白藜芦醇抑制过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡及其机制

为了研究白藜芦醇抑制过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡及其机制,利用过氧化氢(Hydrogen peroxide,H_2O_2)建立IPEC-J2细胞凋亡模型,然后分别使用不同浓度的白藜芦醇(Resveratrol,Rel)对IPEC-J2细胞预处理,通过MTT、流式细胞术和蛋白质免疫印迹试验,检测白藜芦醇对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞凋亡的保护作用及其机制。结果表明:50μmol/L的白藜芦醇通过ERK1/2和AKT信号,可以明显抑制50μmol/L过氧化氢诱导的IPEC-J2细胞凋亡。     

丙酸钠对IPEC-J2细胞紧密连接及炎症细胞因子的影响

[目的]本文以猪肠道上皮IPEC-J2细胞为模型,探究不同水平丙酸钠对细胞紧密连接和炎症细胞因子的影响。[方法]分别用1和10 mmol·L~(-1)丙酸钠处理IPEC-J2细胞,以不加丙酸钠处理IPEC-J2细胞为对照组,分别处理12 h和24 h后测定各组细胞活力、跨膜电阻(TEER)值、紧密连接相关蛋白及炎症细胞因子基因表达和细胞上清液中炎症因子浓度。[结果]丙酸钠处理24 h后,处理组细胞活力显著下降(P0.05),细胞的TEER值则显著上升(P0.05)。RT-qPCR结果显示,紧密连接相关蛋白Claudin中,不同浓度丙酸钠处理12和24 h后,显著下调Claudin-1 mRNA的表达(P0.05),但显著上调Claudin-2、Claudin-3和Claudin-4 mRNA的表达(P0.05)。紧密连接相关蛋白ZO中,处理12和24 h时,1和10 mmol·L~(-1)丙酸钠分别显著上调ZO-2 mRNA和ZO-1 mRNA的表达(P0.05),但10 mmol·L~(-1)丙酸钠则显著下调ZO-2 mRNA的表达(P0.05)。不同浓度丙酸钠处理12和24 h均显著上调炎症细胞因子IL-8、IL-18和TNF-αmRNA的表达(P0.05),显著下调IL-6 mRNA的表达(P0.05)。ELISA测定结果表明,丙酸钠显著刺激IL-8和TNF-α的分泌(P0.05),对IL-18和IL-6的分泌则无显著影响(P0.05)。[结论]丙酸钠选择性上调紧密连接蛋白家族相关基因的表达,一定程度上维护小肠上皮细胞屏障功能的完整性,同时调节细胞炎症反应,揭示丙酸在调节小肠上皮细胞屏障功能以及炎症反应过程中发挥重要作用。     

虾青素对脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)通过TLR4/My D88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响。【方法】采用MTT法确定虾青素和LPS对IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞的最佳处理浓度和处理时间,在处理后采用实时荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6和IL~(-1)β的m RNA相对表达量,采用ELISA检测上述炎症因子的分泌量。【结果】当处理3 h,虾青素浓度达到150μmol·L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值;当处理6 h,LPS质量浓度达到100 ng·m L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值。与对照组相比,LPS组IPEC-J2细胞NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β的m RNA相对表达量和分泌量显著升高(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β在IPEC-J2细胞中的m RNA相对表达量和分泌量显著降低(P0.05),而在转染IPEC-J2细胞中的炎症因子m RNA相对表达量和分泌量均无显著变化(P0.05)。【结论】虾青素可以抑制细胞炎症反应,且对细胞的保护作用与TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对IPEC-J2细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响及其自噬机制

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L~(-1))DON处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT、Hoechst 33258、Western blot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L~(-1) DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L~(-1)时,细胞活性显著(P0.05)或极显著(P0.01)下降。4和8μmol·L~(-1) DON处理凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-Caspase3表达显著增加(P0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。     

N-乙酰半胱氨酸对双酚A诱导的猪肾细胞凋亡和炎症反应的抑制作用

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造,其从塑料制品中渗出,暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中,导致动物长期接触,并经过胎盘和母乳传递给后代,干扰动物生长和发育,对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂,能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而,NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用,为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料,采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化;设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理,并与BPA共处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）m...     

植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的影响

【目的】探讨植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体对猪肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IPEC-J2细胞)的黏附特性,以及对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的抑制作用.【方法】分别用植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体处理IPEC-J2细胞,结合显微镜观察和黏附计数方法评估其黏附特性;评价其在竞争、排阻和置换3种方式下对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的影响.【结果】植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体均能黏附于IPEC-J2细胞,其中活菌体对IPEC-J2细胞的黏附指数较热灭活菌体高,但差异不显著(P>0.05);活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的竞争抑制和置换抑制率显著高于热灭活菌体(P<0.05);两种生物学状态的植物乳杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的排阻抑制率差异不显著(P>0.05).【结论】植物乳杆菌活菌体和热灭活菌体均能黏附于IPEC-J2细胞,并可通过竞争、排阻和置换方式抑制大肠杆菌对IPEC-J2细胞的黏附,且其活菌体对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞的竞争和置换抑制效果优于热灭活菌体.     

