苜蓿总皂甙含量的遗传变异及其与农艺性状的相关分析

 【目的】通过对苜蓿总皂甙含量与农艺性状的相关分析找出一个能快速标记总皂甙含量高低的性状,探索总皂甙含量的遗传变异规律。【方法】以耐湿热苜蓿新品种渝苜一号为材料,测定100个苜蓿单株,从中选出5个高皂甙植株和5个低皂甙植株。【结果】通过各单株后代系的试验确定了这10个植株的总皂甙遗传力在0.118到0.745之间变化,后代系的变异系数在15.54%到28.81%之间变化,高低皂甙群体的遗传力分别为0.636和0.208,高皂甙群体的遗传力明显高于低皂甙群体。苜蓿总皂甙含量与株高、叶色、虫害程度、干重和干物质率的相关分析及通径分析的结果表明：叶色与总皂甙含量呈极显著负相关（r=-0.405**）,且叶色与总皂甙含量的的相关关系主要是直接效应（P=-0.422**）;干重与总皂甙含量的相关主要是通过株高、叶色和干物质率的间接作用。【结论】通过常规育种方法要育成低皂甙苜蓿品种较为困难,而一些高皂甙含量的后代系可作为高皂甙苜蓿品种的育种材料;苜蓿的叶色可以作为快速识别苜蓿总皂甙含量高低的标记。     

紫花苜蓿MsSQE1的克隆及对皂甙合成的功能分析

【目的】鲨烯环氧酶(squalene epoxidases,SQE)是苜蓿皂甙合成途径中的一种限速酶,与苜蓿皂甙的合成密切相关。通过对苜蓿鲨烯环氧酶(MsSQE1)基因的克隆及在苜蓿中过表达,探究鲨烯环氧酶对皂甙合成的作用机制。【方法】以模式植物蒺藜苜蓿鲨烯环氧酶基因序列设计引物,同源克隆苜蓿MsSQE1。对MsSQE1进行生物信息学分析;通过基因枪轰击技术,使MsSQE1在洋葱表皮瞬时表达,进行亚细胞定位。利用qRT-PCR方法分析该基因在根、茎、叶中的表达水平,以及在紫外辐射、ABA和GA3条件下的表达模式。在茉莉酸甲酯(MeJA)的诱导下,分析MsSQE1的转录水平,及对苜蓿皂甙含量的影响。利用根癌农杆菌转化体系,获得过表达MsSQE1的阳性转基因植株,并测定转基因植株的皂甙含量。【结果】克隆了MsSQE1的cDNA序列,开放阅读框1 578 bp,编码525个氨基酸,等电点为8.59。同源性比对分析,其氨基酸序列与蒺藜苜蓿中SQE1氨基酸序列同源性为98.6%,与拟南芥的同源性为80%。亚细胞定位显示,MsSQE1可能定位于细胞膜。组织特异性表达分析显示,MsSQE1在叶中的表达量最高,茎中次之,根中的表达量最低。在紫外辐射、ABA和GA3的诱导表达显示,紫外辐射诱导24 h,叶中表达量最高;GA3(50μmol·L~(-1))和ABA(100μmol·L~(-1))处理,均为8 h叶中表达量最高;MeJA处理能诱导MsSQE1表达量上调的同时苜蓿总皂甙含量也随着MsSQE1表达的上调而增加。分析过表达MsSQE1转基因苜蓿和转空载体苜蓿株系发现,MsSQE1的表达水平和总皂甙含量均升高,其中MsSQE1的表达水平是对照的3.11—9.45倍,总皂甙含量比对照提高14.26%—28.05%,暗示MsSQE1是苜蓿皂甙合成途径中的一种关键调节酶。【结论】从豆科牧草紫花苜蓿中克隆了MsSQE1并进行功能分析。在苜蓿中过表达MsSQE1能增加苜蓿总皂甙含量,暗示MsSQE1的表达影响苜蓿皂甙的生物合成,可能对皂甙的合成有重要的调节作用。     

