检测睾酮、孕酮、雌酮与雌三醇的双抗体酶免疫分析法

本文报道了自制的试剂建立了检测睾酮、孕酮、雌酮和雌三醇的双抗体酶免疫分析法。实验表明 ,这些测定具有很高灵敏度 (最小可测量为 0 1～ 1pg 孔 ) ,标准曲线范围为 0～ 40pg 孔 ;同相关类固醇激素 (孕酮、孕烯醇酮、睾酮、雄酮、雌酮、雌三醇和皮质酮等 )的交叉反应率一般在 0 1 %以下。测定的批内和批间变异系数分别在5 8%～ 7 2 %与 9 5%～ 1 0 5% (n =8)范围内。向血中添加激素标准品后的回收率在 94%～ 1 1 0 %范围内。用自制防腐剂处理后 ,液态抗体 (包括第二抗体 )、酶标记物和已包被第二抗体的滴定板可保持活性 5～ 1 2个月或更久 ( 4℃～ -2 0℃ )。此测定可节约激素特异抗体 4～ 1 0倍。初测人和动物的血、奶、尿样品表明所建立的 4种测定方法可分别用于人和动物体液中睾酮、孕酮、雌酮和雌三醇的定量检测     

放射免疫法测定畜产品中的己烯雌酚

本文采用DES-MCME-BSA复合物免疫家兔,制备兔抗DES抗血清。其滴度为1:1250,亲和常数为1.1×10~9L/mol,与己烷雌酚和双烯雌酚的交叉反应分别为4.58％和2.14％,与17β-雌二醇、孕酮、甲地孕酮、睾酮和丙酸睾酮的交叉反应均<0.01％。应用制得的抗血清,建立了DES的放射免疫测定法。其最小检测量为2pg/管,平均回收率90.4±7.6％,批内和批间变异系数分别为5.4％和10.4％,表明本法灵敏、可靠,适于大批样品的常规筛检。     

19-去甲睾酮人工抗原及免疫学特性

合成19-去甲睾酮(19-NT)人工抗原,并进行免疫学特性鉴定.丁二酸酐法衍生化19-NT,制备17β-19-NT琥珀酸酯半抗原,其质谱和核磁共振NMR谱表明合成成功.分别用EDC法和混合酸酐法将半抗原与BSA(bovine serum albumin)和OVA(ovalbumin)偶联,制备免疫和检测抗原,并进行紫外扫描和红外光谱鉴定,NT与BSA偶联比为18:1.用NT-BSA免疫Balb/C小鼠(Mus muscalus)制备NT多克隆抗体,间接ELISA效价达到1:25 600.间接竞争ELISA的IC50为27.3 ng/mL,线性检测范围为3.3～225.0 ng/mL,最低检测限为1.6 ng/mL.纯化后的抗体与17α-去甲睾酮的交叉反应率为69%,与其它激素的交叉反应率均<0.05%.制备的抗体灵敏度高、特异性强,为试剂盒和试纸条的研制提供基础资料.     

卵清蛋白基因表达放射免疫分析法

应用竞争结合原理建立了卵清蛋白基因表达的放射免疫分析法。采用氯胺T法标记卵清蛋白,~(125)Ⅰ-OA比活度达32～43μCi·μg~(-1),冻干后在常温下保存,有效期2～3个月;以(鸡)卵清蛋白作免疫原制备出的抗血清特异性强,与其他生物大分子无交叉反应,亲和常数为3.8×10~9L/M,50％结合率为1:1.6×10~5(最终稀释度);用双抗-PEG作分离剂沉淀免疫复合物,其方法灵敏度为0.17ng,可检范围为0.25～16ng,批内、批间变异系数分别为2.99％和8.96％。该方法能有效地直接检测类卵清蛋白含量,可作为一种特异、灵敏、简便、可靠的分析技术,应用于卵清蛋白基因表达生物基因工程研究。     