HMC毒素诱导玉米专效寄主原生质体细胞凋亡的检测

以2对同核异质玉米B37和Mo17叶片的原生质体为试材,并将原生质体随机分为4组,HMC毒素质量浓度分别为0、50、100、150μg/mL,处理时间分别为1、3、6h。采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染的方法进行检测,观察处理后原生质体的凋亡特征及细胞凋亡率的变化趋势。结果表明:HMC毒素处理玉米原生质体后发生细胞凋亡,并出现凋亡小体、染色质边集或环状染色质等凋亡特征;经不同浓度HMC毒素处理B37和Mo17玉米原生质体,CB37的最大凋亡率为10.80%,NB37为4.90%,CMo17为21.00%,NMo17为8.83%;HMC毒素对2种基因型的C、N细胞质所测结果一致,均为C细胞质对毒素敏感,先出现细胞凋亡,N细胞质出现细胞凋亡的时间相对较晚;C、N之间的细胞凋亡率差异显著,且前者高于后者。当毒素浓度不变时,细胞凋亡率随毒素处理时间的延长而递增;当处理时间不变时,细胞凋亡率随毒素浓度的增加而上升。     

HMC毒素处理诱导玉米幼苗根冠细胞凋亡的结果观察

以玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)分别诱导2对同核异质体玉米的幼苗根冠细胞(即:基因型为B37的玉米C型不育细胞质CB37和同核保持系NB37,基因型为Mo17的玉米C型不育细胞质CMo17和同核保持系NMo17),采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染的方法,研究细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。结果表明:CB37的幼叶接种PBS再经150mg/L的HMC毒素处理后,其根冠细胞凋亡率达最高值为45.3%,而NB37仅为15.3%;CMo17凋亡率最高达63.7%,NMo17仅为6.39%;C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质,凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加。HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,活细胞核发出绿色荧光,坏死细胞核则呈现橙红色荧光,且细胞核呈松散的颗粒状或新月状,凋亡细胞则发出黄绿色或绿色荧光,染色体固缩成新月状或颗粒状。     

IL-24对氯化钴诱导缺氧乳腺癌细胞凋亡的影响

为研究IL-24对缺氧条件下诱导肿瘤细胞凋亡的影响。体外培养乳腺癌细胞,诱导化学缺氧模型后,转染IL-24基因,通过流式细胞术分析细胞周期和凋亡。结果表明:与对照组比较,缺氧诱导后的细胞增殖速度减慢。流式细胞术双染法分析细胞凋亡,可发现在缺氧生长条件下,IL-24基因转染可诱导乳腺癌细胞凋亡,相同时间点,细胞凋亡率无显著差异。转染IL-24基因后,缺氧和非缺氧小鼠乳腺癌细胞的红色荧光强度均随时间延长而下降。IL-24可通过内质网途径诱导缺氧以及非缺氧小鼠乳腺癌细胞发生凋亡。     

洛伐他汀对Hela和HCT116细胞凋亡的诱导效果

采用洛伐他汀诱导Hela细胞和HCT116细胞,以探讨洛伐他汀对两种细胞体外死亡和凋亡机制。结果表明:经过浓度为20μmol/L和50μmol/L的洛伐他汀处理24 h、48 h和72 h后,两种细胞的死亡和凋亡率与处理浓度及时间成正相关,在不含胎牛血清(SVF)条件下效果更明显;经25μmol/L洛伐他汀处理48 h后,caspase-2表达在两个细胞系中均有提高,尤以Hela更明显。故初步认为,Lovastatin能引起Hela、HCT116细胞的死亡和凋亡,凋亡机制与caspase-2表达有关。     

牦牛CCL14蛋白对HepG2细胞活性和凋亡的影响

旨在研究牦牛CCL14蛋白（Bos grunniens C-C motif chemokine 14 protein, BgCCL14）对HepG2细胞的影响和作用机制。将原核表达的BgCCL14蛋白与HepG2细胞共培养,利用CCK-8试剂盒检测细胞活性,平板克隆检测细胞克隆形成能力,细胞划痕检测细胞迁移以及荧光定量PCR检测相关基因的表达量。结果表明,1 μg/mL、10 μg/mL和20 μg/mL的BgCCL14蛋白均能显著降低HepG2细胞活性;20 μg/mL的BgCCL14蛋白对细胞增殖和迁移有极显著抑制作用;20 μg/mL的BgCCL14蛋白处理36 h极显著上调凋亡基因BAK和BAX 的mRNA水平,极显著降低 HIF1A、 PI3K和 CDK1基因的mRNA水平,显著降低mTOR基因 的mRNA水平。这表明BgCCL14蛋白可能通过促进细胞凋亡抑制肝癌细胞活性。     