紫花苜蓿MsSQE1的克隆及对皂甙合成的功能分析

【目的】鲨烯环氧酶（squalene epoxidases,SQE）是苜蓿皂甙合成途径中的一种限速酶,与苜蓿皂甙的合成密切相关。通过对苜蓿鲨烯环氧酶（MsSQE1）基因的克隆及在苜蓿中过表达,探究鲨烯环氧酶对皂甙合成的作用机制。【方法】以模式植物蒺藜苜蓿鲨烯环氧酶基因序列设计引物,同源克隆苜蓿MsSQE1。对MsSQE1进行生物信息学分析;通过基因枪轰击技术,使MsSQE1在洋葱表皮瞬时表达,进行亚细胞定位。利用qRT-PCR方法分析该基因在根、茎、叶中的表达水平,以及在紫外辐射、ABA和GA₃条件下的表达模式。在茉莉酸甲酯（MeJA）的诱导下,分析MsSQE1的转录水平,及对苜蓿皂甙含量的影响。利用根癌农杆菌转化体系,获得过表达MsSQE1的阳性转基因植株,并测定转基因植株的皂甙含量。【结果】克隆了MsSQE1的cDNA序列,开放阅读框1 578 bp,编码525个氨基酸,等电点为8.59。同源性比对分析,其氨基酸序列与蒺藜苜蓿中SQE1氨基酸序列同源性为98.6%,与拟南芥的同源性为80%。亚细胞定位显示,MsSQE1可能定位于细胞膜。组织特异性表达分析显示,MsSQE1在叶中的表达量最高,茎中次之,根中的表达量最低。在紫外辐射、ABA和GA₃的诱导表达显示,紫外辐射诱导24 h,叶中表达量最高; GA₃（50 μmol·L ^-1）和 ABA（100 μmol·L ^-1）处理,均为8 h叶中表达量最高;MeJA处理能诱导MsSQE1表达量上调的同时苜蓿总皂甙含量也随着MsSQE1表达的上调而增加。分析过表达MsSQE1转基因苜蓿和转空载体苜蓿株系发现,MsSQE1的表达水平和总皂甙含量均升高,其中MsSQE1的表达水平是对照的3.11—9.45倍,总皂甙含量比对照提高14.26%—28.05%,暗示MsSQE1是苜蓿皂甙合成途径中的一种关键调节酶。【结论】从豆科牧草紫花苜蓿中克隆了MsSQE1并进行功能分析。在苜蓿中过表达MsSQE1能增加苜蓿总皂甙含量,暗示MsSQE1的表达影响苜蓿皂甙的生物合成,可能对皂甙的合成有重要的调节作用。     

玉竹中甾体皂甙提取工艺研究

通过正交试验,以甲醇为溶剂,采用回流提取法,对玉竹中甾体皂甙提取方法进行优化,并对两年生及三年生玉竹中甾体皂甙含量进行测定。结果表明,提取时间4 h、提取3次、药液比1∶4(m/V,g∶mL,下同)为最佳提取工艺,两年生玉竹中甾体皂甙含量高于三年生。     

藜麦皂甙的测定研究

用高氯酸比色法对藜麦中皂甙的测定进行了研究,并且测定了水洗后藜麦皂甙的含量变化。结果表明,用香草醛-高氯酸比色法测定藜麦中的皂甙含量是一种方便快捷、结果稳定的方法。测定藜麦皂甙选用齐墩果酸为标准品,波长为560 nm,标准曲线方程为y=0.196 6x-0.013 7,并且R2显示在此范围内有良好的线性关系。提取样品皂甙的条件为:提取液乙醇的体积分数为70%,料液比为1∶30,提取温度为50℃。结果测定的藜麦皂甙含量为10.709 mg/g,水洗之后藜麦中皂甙含量有所减少,清洗的次数越多,藜麦中皂甙的含量越少,清洗3次后藜麦中总皂甙含量由原来的10.709 mg/g降低为6.077 mg/g,减少了43.25%。并且水洗去除藜麦种皮中的皂甙占总去除皂甙的87%。     

黄姜根中薯蓣皂甙元的提取及研究

分析了薯蓣皂甙元的结构并对其提取工艺的优缺点进行了比较 ,论述了薯蓣皂甙元的纯化过程及含量分析 ,为薯蓣皂甙元的深入研究提供参考。     

树脂吸附法提取黄芪皂甙

对树脂吸附法提取黄芪皂甙进行了研究,通过试验确定了树脂吸附法提取黄芪皂甙的工艺条件。单因素试验结果表明：综合考虑黄芪皂甙粗品得率和皂甙含量,用体积分数为６０％的乙醇提取,树脂柱长度为５５ｃｍ,体积分数为８０％的乙醇洗脱时效果比较好。     