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。     

莱克多巴胺单克隆抗体的研制及阻断ELISA检测方法的建立

用混合酸酐法将莱克多巴胺(RAC)偶联于牛血清白蛋白(BSA),合成免疫原BSA-RAC,并用紫外和凝胶电泳鉴定;用BSA-RAC免疫Balb/C小鼠,细胞融合技术建立抗RAC单克隆抗体(mAb)杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备RAC mAb。应用RAC mAb研制RAC残留快速检测阻断ELISA试剂盒(RAC-Kit),并测定其性能。结果表明,BSA-RAC偶联成功,分子结合比为1∶24.5;筛选出3株杂交瘤细胞,其中最好的4D8株的亲和常数Ka为1.65×1010L/mol。RAC-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1~170μg/L,灵敏度为0.52μg/L,检测限为1μg/L,饲料样、猪尿样的平均添加回收率分别为91.1%和89.2%,平均批内和批间变异系数<15%,与多巴酚丁胺的交叉反应率为22.3%,与其他化合物无交叉反应,RAC-Kit在4℃可保存180d。     

抗恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及竞争ELISA试剂盒的研制

利用合成的完全抗原(BSA-ENR)免疫小鼠,通过细胞融合技术和间接竞争ELISA筛选出了能分泌恩诺沙星单克隆抗体的杂交瘤细胞株,以此为基础研制恩诺沙星残留检测的竞争ELISA试剂盒(competitive ELISA ENR-Kit),并测定其性能。结果表明:筛选出的2株杂交瘤细胞,单抗亚类均为IgG1型,其中4G1-B3株的ENR mAb间接ELISA效价为1:1.024×106,亲和常数(Ka)为9×1010L/mol;竞争ELISA试剂盒的线性检测范围为0.05~101.6μg/L、灵敏度0.05μg/L、半数抑制浓度(IC50)1.1μg/L,与其他化合物的交叉反应率(CR%)均小于0.01%,鸡肉样、鸡肝样、鱼肉样和牛奶样的平均添加回收率分别为81.5%8、7.6%、84.3%和95%,不同基质添加恩诺沙星标准品做竞争ELISA对ENR-Kit检测结果影响小,试剂盒保存期6个月以上。结果说明该竞争ELISA试剂盒具有快速、敏感、特异、简便等特点,适用于ENR残留的快速检测。     

基于双特异性单克隆抗体的克百威和三唑磷多残留ELISA分析方法研究及在环境样品中应用

采用杂交-杂交瘤技术制备抗克百威和三唑磷的双特异性单克隆抗体并进行纯化,通过对反应模式、工作浓度、包被缓冲液、有机溶剂、离子强度、pH值等条件优选,建立优化的ELISA分析方法,对克百威和三唑磷的线性回归方程分别为Y=20.0091n(x)-9.9293(R2 =0.9959)和Y=19.486In(x)+39.752 (R2=0.9945),抑制中浓度I50分别为20ng·mL-1和1.69ng· mL-1,最低检测限I20分别为4.46ng·mL-1和0.36ng· mL-1.建立的ELISA分析方法对水、土壤等环境样品中克百威和三唑磷的平均添加回收率介于88.4％ ～117％之间,说明所制备的双特异性单克隆抗体和建立的ELISA分析方法可靠,可应用于克百威和三唑磷的多残留免疫分析.     

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA方法的建立

应用分泌抗二氟沙星(DIF)单克隆抗体(DIFmAb)的杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法.特异性实验结果表明,与达氟沙星的交叉反应率为0.32%,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1μg/L,半数抑制浓度IC(50)为2.2 μg/L,线性范围0.1～128.0μg/L,平均批内和批间变异系数小于15%.对牛奶和鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0和50.0μg/L DIF标准品.平均回收率分别为89.3%和83.9%.直接竞争ELISA准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用.     

