优化后的反应条件和筛选出的24个引物在22份花生样品中扩增得到了134条清晰的电泳条带,其中,多态性条带数为112条,多...     

濒危植物崖柏遗传多样性的RAPD分析

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)分子标记技术对5个崖柏(Thuja sutchuenensis)天然居群的遗传变异进行研究。7个引物共检测44个位点,其中多态位点34个,占77.27%。与其它濒危植物相比,崖柏种内遗传多样性较为丰富。但居群间遗传分化占到33.68%。居群间遗传距离与空间距离不相关。根据崖柏居群遗传特征,初步探讨保护策略。     

枝角类RAPD条件优化和遗传多样性分析

以蒙古裸腹(MoinamongolicaDaday)和多刺裸腹(M.macrocopaStraus)为材料,对枝角类RAPD扩增条件进行了摸索和优化,结果表明,枝角类PCR扩增反应的最佳体系为:在25μL体积中,模板DNA25ng/μL,dNTPs0.1mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.1μmol/L,Mg2+1.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。按照优化的RAPD条件进行实验,重现性良好。2种裸腹在盐胁迫条件下的种群遗传多样性分析表明,同种裸腹不同生存盐度之间的种群遗传相似度较高,分别为0.9134和0.9038;而多刺裸腹和蒙古裸腹两个种间的遗传相似度相对较低,约为0.5～0.6。     

枝角类RAPD条件优化和遗传多样性分析

以蒙古裸腹(MoinamongolicaDaday)和多刺裸腹(M.macrocopaStraus)为材料,对枝角类RAPD扩增条件进行了摸索和优化,结果表明,枝角类PCR扩增反应的最佳体系为:在25μL体积中,模板DNA25ng/μL,dNTPs0.1mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.1μmol/L,Mg2+1.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。按照优化的RAPD条件进行实验,重现性良好。2种裸腹在盐胁迫条件下的种群遗传多样性分析表明,同种裸腹不同生存盐度之间的种群遗传相似度较高,分别为0.9134和0.9038;而多刺裸腹和蒙古裸腹两个种间的遗传相似度相对较低,约为0.5～0.6。     

锥栗不同品种遗传距离的RAPD分析

运用RAPD法对不同锥栗品种间基于DNA基础上的遗传距离进行了研究，建立了锥栗PCR反应的标准程序，得到的扩增片段大小在500－2000bp之间，确定了10个品种基于DNA分子水平上的相似系数。当相似系数等于0．74时，可把这10个品种分为4类，即“油栗仔，蔓榛，中尖嘴，猴嘴榛”“红紫榛，大尖嘴”“仁嘴栗，乌棒”和“嫁接毛榛”。图2表2参6     

福建若干荔枝古树资源的RAPD分析

利用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,从104个十聚体随机引物筛选出13个引物对福建荔枝著名的古树以及相关品种等12份材料的基因组DNA进行扩增,共得到78条扩增谱带,其中2条为共同带,多态性程度达97.44%,平均每条引物扩增的谱带数目为6条.采用遗传标记计算遗传资源相似性系数,进行聚类分析,并构建树状分析图.结果表明:现在栽培的陈紫品种与宋家香的亲缘很近,可能来源于宋家香;而元红与西禅寺“宋荔”亲缘关系较远.应用RAPD技术为荔枝古树遗传资源的鉴定和分类提供了新的途径.     

广西和广东地区施氏獭蛤3个自然群体的形态差异和遗传多样性分析

采用形态特征分析和RAPD技术对采自广西北海、防城和广东湛江的施氏獭蛤Lutraria siebaldii 3个自然群体和越南大獭蛤Lutraria maxima 1个群体的遗传多样性进行分析。结果表明：用20条引物从施氏獭蛤3个群体和越南大獭蛤1个群体的145个样品中共扩增出428条带,大小为125～5 000 bp,每条引物扩增出6～17条带;多态位点比例为76.1%～91.9%,平均多态位点比例为84.5%,遗传距离为0.1321～0.2441;对施氏獭蛤3个群体和大獭蛤1个群体进行UPGMA聚类分析,施氏獭蛤北海群体和防城群体先聚为一体,再与湛江群体聚类,最后与越南的大獭蛤群体聚为一个整体;用8条引物可以区分施氏獭蛤3个自然群体和大獭蛤群体,可作为群体特征标记;形态差异分析结果显示,湛江、北海和防城施氏獭蛤3个群体的形态较接近,而越南大獭蛤群体的外部形态和遗传距离均与施氏獭蛤3个群体差异较大,已分化成为同属不同种;主成分分析表明,主成分1、主成分2和主成分3的贡献率分别为49.13%、17.18%和14.02%,累计贡献率为80.33%;施氏獭蛤3个群体判别函数的判别准确率P1为88.9%～100.0%,P2为86.7%～100.0%,综合判别率为95.9%。这说明施氏獭蛤3个群体的遗传多样性均处于较高水平,种质状况良好,且具有很好的养殖前景。     

