猪圆环病毒（PCV2）综述之一—由来与相关猪病

猪断奶后衰竭综合征(PMWS)的主要病原体,已被世界各国学者确认为圆环病毒(PCV2)。本病最早发现于加拿大(1991),1996年暴发该病,同时此病很快在美国、西班牙、英国、丹麦、德国、荷兰、比利时、立陶宛、奥地利和意大利发生。除上述国家外,近年来,日本、韩国、泰国、捷克、墨西哥、匈牙利、中国以及台湾地区均有此病发生和流行,另外PCV2与许多猪相关疾病的发生有关。除PMWS之外,PDNS(猪皮炎与肾炎综合征)、PNP(增生性坏死性肺炎)、PRDC(猪呼吸道综合征)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。     

PCV2和PCV3双重纳米PCR方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种同时检测猪圆环病毒2型（PCV2）和猪圆环病毒3型（PCV3）的双重纳米PCR（nano-dPCR）方法,同时应用该方法对PCV2和PCV3进行检测。参考GenBank中登录的PCV2和PCV3型基因序列分别设计特异性引物,对nano-dPCR的反应条件进行优化;同时考察所建立的nano-dPCR检测方法的特异性和敏感性。结果显示,所建方法的特异性和敏感性良好,对PCV2和PCV3两种病毒的最低核酸检测量分别为93.2和91.6拷贝/μL,其敏感性比普通PCR高100倍。应用该方法对送检的265份临床样本进行检测,结果显示,PCV2和PCV3在猪群中存在普遍感染,PCV3和PCV2的阳性率分别为16.6%和14.7%,混合感染阳性率为6.8%。临床样品的检测结果表明,本试验建立的nano-dPCR方法为PCV2和PCV3早期感染进行快速、敏感鉴别诊断提供了新方法。     

如何在田间评估PCV2疫苗的免疫效果

免疫控制猪圆环病毒2型(Porcine Circovirus 2,PCV2)有时被认为是一项不可思议的工作。然而,免疫预防成功的基础是科学。了解该过程的背景后,在求助于免疫接种时将有助于了解哪些结果是可以预测到的,哪些结果是无法预测到的。     

圆支清疫苗中猪圆环病毒2型对猪肺炎支原体的免疫增强作用

用相同量猪肺炎支原体(Mhyo)和不同量猪圆环病毒2型(PCV2)混合后的4组疫苗分别免疫BALB/c小鼠、新西兰大耳白兔和健康仔猪,测定小鼠、兔和仔猪血清中PCV2和Mhyo抗体水平,并在仔猪二免后进行Mhyo济南系强毒攻击.结果:小鼠和兔免疫疫苗后产生的Mhyo抗体水平随着疫苗中PCV2抗原含量的增加而提高.仔猪免...     

嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒（PCV1—2）及真核表达质粒pcDNA3．1／V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0．07～0．60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组（3头）肌肉注射免疫10^3.5 TCID50的PCV1-2／头,2组（2头）肌肉注射真核表达质粒200μg／头,3组（2头）肌肉注射空载体（pcDNA3．1）200μg／头,4组（2头）不免疫作为攻毒对照组。于免疫后42d,PCV1—2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体。免疫后42d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×10^4.5 TCID50／头和10^6 TCID50／头。攻毒后21d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒栽量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组。这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗。     

嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及PCV2 ORF2真核表达质粒对商品猪的免疫保护

应用本实验室构建的嵌合型猪圆环病毒(PCV1-2)及真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-ORF2作为免疫原免疫母源抗体ELISA效价在0.07～0.60不等的商品猪,9头猪随机分为4组,1组(3头)肌肉注射免疫103.5TCID50的PCV1-2/头,2组(2头)肌肉注射真核表达质粒200μg/头,3组(2头)肌肉注射空载体(pcDNA3.1)200 μg/头,4组(2头)不免疫作为攻毒对照组.于免疫后42 d,PCV1-2组及真核表达质粒组产生了PCV2抗体.免疫后42 d所有组攻毒PCV2和PRRSV,剂量分别为2×104.5TCID50/头和106TCID50/头.攻毒后21 d,攻毒对照组猪淋巴结比免疫组显著肿大,免疫组猪血清、淋巴结中PCV2病毒载量低于对照组,攻毒对照组猪淋巴结中PCV2抗原含量高于免疫组.这些结果表明,嵌合型PCV1-2及真核表达质粒肌肉注射免疫商品猪后,对PCV2感染能产生保护性免疫应答,有可能成为候选疫苗.     

