黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达水平

Boule基因是DAZ家族成员之一,在生殖细胞中特异表达是精子发生过程中减数分裂的关键调控因子,其表达缺乏可引起减数分裂阻滞和精子生成障碍,导致雄性不育。为揭示Boule基因mRNA表达水平与犏牛雄性不育关系,本研究利用实时荧光定量PCR法,对黄牛、牦牛和犏牛睾丸组织中Boule基因mRNA表达进行定量分析。结果表明:Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平相对都比较高,黄牛与牦牛差异不显著(P>0.05);而Boule基因在黄牛和牦牛睾丸组织中的表达水平显著高于犏牛,黄牛、牦牛与犏牛差异显著(P<0.05)。结果提示,Boule基因在犏牛睾丸组织中低表达与犏牛雄性不育相关,可作为研究犏牛雄性不育的重要候选基因。     

牦牛、犏牛睾丸组织中SYCP 3基因mRNA表达水平研究

本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著（P〈0．01）。睾丸和附睾组织切片显示,牦牛睾丸组织中可见各级生精细胞,附睾内可见发育良好的精子,而犏牛睾丸组织中无次级精母细胞和更高级生精细胞、附睾内未观测到精子,与人和小鼠SY-CP3基因缺失或表达水平降低出现的表型一致,可以认为SYCP3基因的表达水平可能与犏牛的雄性不育有一定的关系。     

犏牛雄性不育研究进展

犏牛是牦牛与普通牛杂交所产后代,在肉乳性能方面具有明显的杂种优势,在高寒牧区占有重要的经济和生态地位。然而犏牛雄性不育,该现象的发生机制一直是牦牛杂交改良中关注的热点。大量研究表明,雄性犏牛睾丸组织发育不良、相关生精基因表达紊乱,同时,DNA甲基化、RNA甲基化和非编码RNA修饰等表观遗传因素在犏牛雄性不育发生过程中起着重要作用。文章从组织学、细胞学、内分泌学和组学等方面总结了犏牛雄性不育机理的研究进展,旨在为解析犏牛雄性不育机制提供技术参考,并为牦牛杂交改良提供研究思路。     

催乳素受体基因mRNA表达与山羊绒毛生长关系的研究

为探讨绒山羊皮肤组织中催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因mRNA表达水平与绒山羊绒毛生长的关系,通过埋植褪黑激素(me-latonin,MT)刺激绒毛提前生长,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)技术检测绒山羊从绒毛开始萌发到绒毛快速生长期间皮肤组织中PRLR基因mRNA表达量的变化。结果显示:在内蒙古白绒山羊皮肤中总的催乳素受体(T-PRLR)基因mRNA表达量从6至11月逐渐降低,而MT埋植组的短型催乳素受体(S-PRLR)mRNA表达水平在绒毛快速生长的7、8、9月份显著高于对照组(P<0.05)。结果表明,山羊绒毛生长可能与S-PRLR mRNA表达水平升高有直接的关系。     

催乳素受体基因mRNA在绒山羊皮肤中表达水平的研究

本实验旨在探明绒山羊从绒毛生长前到绒毛生长旺盛期总的催乳素受体(T-PRLR)基因和短型催乳素受体(S-PRLR)基因mRNA在皮肤中表达量的变化,为进一步探明山羊绒毛生长机理奠定基础。实验选用18只年龄、体重相近的内蒙古白绒山羊,随机分为2组,每组9只,其中一组皮下埋植褪黑激素(M T)刺激山羊绒毛提前萌发和降低血液中催乳素(PR L)浓度。mRNA的表达量利用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测。结果表明:在内蒙古白绒山羊皮肤当中T-PRLR基因mRNA表达量从6—11月呈现逐渐降低的规律,但S-PRLR mRNA相对T-PRLR mRNA表达水平呈现上升趋势。本实验结果显示,伴随着绒毛生长速度的改变PRLR基因的可变剪接率也发生了改变,在绒山羊绒毛生长过程中S-PRLR起了主要作用。     