百草枯对人肝HepG2细胞存活力和凋亡的影响

探讨百草枯(PQ)对人肝细胞的毒性。采用甲基噻唑蓝试验和流式细胞术分别检测了PQ处理24 h对人肝Hep G2细胞存活力和凋亡的影响。PQ处理24 h时,对Hep G2细胞存活力的半数抑制浓度为51.17 mg/L;7.21 mg/L的PQ处理24 h即可启动Hep G2细胞的早期凋亡程序,随着PQ处理浓度的增大,Hep G2细胞的总凋亡率先升高后降低,而细胞坏死率持续升高。PQ对人肝Hep G2细胞具有明显毒性,会抑制Hep G2细胞的存活力,低浓度时主要诱导细胞凋亡,高浓度则主要导致细胞坏死,说明保肝类药物可能对PQ中毒有较好疗效。     

光照对姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的 研究光照对姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨其作为肿瘤光动力学治疗新型光敏剂的可能性.方法 体外培养的MCF-7细胞加姜黄素后进行光照及避光处理24h,MTT法测细胞生长抑制率,Giemsa、Hoechst33258染色观察形态变化,流式细胞术检测凋亡率和细胞周期分布.结果 单纯光照对MCF-7细胞无生长抑制及诱导凋亡作用,光照及避光条件下姜黄素对MCF-7细胞生长抑制的IC50分别为2.68、13.44 μmol/L;细胞在光照条件下经5μmol/L姜黄素处理24h即呈现典型的凋亡形态;光照条件下1、2.5、3、5 10 μmol/L姜黄素及避光条件下5、10、15、20、30μmol/L姜黄素处理细胞24h,凋亡率分别为4.06%、16.79%、19.46%、35.97%、59.27及5.71%、8.88%、12.51%、38.04%、26.60%;姜黄素在光照及避光条件下均可引起细胞周期分布发生改变.结论 光照对姜黄素抑制MCF-7细胞生长及诱导凋亡具有增敏作用.     

赭曲霉毒素A诱导Caco-2细胞的细胞毒性及DNA损伤

【目的】研究不同浓度和时间处理下,赭曲霉毒素A(OTA)对人结肠癌细胞(Caco-2)的细胞生长抑制、氧化损伤以及DNA损伤的影响.【方法】采用0.32、1.6、8、40、200μmol/L OTA处理Caco-2细胞24、48、72h后,利用甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率,利用活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的自由基水平,利用彗星试验检测细胞的DNA损伤.【结果】在各个处理时间段内,OTA浓度大于0.32μmol/L时,OTA对细胞存活率都有显著的抑制作用(P0.05);细胞内ROS以及DNA损伤都随OTA浓度的增加而显著升高(P0.05),尤其在0~8μmol/L低浓度范围内,OTA显示了强烈的毒性.【结论】OTA可导致Caco-2细胞存活率降低,引起细胞氧化应激以及DNA损伤,其中ROS水平升高可能是OTA导致Caco-2细胞DNA损伤的原因.     

β-伴大豆球蛋白对IPEC-J2细胞损伤的作用机制研究

【目的】研究β-伴大豆球蛋白通过核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对猪肠上皮细胞（IPEC-J2）造成损伤的差异,为探索β-伴大豆球蛋白引发仔猪肠道黏膜损伤的分子机制提供理论依据。【方法】采用β-伴大豆球蛋白体外诱导IPEC-J2损伤,试验设对照组T0（猪肠上皮细胞不做处理）,试验组T1（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白）、T2（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷（PDTC））、T3（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME））、T4（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L JNK抑制剂SP600125）和T5（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L p38抑制剂SB202190）,处理24 h后观察细胞结构,测定各组细胞活性及细胞因子NO、TNF-α、IL-10、IFN-γ含量,细胞损伤相关基因NF-κB p65、iNOS、JNK、p38及其编码蛋白的表达水平。【结果】在IPEC-J2中加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白24 h后,细胞数量减少,线粒体改变,染色质边集,细胞活性显著下降（P<0.05）,NO、TNF-α、IFN-γ含量均极显著增加（P<0.01）,而IL-10含量极显著减少（P<0.01）,NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA表达水平极显著升高（P<0.01）,NF-κB、iNOS、JNK、p38蛋白表达量极显著上升（P<0.01）;加入抑制剂后,细胞活性显著提高（P<0.05）,细胞结构趋于完整和规则,IL-10含量极显著增加（P<0.01）,而NO、TNF-α、IFN-γ含量极显著减少（P<0.01）,NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA及其编码蛋白表达受到抑制。其中T2组细胞活性显著高于T3、T4、T5组（P<0.05）,细胞数量、形态和完整性最接近对照组细胞。【结论】β-伴大豆球蛋白主要通过NF-κB/iNOS信号通路对IPEC-J2造成损伤,PDTC对这种损伤作用的抑制效果最好。     