浅谈PCV2、PRRSV和肺炎支原体间的相互作用

猪呼吸道疾病是由多种因素引起的复杂性疾病,如多种传染性致病原的同时感染、对环境产生应激、饲喂方式生产体系的改变和不同的管理方式等引起。猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪肺炎支原体被认为是引起猪呼吸道疾病综合征（PRDC）的主要病原体。传统观点认为PRDC的主要致病原为PRRSV和猪肺炎支原体,但就目前来说PCV2已成为主要的病原体之一。PCV2可以导致多种综合征,统称为圆环病毒相关性疾病（PCVAD）。虽然有大量的文献表明PCV2可以增加PRDC的检出率,但在没有PCVAD的时候PCV2是否对肺部疾病造成损伤是有争议的。越来越多的证据表明PCV2在PRDC中对肺部的病变微不足道,而起重要作用的是PCVAD。本文对三种病原体之间的相互作用进行探讨,为疫苗的使用提供参考。     

安徽省部分地区生猪PCV2感染情况及疫苗免疫效果调查

为摸清当前安徽省猪群中PCV2感染情况及疫苗的免疫效果,本试验采集了12个猪场的289份猪扁桃体和289份猪血清样品,采用荧光定量PCR方法检测扁桃体中的PCV2,采用ELISA方法检测血清中PCV2抗体。试验结果显示:猪群PCV2感染率为11.8%,其中大型猪场、中型猪场、小型猪场感染率分别为8%、0%、26%,生产母猪、后备母猪、保育猪及育肥猪感染率分别为12%、16%、0%、17%;猪群PCV2抗体阳性率92.4%,其中大型猪场、中型猪场、小型猪场阳性率分别为96%、82%、98%,生产母猪、后备母猪、保育猪、育肥猪阳性率分别为100%、91%、82%、98%。安徽省猪群存在PCV2隐性感染,其中小型猪场及育肥猪群感染率较高;不同养殖规模、不同生长阶段猪群猪圆环病毒疫苗免疫效果良好。     

四川省PPV与PCV2的病原流行病学调查

从四川省21个规模化猪场采集样品273份,利用PCR方法检测并分析了猪细小病毒和猪圆环病毒的感染及混合感染情况,结果共检出PPV病原阳性样品47份（占17．22％）;PPV阳性猪场8个（占38．1％）;种猪的感染率较高,仔猪感染率相对较低;检出PCV2病原阳性样品143份（占52．38％）,PCV2阳性猪场18个（占85．7％）;PCV2感染随猪年龄的增长而升高;检出PPV和PCV2混合感染样品29份（占10．62％）;同时存在PPV和PCV2的猪场6个（占28．7％）,混合感染主要集中在母猪和保育仔猪阶段。仅有3个猪场未检出PPV和PCV2病原,占14．3％。该结果说明PPV与PCV2及其混合感染在四川省流行广泛,对养殖业构成了较严重的危害。     

PCV2、PRRSV和MPS共感染情况下怎样使用疫苗来控制猪呼吸道病综合征

PCV2(猪圆环病毒2型)、PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征病毒)和MPS(猪肺炎支原体)被认为是PRDC(猪呼吸道病综合征)的3个主要病原,对全球猪业生产造成了巨大影响.虽然关于3种主要病原体的相互作用的研究较为广泛,但掌握针对这3种病原的疫苗怎么联合使用才能达到最好的效果也是十分必要的.众所周知,PRRSV与MPS可...     

PCV2仔猪疫苗全球应用经验

来自世界各地的最新研究报告证实,对仔猪接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗可给不同的气候条件、饲喂方式和管理措施下的养猪场带来众多的好处。本文将对有关PCV2疫苗一次免疫方案的全球应用情况进行全面的综述。     

关于母猪免疫CIRCOVAC~后PCV2特异性细胞向仔猪传递的研究

<正>猪的上皮绒毛膜胎盘可阻止免疫球蛋白通过胎盘向胎儿的转移,因此仔猪在出生时只能从初乳中获得所有的转移性免疫力。摄入的初乳是仔猪获得母源抗体的     

猪圆环病毒2a/2b亚型病毒株灭活疫苗及其重组Cap蛋白亚单位疫苗的交互免疫实验

为评价猪圆环病毒(PCV)2a/2b两种基因型病毒株及其重组Cap蛋白(rCap)之间的交互免疫,本研究采用PCV2a-LG株和PCV2b-YJ株制备了2种病毒灭活疫苗,及其重组杆状病毒表达的2种Cap蛋白(PCV2a-rCap和PCV2b-rCap)亚单位疫苗.选用8周龄BALB/c鼠165只,随机分成11组,每组15只,用上述4种疫苗各免疫2组,以PCV2a或PCV2b株攻毒.攻毒后,所有鼠均未见肉眼可见的临床症状和病理变化.采用IPMA法检测抗体,4种疫苗于免疫第3周抗体转阳,第5周抗体效价达到1:200～1:800倍,其中PCV2a-rCap免疫组抗体效价最高.2种灭活苗和PCV2a-rCap免疫组攻击同型或异型病毒株均可以获得完全保护.以PCV2a和PCV2b各为指示病毒对病毒抗血清和rCap蛋白抗血清进行交叉中和试验,同型病毒株与同型血清的中和抗体效价均高于异型病毒株.病理观察显示,免疫鼠均未见明显病理变化,攻毒对照鼠肺脏出现一定程度的病理损伤.本研究表明,病毒灭活疫苗及其rCap亚单位疫苗PCV2a和PCV2b可提供交叉保护.     