Calpain 1．5 mRNA表达量与鸭肉嫩度关系的研究

选择60只70日龄左右、体重相似高邮鸭、樱桃谷鸭和番鸭,屠宰后取左半膛测定剪切力,用荧光实时定量PCR法,以β-actin基因为内标,检测calpain 1.5基因的表达量与嫩度的关系,并进行品种间比较.通过对3个品种鸭剪切力的测定.高邮鸭>樱桃谷鸭>番鸭,差异均不显著(P>0.05);3个品种都是胸肉<腿肉,即胸肉嫩度大于腿肉,差异显著(P<0.05).说明3个品种鸭肉嫩度由高到低依次为番鸭>樱桃谷鸭>高邮鸭.鸭胸肉与腿肉calpain 1.5基因mRNA表达量差异显著(P<0.05).肉的剪切力和calpain 1.5基因mRNA相对表达量呈对数关系(0.5相似文献   

实时荧光定量PCR检测多重耐药大肠杆菌AcrA基因mRNA表达水平

体外单一药物诱导标准大肠杆菌ATCC25922,获得了耐氯霉素（CHL,MIC≥256 mg/L）、耐环丙沙星（CIP,MIC≥256 mg/L）、耐水杨酸钠（SAL,MIC≥275 mg/L）、耐四环素（T,MIC≥512 mg/L）的菌株。选取ATCC25922株,4株中度耐药菌SAL（175）、CHL（64）、T（64）、CIP（128）,4株高度耐药菌SAL（275）、CHL（256）、T（512）、CIP（256）,和临床分离的3株耐药大肠杆菌H1、H9、H10,通过实时荧光定量RT-PCR方法检测外输泵AcrA基因的mRNA表达水平。系统自动分析软件显示,Ct值与标准质粒浓度的对数之间存在良好的线性关系,回归系数为0.992。检测结果表明：H10、CHL（256）、CIP（256）拷贝数最高,达1015拷贝/μL;T（512）、H9、T（128）、SAL（275）、H1为1014拷贝/μL;CHL（128）、T（64）、CHL（64）为1013拷贝/μL;ATCC25922为1012拷贝/μL。不同程度耐药株AcrA基因的表达量不同,临床分离株和诱导的各高耐药菌株均比ATCC25922株表达量高,且差异极显著（P≤0.01）。这说明不同耐药程度的11株菌cDNA的量存在差异,AcrA基因转录水平与耐药水平成正相关。     

犏牛雄性不育相关lncRNA的鉴定与分析

旨在分析成年健康牦牛和犏牛(3～4岁)睾丸组织中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)的表达谱,从而探究lncRNA与犏牛雄性不育机制的关联性,为解释犏牛雄性不育的机理提供理论依据。采集成年(3～4岁)健康牦牛、犏牛各3头的睾丸组织,构建cDNA文库后进行高通量测序,筛选出差异的lncRNA,通过对差异显著的lncRNA与mRNA位置关系以及结合能的判定预测顺式作用(cis)和反式作用(tran)的靶基因,并进行GO、KEGG功能分析。结果表明,共得到牦牛和犏牛候选lncRNA转录本分别为20 363和24 133个,两个文库筛选出6 178个显著差异lncRNA,其中有2 470个在犏牛睾丸组织与牦牛比较上调,3 708个下调。筛选得到差异显著lncRNA的候选靶基因2 676个,这些基因参与58个功能分类,共涉及306条通路;其中主要富集的通路包括轴突指导、内吞、Hedgehog等信号通路。综上表明,部分lncRNA介导的靶基因PTGDS、IGF2、MEST、GLIS3、NOTCH2、HOXA10、HOXA11与犏牛雄性不育相关,lncRNA在犏牛的生殖发育中对其雄性不育具有重要的调控作用。利用RNA-Seq技术筛选出成年牦牛和犏牛睾丸组织lncRNA,并进行差异分析,为探讨犏牛雄性不育的机制提供更完善的转录组数据。     

仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量与其血浆睾酮水平关系研究

对不同时期仔猪血浆睾酮含量和睾丸组织c-jun mRNA表达量进行了检测,以初步推测c-jun mRNA表达与睾酮分泌的关系,为进一步体外研究原癌基因c-jun对睾酮分泌的影响奠定基础。试验选择1、3、5周龄仔猪作为研究对象,利用睾酮ELISA检测试剂盒检测血浆中睾酮含量;采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测睾丸组织c-jun mRNA的表达。结果表明,仔猪血浆睾酮水平随周龄增加而显著升高,其中3周龄时睾酮含量最高;c-jun在各周龄睾丸组织中均有表达,其中3周龄仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量最高。因此,仔猪睾酮分泌与c-jun mRNA表达量可能存在相关性。     

新疆5个品种羊不同月龄MSTN基因mRNA表达水平及其与生长性状相关性分析

为了探讨不同品种绵羊肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)表达水平及其与生长性状(体重、体高、体长、胸围和管围)的关联性,试验采用实时荧光定量 PCR方法比较阿勒泰羊、吐鲁番黑羊、也木勒白羊、哈萨克羊、巴什拜羊不同月龄(初生及1、2、3、4、5月龄)肌肉和脂肪MSTN mRNA的表达水平,运用SPSS 19.0软件分析与其生长性状的相关性.在肌肉中:初生时,阿勒泰羊、哈萨克羊、巴什拜羊MSTN基因mRNA表达水平均明显低于其他各月龄;也木勒白羊3月龄MSTN基因mRNA水平均显著低于其他各月龄(P<0.05);阿勒泰羊、吐鲁番黑羊MSTN基因mRNA在4月龄表达水平最高;哈萨克羊MSTN基因mRNA初生时表达水平最低,5月龄表达水平最高.在脂肪中:也木勒白羊MSTN基因mRNA表达水平初生时显著低于其他各月龄(P<0.05);阿勒泰羊、也木勒白羊、巴什拜羊MSTN基因mRNA 5月龄表达水平最高,巴什拜羊MSTN基因mRNA 5月龄显著高于其他各月龄(P<0.05);哈萨克羊MSTN基因mRNA 2月龄表达水平最高,显著高于5月龄(P<0.05).相关性分析结果发现,MSTN基因mRNA表达水平与生长性状多呈负相关关系.阿勒泰羊在肌肉和脂肪中MSTN基因mRNA表达水平与其生长性状均呈负相关关系;吐鲁番黑羊MSTN基因mRNA在肌肉中的表达水平与体高、体长呈负相关,其余均呈正相关;也木勒白羊MSTN基因mRNA在肌肉中的表达水平与胸围、管围呈正相关,在脂肪中表达水平与体长呈正相关,其余均呈负相关;哈萨克羊在肌肉和脂肪中除与体长呈正相关外,其余均呈负相关;巴什拜羊在肌肉中MSTN基因mRNA表达水平与体长、管围呈正相关,其余均呈负相关.MSTN基因mRNA在不同月龄不同品种间的表达水平存在差异性,无固定表达模式;且与生长性状多呈负相关关系,与部分体尺性状呈正相关关系.MSTN基因mRNA表达水平可能与生长性状和骨骼生长有直接关系.     

鸡TLR4基因表达水平与沙门氏菌感染关系的研究

为了研究鸡TLR4（toll like receptor 4）基因表达在调控鸡沙门氏菌感染中的作用,80只3日龄SPF鸡按随机分为2组,处理组经口注射鸡白痢沙门氏菌悬液10⁸ CFU/mL 0.50 mL,对照组注射同剂量生理盐水。每个处理组分别在感染后1、3、7和14 d随机取8只鸡处死,迅速取脾脏样品用于RNA提取。采用SYBR GreenⅠ染料实时荧光定量PCR（QPCR）,比较处理组和对照组TLR4基因mRNA相对表达量的变化。结果显示,在4个时间点,与对照组相比,处理组TLR4基因高表达,差异显著(P<0.05);尤其在感染后3和7 d,差异达到极显著水平(P<0.01)。结果表明,鸡沙门氏菌感染后,TLR4基因mRNA表达上调,TLR4基因在沙门氏菌感染中发挥重要作用。     

籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因和8个新ESTs的定量研究

采用实时定量PCR技术定量检测产蛋前期和产蛋期籽鹅卵巢组织中铁蛋白重链基因(FTH)和8个新ESTs(ODEUG01~ODEUG08)的mRNA表达水平。结果表明:产蛋期籽鹅卵巢组织中FTH和8个新ESTs的相对表达量分别比产蛋前期卵巢组织高13.25、7.68、11.82、14.23、8.25、15.14、9.78、6.48、14.21倍。本研究进一步证实,FTH和8个新ESTs在产蛋期籽鹅卵巢组织中高效表达,FTH和8个新ESTs可能参与籽鹅卵巢功能的调节,并影响籽鹅的产蛋性能。     

利用关岭牛及其杂交牛生产雪花牛肉的试验研究

选择8～10月龄的关岭牛、西×关杂交牛（西门塔尔牛♂×关岭牛♀）、安×关杂交牛（红安格斯牛♂×关岭牛♀）、利×关杂交牛（利木赞牛♂×关岭牛♀）各8头,进行育肥生产雪花牛肉的试验研究。结果表明：在同一饲养管理条件下,西×关杂的宰前活重、屠宰率、净肉率、肉骨比值、眼肌面积、高档肉块重最高,依次为利×关杂、安×关杂、关岭牛;西×关杂组、利×关杂组、安×关杂组的宰前活重、眼肌面积和高档肉块重差异不显著（P〉0．05）,但均显著高于关岭牛组（P〈0．01）;关岭牛组和安X关杂组的肌内雪花状脂肪含量均为3级,优于西×关杂组和利×关杂组;综合评价关岭牛组和安×关杂组的胴体等级均为3A级,西×关杂和利×关杂的胴体等级均为2A级。结果显示,关岭牛虽然产肉性能不高,但机体内并不缺少优秀的遗传基因,具备选育成优质高产肉牛品种的种质基础。     

草原红牛CAPN1基因mRNA表达特性分析

为了进一步揭示CAPN1的功能,本研究采用实时荧光定量PCR技术对草原红牛初生牛与成年牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、瘤胃、十二指肠、背最长肌8种组织中的CAPN1mRNA表达水平进行了分析。结果表明：CAPN1基因在组织中普遍表达,但表达量存在差异。且成年牛的CAPN1基因在肺脏和瘤胃组织中的表达显著高于初生牛（P〈0.05）,成年牛在肝脏、脾脏、肾脏和背最长肌组织中CAPN1基因的表达水平极显著高于初生牛（P〈0.01）。     

欧洲不同良种肉牛杂交利用青海黄牛后代生长发育试验研究

为了研究青海省肉牛杂交改良效果,筛选适应高寒地区肉牛最佳杂交组合,从而为今后开展肉牛杂交工作提供有力的依据,通过6年的试验研究,测定分析了蓝本、皮本、利本、夏本、德本F1牛和青海黄牛的初生,3月龄,6月龄,12月龄,18月龄体重及体尺指标及杂交后代对青海高原高寒气候的适应性观察。结果显示:五个杂交组合F1代不同年龄的生长速度和体尺指标均明显优于青海黄牛(P<0.01)说明良种肉牛改良效果显著,在不同杂交组合后代的比较中,蓝本F1牛生长发育最快,各阶段体重及体尺指标显著高于青海黄牛,比皮本、利本、夏本、德本F1牛也有明显提高。     

玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响

为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM 期(18、24 h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养.GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37％、23.17％、33.07％)均极显著低于对照组(82.96％,P＜0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P＜0.01).本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量.结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P＜0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P＜0.01).结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响.     