ROS对氯化镉诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

为研究活性氧(ROS)对氯化镉(CdCl2)诱导的人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,本文采用荧光探针DHR检测CdCl2诱导的MCF-7细胞内ROS的变化水平;分别采用MTT法和DNA Ladder法检测CdCl2对细胞的毒性作用和细胞DNA的凋亡情况;通过加入自由基清除剂LNAC抑制细胞内的ROS水平,从而研究ROS对细胞凋亡的影响。结果显示,1.00×10-3 mol/L的CdCl2处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的2.04倍,细胞存活率为26.54%,DNA出现片段化分解。用CdCl2+LNAC复合处理MCF-7细胞6h,细胞内ROS水平为对照组的1.25倍,细胞存活率为61.17%,DNA不出现凋亡条带。因此,由CdCl2所导致的MCF-7细胞凋亡和DNA片段化分解,与细胞内ROS水平的升高有关。     

葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性研究

[目的]研究葛仙米提取物诱导肝癌细胞HepG2凋亡的活性。[方法]采用二甲基四氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率,形态学法观察凋亡的特征性变化,AnnexinV/PI双染及PI单染流式细胞术法检测凋亡率。[结果]经不同浓度提取物作用后,HepG2细胞的生长受到显著抑制,并呈现时间-浓度依赖关系趋势。观察细胞形态,发现有凋亡特征性变化。AnnexinV/PI双染结果显示,癌细胞早期凋亡率随提取物浓度的升高而显著增高,最高可达79.2%。PI法同样显示凋亡的发生,其凋亡峰最大比率为9.6%,显著高于对照组。[结论]葛仙米甲醇提取物能够诱导肝癌细胞HepG2的凋亡。     

FOXO基因对印楝素诱导sf9细胞凋亡的影响

【目的】探讨印楝素（azadirachtin, AZA）通过转录因子FOXO诱导草地贪夜蛾卵巢细胞sf9凋亡的分子机制。【方法】将体外培养的草地贪夜蛾卵巢细胞分为AZA处理组和未处理组,采用CCK-8法检测AZA 对sf9 细胞增殖的影响;透射电镜观察sf9细胞的超微结构变化;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞;Western blot 检测p-FOXO及凋亡相关蛋白的表达情况; RNAi FOXO后,检测FOXO基因表达量与Caspase-3的酶活性变化。【结果】CCK-8检测发现AZA可显著抑制sf9细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;通过透射电镜检测到5 mmol/L AZA可破坏sf9细胞的微观结构,导致细胞核收缩,染色质聚集,细胞质空泡状;流式细胞术分选Annexin V-FITC/PI染色的凋亡细胞,发现AZA诱导sf9细胞凋亡与时间呈正相关;进一步通过Western blot检测凋亡相关蛋白,发现AZA可诱导凋亡相关蛋白 Bim和 Cleaved Caspase-3的表达水平显著增加,而P-FOXO蛋白表达量降低,FOXO总蛋白表达无明显差异;利用qRT-PCR进一步检测发现,FOXO基因表达量与AZA处理时间呈正相关,在此基础上通过RNAi技术沉默FOXO后,经AZA处理发现Caspase-3的酶活性显著降低。【结论】AZA可通过上调FOXO基因抑制草地贪夜蛾卵巢细胞sf9的增殖并诱导其凋亡。     

Bdf1p转录因子BD2和ET结构域双缺失对盐胁迫诱导酵母细胞凋亡的影响

以酿酒酵母为研究材料,分析Bdf1p转录因子BD2和ET结构域双缺失对盐胁迫诱导细胞凋亡的影响.研究结果表明,盐胁迫条件下,与野生型酵母菌株相比,Bdf1p转录因子BD2和ET结构域双缺失体BBD△,表现为细胞存活率下降、活性氧升高、细胞核裂解、磷脂酰丝氨酸外翻、细胞凋亡程度加剧,表明Bdf1p转录因子BD2和ET结构域在盐胁迫诱导的酵母细胞凋亡中发挥重要作用.