鲜样前处理方式对绞股蓝总皂甙提取率的影响

采用单因素分析法,超声提取法提取,分别对绞股蓝鲜叶杀青时间、杀青强度、烘干时间、烘干强度对其总皂甙提取率影响进行了研究,同时考察了失水量与皂甙含量的关系.结果表明,总皂甙提取率:杀青样>烘干样>鲜叶样>风干样;失水量与皂甙含量之间无规律;高强度杀青4 m in皂甙得率最高,其次是80℃烘干5h得率也较高;随杀青强度减弱、杀青时间减少、烘干温度降低、烘干时间减少皂甙得率逐步减少;高温微波干燥和低温可作为保存皂甙的方法.     

苜蓿皂甙对绵羊瘤胃内纤维物质降解动力学的影响

选用12只2周岁体况良好、体重30kg左右的安装有永久性瘤胃瘘管的内蒙古半细毛羯羊,随机分成4组,每组3只,饲喂4种不同水平苜蓿皂甙日粮。结果表明,苜蓿皂甙对羊草在绵羊瘤胃中降解有影响。当苜蓿皂甙添加量为8 g/d时,羊草中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)在瘤胃内的表观降解率最高。     

苦瓜活性成分提取工艺研究

通过单因素实验(提取温度、提取时间、料液比和乙醇浓度)和正交试验探索苦瓜皂甙提取的最佳工艺条件.结果表明,苦瓜皂甙提取的最佳工艺条件为:提取温度70 ℃,提取时间3 h,料液比1∶20,乙醇浓度90%,在此条件下提取的苦瓜活性成分-皂甙粗提物含量最高.     

苜蓿皂苷对X射线照射小鼠造血系统的影响

为研究苜蓿皂苷(Alfalfa saponin)对X射线照射小鼠造血系统的影响,选取雄性SPF级昆明系小鼠90只,随机分为对照组和试验组,研究25、50和100mg/ml的苜蓿皂苷对X射线照射强度为4.0Gy小鼠造血系统的影响和不同剂量X射线对添加25mg/ml的小鼠造血系统的影响。结果表明:1)预防性给予25mg/mL苜蓿皂苷,可显著减轻4.0Gy的X射线对小鼠外周血白细胞(White blood cells,WBC)、红细胞(Red blood cells,RBC)和血小板(Platelets,PLT)数量的降低程度(P0.05),增加照射小鼠的骨髓有核细胞(Bone marrow nucleated cells,BMC)数(P0.05),显著降低微核率(P0.05)。2)预防性给予25mg/mL的苜蓿皂苷,相同照射剂量的试验组小鼠白细胞、红细胞、血小板和骨髓有核细胞数显著高于对照组(P0.05),微核率显著低于对照组(P0.05)。3)随照射强度增加,25mg/ml的苜蓿皂苷保护小鼠受辐射损伤的能力下降。综上,苜蓿皂苷可缓解X射线对小鼠造血系统和染色体的损伤,苜蓿皂苷浓度与射线强度存在量效关系,需要根据不同的照射强度添加不同浓度的苜蓿皂苷。     

油茶皂苷的几种粗提工艺比较

比较了几种常见的提取油茶皂苷的工艺,并对得出的较优的提取工艺做了进一步的探讨。研究表明,水提法和醇提法都可作为油茶皂苷的粗提工艺,提取过程中可根据需要适当调节提取液的pH值,来提高所得产品的得率或纯度。     

麦冬总皂苷不同提取方法的比较研究

[目的]为工业提取麦冬总皂苷选出一种新的提取方法。[方法]以短葶山麦冬皂苷C为标准品,利用等吸收双波长消去法、薄层层析法、高效液相色谱法进行含量分析,对生物酶法和常规醇提法提取的麦冬总皂苷进行比较研究。[结果]在2~15μg/ml浓度范围内,麦冬皂苷浓度(C)与吸收差值(△A)成线性关系,其线性回归方程为:△A=-0.005 51+6.532 45C,R=0.999 21。3种方法的测定结果一致表明生物酶法提取的麦冬总皂苷浓度较常规醇提法的大。等吸收双波长消去法测得生物酶法提取的麦冬总皂苷得率为5.66%,而常规醇提法的仅为2.36%。生物酶法提取的短葶山麦冬皂苷C的浓度为0.081 34 mg/ml,是常规醇提法(0.039 06 mg/ml)的2.08倍。[结论]采用生物酶法提取麦冬总皂苷可以提高提取得率。     