PCV2、PRV、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用

根据GenBank中已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)有关基因序列,通过序列比对及参考相关文献,设计了3对特异性引物。通过优化,建立了可同时检测PCV2、PRV及PPV 3种病毒的多重PCR方法。结果表明,该方法能同时检测到PCV2、PRV及PPV的最低核酸量分别为40pg、72pg、46pg。对猪圆环病毒3型(PCV3)、猪细环病毒(TTSuV)、猪流行腹泻病毒(PEDV)、猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)无扩增。应用该方法对87份临床样品进行检测,PCV2阳性检出率为28.7%(25/87),PRV野毒检出率为11.5%(10/87),PPV检出率为12.6%(11/87)。其中2种以上病毒混合感染阳性率为13.8%(12/87),3种病毒同时感染的阳性率为2.3%(2/87),其结果也与单一PCR结果一致。研究结果提示,该方法可用于PCV2、PRV、PPV三种病原的单一感染或混合感染的鉴别诊断。     

PPVVP2基因与PCV2ORF2不同抗原表位重组真核表达载体的构建及其免疫原性

为了研究PCV2ORF2的不同抗原表位重组PPVVP2基因真核表达质粒的体外表达情况与免疫原性,分别以PCV2SC株和PPVSC-1株为模板,扩增PCV2ORF2的抗原表位基因A、B、c（A：117～131aa,B：157～183aa,C：165～200aa）和PPVVP2基因。将A、B、C基因分别与PPVVP2基因串联,并插入到pCI真核表达载体中,构建了能同时表达PPVVP2蛋白和PCV20RF2抗原表位的重组质粒pCI—A—VP2、pCI13-Vp2、pCI—C—VP2。将重组真核表达质粒转染MDBK细胞,用间接免疫荧光试验检测各个质粒在细胞中的表达情况;并将其免疫小鼠,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法检测免疫效果。结果显示,3种重组表达质粒转染细胞48h后都能检测到较强的免疫荧光;免疫小鼠后14～42d诱导的T淋巴细胞转化效率、CD4＋／CD8＋细胞比值以及PPV和PCV2抗体均显著高于对照组,且pCI—13-VP2免疫效率高于其他组。该结果表明PCV2ORF2上157～183aa抗原表位在3个抗原表位中抗原性最强,可作为PCV2与其他病毒二联疫苗研究的主要抗原表位。     

PCV2病毒血症对猪的健康极为重要

在猪圆环病毒2型（PCV2）仔猪疫苗进入市场之前,利用定量PCR（qPCR）方法对样本中的PCV2进行检测一直受到质疑。因为PCV2在明显健康和感染动物中都可检测到。这些PCV2检测样本的检测结果实际能说明了什么呢？     

PCV2疫苗免疫效力评价体系的构思

猪2型圆环病毒(PCV2)的发现和不断地演变,造成养猪业严重的经济损失,养猪业对该病毒及其疾病继续保持着重要关切,而疫苗是控制该疫情的关键。由于圆环病毒病(PCVAD)病情比较复杂,造成的危害无法用很直观的数据来描述疫苗免疫效果,需要进行长期跟踪临床试验来确定其效力;各生产厂家有不同的评价标准和不同的针对性;母源抗体的存在对疫苗效果产生较大的影响;抗体水平与保护力不成正比等因素,需要对PCV2疫苗免疫效力进行综合性评价。文中从动物模型的选择、临床的观察、免疫学、病原学、病理学五方面综合评价不同类型疫苗免疫效力水平,为PCV2疫苗免疫效力的评价提供系统化的思路,以期为正确评价疫苗效力提供参考。     

PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的三重PCR方法,根据Gen Bank登录的病毒相关基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上3种病毒的PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为192 bp(PRV)、255 bp(PCV2)和759 bp(PPV)。对PRV、PCV2和PPV的核酸检测最低浓度分别为:2.5×10-2,2.2×10-3和3.7×10-2ng,证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。应用该方法对56份临床样品进行检测发现,PRV、PCV2和PPV的阳性率分别为16.1%、50.0%和19.6%,二重感染率为12.5%,三重感染阳性率为3.6%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上3种病毒提供了有效手段。     

PCV2感染后JAK-STAT信号通路的基因差异表达分析

JAK-STAT信号通路是阐明细胞因子生物学功能及病毒如何发挥作用的分子基础,但对于猪圆环病毒2型（PCV2）感染及病毒复制的作用机制,目前尚无报道。本研究采用PCR列阵方法,建立PK-15细胞JAK-STAT信号通路的功能分类芯片,分析JAK-STAT信号通路中所有已知的Jak和Stat家族成员、激活JAK-STAT信号通路的受体,以及与Stat蛋白相关的核辅助因子及共同活化因子、Stat诱导蛋白及该通路的负反馈调节蛋白等基因在PCV2感染后的差异表达情况,为进一步明确PK-15细胞JAK-STAT信号通路对病毒复制力和复制机制奠定基础。