贵州地方黄牛不同组织中PPARγ基因表达水平研究

试验旨在研究威宁牛、思南牛、关岭牛和黎平牛不同组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferators-activated receptors γ,PPARγ）基因mRNA的表达差异。以这4个贵州地方品种黄牛为试验动物,提取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织的总RNA,设计PPARγ基因的实时荧光定量引物,以牛GAPDH基因为内参,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ基因在4个品种不同组织中mRNA的相对表达量。结果显示,PPARγ基因在4个品种黄牛的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脂肪和背最长肌组织中均有表达,但在脂肪组织中的表达量高于其他组织,且差异极显著（P<0.01）,在脾脏和肺脏中也有较高表达,而在肾脏、肝脏、心脏和背最长肌中表达量较低;不同品种PPARγ基因的表达在部分组织中存在差异。研究表明,PPARγ基因在不同组织中的表达量存在差异,可能与其在不同组织中的功能有关,而品种对于PPARγ基因的表达影响不大。     

脂肪酸合成酶基因mRNA在马身猪和大白猪3种组织中的发育性表达研究

为探究脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)基因在猪不同组织中的发育性表达规律,本研究采用实时荧光定量PCR技术检测马身猪和大白猪7个阶段(初生、30、60、90、120、150和180日龄)肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪3种组织中FAS基因mRNA的相对表达量。结果表明,品种间比较,FAS基因mRNA在马身猪和大白猪肝脏、背最长肌和背部皮下脂肪组织各生长发育阶段中的表达差异均达到显著或极显著(除肝脏组织初生阶段和背部皮下脂肪组织120日龄阶段)(P<0.05;P<0.01)。FAS基因mRNA在大白猪组织间的表达差异与生长发育相关,150和180日龄阶段,背部皮下脂肪组织中表达量极显著高于肝脏和背最长肌组织(P<0.01),初生、30日龄和90日龄阶段,背最长肌中的表达量极显著高于肝脏和背部皮下脂肪组织(初生阶段无脂肪组织样)(P<0.01);而马身猪整个发育过程中,背最长肌组织表现为优势组织,极显著高于其他2种组织(除120日龄阶段外)(P<0.01),脂肪组织表达量次之,肝脏组织中表达量较少。品种、日龄、组织及品种与日龄、组织与日龄的互作效应对FAS基因mRNA的相对表达量均有极显著影响(P<0.01)。FAS基因直接参与脂肪酸的合成,对猪肉质性状的遗传改良具有重要意义。     

雌激素对奶牛输卵管上皮细胞前列腺素E2和F2α合成酶mRNA表达的影响

为了揭示雌激素(estrogen,E₂)对奶牛输卵管上皮细胞中前列腺素E₂合成酶(PGES)和前列腺素F_2α合成酶(PGFS)mRNA表达的影响,探讨E₂对奶牛输卵管生殖生理的调节作用,本试验采用了体外培养荷斯坦奶牛输卵管上皮细胞技术,分不同时间(0、2、4、8、16、24和48 h)和不同浓度(10^-12、10^-11、10^-10、10^-9 mol/L)添加雌激素E₂(以不加雌激素作空白对照),采用荧光定量PCR 技术检测PGES和PGFS mRNA表达。不同浓度的E₂或同一浓度不同刺激时间的E₂均能增加PGES的表达,但4 h浓度为10^-10 mol/L时与空白对照相比差异极显著(P<0.01),而PGFS在24 h添加浓度为10^-12 mol/L E₂时与空白对照相比差异极显著(P<0.01)。试验结果表明,E₂对培养的奶牛输卵管上皮细胞PGES和PGFS mRNA的表达有促进作用,说明雌激素E₂对前列腺素酶PGES和PGFS mRNA的表达具有调控作用。     

渤海黑牛肉品品质的研究

对 1 0头中上等膘情年龄为 0 .5～ 1岁渤海黑牛进行了不同性别和不同部位肌肉的理化性状及组织学结构测定分析 ,结果表明 :渤海黑牛的眼肌面积为 37.45± 5.38cm2 ,嫩度和熟肉率分别为 3.53kg和 54.0 2 % ;肉品中蛋白质含量较高 ,平均为 2 1 .68% ,脂肪含量较低 ,平均 1 .2 4 % ,属典型的“高蛋白低脂肪”食品 ,总氨基酸含量为 1 8.75% ;肌纤维直径平均为 38.0 1 μm,肌纤维密度为 395.97根 /mm2 ,肌肉纤维纤细 ,肉质嫩。不同性别、部位肌肉的理化特性及组织学结构多数差异不显著 ( P>0 .0 5)。