中国鹅5个品种遗传多样性的随机扩增多态DNA分析

用４０个１０－寡核苷酸随机引物对中国鹅的５个品种－狮头鹅,皖西白鹅,太湖鹅,浙东白鹅和四川白鹅进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析。结果表明,用筛选出的１４个引物共扩增出１７４个ＤＮＡ片段,其中的４８个（占２８．２％）在５个品种间表现为多态性。根据扩增ＤＮＡ片段的异同,计算了各品种和个体间的遗传多样性指数和遗传距离指数。同时,用分子进化遗传分析软件（ＭＥＧＡ）以ＵＰＧＭＡ法和ＮＪ法对遗传距离指     

切割潜蝇茧蜂2个地理种群的RAPD比较分析

切割潜蝇茧蜂[Psyttalia incisi(Silvestri)]是寄生橘小实蝇幼虫—蛹期的重要寄生蜂。应用经筛选的8个10 bp随机引物,运用随机扩增多态DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术比较其漳州种群和引进种群(美国夏威夷)的分子多态性。结果表明,2个地理种群A、B分离物之间相异系数均大于0.7,地理种群内部分离物相异系数分别为0.3和0.12,差异较小。不加权算术平均组对法(unweighted pair group mothed with arithmetic mean,UPGMA)聚类结果表明,4个分离物在0.76的相异水平上可以聚为2个群体,而在0.12的相异水平上才能聚为4个群体。表明A、B地理种群之间相异性较高,差异较大。     

中国五大湖三角帆蚌群体遗传多样性的RAPD分析

用OPJ和OPM两组40条10碱基随机引物,对中国五大湖三角帆蚌地理群体及诸暨养殖蚌进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析,其中12个引物的扩增结果具有丰富的群体多态性,多态率为55.6%～80%。群体内遗传相似度大小依次为:鄱阳湖(0.8889),太湖(0.8694),洞庭湖(0.8111),诸暨(0.7746),洪泽湖(0.7348),巢湖(0.7185)。依据群体间遗传距离指数及分子系统树,表明洞庭湖群体和洪泽湖群体亲缘关系最近,鄱阳湖群体则与巢湖群体的亲缘关系最近,并且诸暨人工养殖群体与鄱阳湖和巢湖的群体比较接近。     

濒危树种金钱松RAPD体系的建立和遗传多样性分析

通过优化随机扩增多态性DNA（RAPD） 反应体系,对浙江省不同来源的金钱松Pseudolarix amabilis进行遗传多样性分析。结果表明：18条随机引物在62个样品中可检测到172个可重复位点,其中多态性位点有170个,多态性比率为99.2%。聚类分析的结果表明：同一来源金钱松材料聚为一类,说明金钱松天然群体的RAPD多态性分类和其地理分布有一定的关系,但也有特殊个体不一致,表明金钱松天然种群体存在较高的遗传多样性,并建议对金钱松进行就地保存和迁地保存。图2表3参31     

WHBE兔遗传特异性的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔进行了遗传分析.用10个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增.根据电泳结果选用其中8个引物扩增的条带进行遗传分析,共检测到107条扩增片段,其中多态性片段32条,占29.91%,反映了家兔品系间的遗传变异.多态性统计分析表明,WHBE免和日本大耳白兔的遗传相似度最高,为0.7948.其中4个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出不同品系的特征条带,表明WHBE兔与日本大耳白兔和新西兰兔之间有遗传的相似性,也存在遗传差异.这些结果表明应用RAPD技术可以很好地检测家兔不同品系间以及同一品系不同个体间的亲缘关系.