超声耦合双水相体系提取茶皂素的工艺优化与机制探讨

[目的]茶皂素是一种具有广阔应用前景的天然活性物质,纯度是限制其应用和价值的关键因素.探究超声耦合双水相提取(Ultrasound-assisted two-phase aqueous extraction,UAATPE)油茶粕茶皂素的工艺条件及其提取机制,以开发纯度高且高效的提取技术,为油茶粕高值化利用提供技术指导....     

纤维素酶解法提取剑麻总皂苷工艺研究

[目的]研究纤维素酶解法提取剑麻总皂苷工艺。[方法]采用纤维素酶解-乙醇浸提法,以熊果酸作对照品,5%香草醛-冰醋酸-高氯酸作显色剂,分光光度法测定提取物中总皂苷含量。考察酶质量浓度、酶解温度、pH、酶解时间及固液比对剑麻总皂苷提取率的影响。[结果]单因素试验显示,酶质量浓度、酶解温度、pH、酶解时间对提取率影响较大,固液比的影响较小。L9(34)正交试验结果显示,在选定的因素水平中,对剑麻总皂苷提取率影响程度为pH酶解温度酶解时间酶质量浓度。方差分析pH、酶解温度对提取率影响显著,酶解时间影响较显著。最佳工艺条件是:pH=5.5,酶解温度45℃,酶解时间100 min,酶质量浓度0.18 mg/m L,固液比1∶20,在此工艺条件下,剑麻总皂苷提取率为19.20%。[结论]该研究为纤维素酶解法提取剑麻总皂苷提供参考。     

茶皂素提取纯化技术及生物活性研究进展

茶皂素是一种天然非离子型表面活性剂,广泛应用于食品、药品、材料、日化和农业等领域.近年来,随着研究开发的深入,茶皂素的多种生物活性日益受到各行各业的关注.但受提取纯化技术限制,茶皂素纯度较低,导致茶皂素产业的实际经济价值远低于预期.目前国内外对茶皂素提取技术的研究主要包括辅助提取、超临界提取、闪式提取、生物提取、亚临界...     

浙江红山茶茶籽饼中茶皂素提取工艺研究

[目的]为浙江红山茶茶籽饼中茶皂素的开发利用提供帮助。[方法]以浙江红山茶茶籽饼为材料,通过单因素试验和正交试验研究乙醇浓度、温度、时间和液料比对茶皂素提取的影响。[结果]各因素对茶皂素提取的影响大小为乙醇浓度提取时间液料比提取温度;最佳提取工艺条件:乙醇浓度为80%,液料比为3∶1 ml/g,提取时间为5 h,温度为70℃。[结论]确定了浙江红山茶茶籽饼中茶皂素的最佳提取工艺。     

“青海444”燕麦中皂苷提取工艺研究

[目的]研究利用索氏浸提法提取燕麦中皂苷的工艺条件。[方法]以乙醇？正丁醇为溶剂,以皂苷Re为标准品,采用分光光度法定量分析燕麦提取液中总皂苷含量,利用正交试验设计研究料液比、乙醇浓度、浸提温度对提取率的影响。[结果]各因素对皂苷提取率影响的主次顺序依次为：乙醇浓度〉料液比〉浸提温度;最佳提取条件：料液比为1∶7,乙醇浓度70%,浸提温度60℃;在此条件下,提取率为2.504%。[结论]该方法操作方便,简单易行,具有推广应用价值。     

苜蓿多糖提取及测定方法的比较

本文对水煮法和醇提法两种不同提取苜蓿多糖方法以及蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法两种不同的苜蓿多糖测定方法进行了比较。结果发现，在进行苜蓿粗多糖的提取时，利用水煮法提取粗多糖可显著提高多糖得率。用蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法两种不同的测定方法来测定多糖含量，在未脱蛋白质前，两种测定方法皆具有良好的稳定性、精密性以及重现性，但都受到样品中蛋白质干扰严重；而在脱蛋白后，蒽酮-硫酸法在检测样品不同稀释度的重现性稍优于苯酚-硫酸法。