基于Eu~(3+)标记的喹乙醇TRFIA研究

为了评价Eu~(3+)免疫探讨标记喹乙醇克隆抗体的效果,以环化二乙烯三胺五醋酸酐(cy DTPA)为螯合剂,将Eu~(3+)偶联到喹乙醇单克隆抗体(OLA-m Ab)上,制备喹乙醇铕标抗体(Eu~(3+)-OLA-m Ab),并在此基础上进行TRFIA反应条件的优化。结果表明,优化后的直接竞争时间分辨荧光免疫分析(TRFIR)反应条件为包被抗原(OLA-OVA)浓度1.2μg·m L-1、铕标抗体浓度2.0μg·m L-1、CBS浓度0.05 mol·L-1、PBS稀释液0.01 mol·L-1、p H值7.0,采用含5%甲醇的PBS配制喹乙醇标样。反应条件筛选优化后建立标准曲线,其IC50和IC10浓度分别为9.29、0.66 ng·m L-1。以饲料为样品进行添加回收率试验,其回收率处于84.80%~113.60%之间,变异系数小于14%。本研究建立的TRFIA方法具有灵敏度高、稳定性好等特点,为下一步研发喹乙醇TRFIA快速检测试剂盒奠定了基础。     

家鸡催乳素放射免疫测定法的建立

本文建立了测定鸡血浆样品中催乳素(chPRL) 的放射免疫测定方法。所用试剂为标准chPRL( AFP 10328B) ,碘标chPRL( AFP 4444B) ,一抗为免抗chPRL(AFP 151040789) 抗血清,二抗驴抗免IgG 抗血清。碘标采用氯胺T 改进法,减少了氯胺T 的用量,并省略了偏重亚硫酸钠的使用,碘标chPRL 比放射性为29μCi/ug 。测定的灵敏度为0-34ng/ ml, 标准曲线的ED75 、ED50 和ED25 分别为1-30 ,3-71 和10-60ng/ ml。样品批内和批间变异低于15 % 。母鸡血浆样品倍比稀释产生的结合抑制曲线与标准曲线平行;测定不同繁殖状态母鸡血浆样品chPRL 显示出显著差异且变化规律符合繁殖活动的变化。证明本方法可用于测定家鸡血浆chPRL 浓度。     

杜鹃抗盐突变体的筛选

利用杜鹃的离体叶片诱导不定芽 ,发现MS +BA2 0ppm +ZT0 1ppm培养基不定芽分化率最高。用γ射线作诱变剂 ,对离体叶片产生的不定芽进行了耐盐筛选 ,得到了耐 0 5%、0 7%和 1 %NaCl的变异株系 ,并对变异株系进行了初步鉴定。     

旱稻(Oryza sativa)×长芒稗(Echinochloa caudata)远缘杂交后代结实率及杂种优势分析

以旱稻基因型旱 65(OryzasativaL .)为母本 ,稗草长芒稗 (Echinochloacaudata)为父本进行远缘杂交 ,获得实粒种子。连续 5年试验结果表明 :( 1 )F0 高度不孕 ,并伴有杂交种发育夭折现象。去雄 82 4朵小花 ,结实率为 1 2 1‰。 ( 2 )F1杂种优势明显 ,育性正常 ,结实率 92 2 6% ,单株产量超母本 80 3 9%。 ( 3 )F2 农艺性状分离严重 ,但育性无分离。群体 40 5株无不育株出现。选育出的优良变异单株“远F2 1” ,超亲优势为 55 64%。 ( 4)对“远F2 1”衍生F3株系 1 60株考种株穗数、株高、穗长、主茎穗一级枝梗数、穗总粒数、穗实粒数诸性状 ,平均超亲优势分别为 2 3 2 %、1 5 1 8%、47 2 6%、3 3 84%、2 4 2 6%及 2 1 62 % ,差异显著。 ( 5)F5光合速率测定 ,超母本2 9 72 %。远缘杂交对不同属间引入目的基因 ,非常有效。     

赞皇大枣组织培养快速繁殖技术研究

为解决赞皇大枣组织培养快速繁殖问题 ,通过对启动培养、增殖培养、壮苗培养和生根培养 4个阶段培养条件的研究 ,筛选出该品种的最佳启动、增殖、壮苗和生根培养基 ,分别为 :MS+6-BA0 5mg L +IBA0 1mg L ;MS +6-BA1 5mg L +IBA0 1～0 2mg L ;MS +KT0 5mg L +NAA0 2mg L ;1 2MS+IBA0 6mg L +NAA0 2～ 0 3mg L。     

高肥力土壤冬小麦/夏玉米轮作体系中化肥氮去向研究

冬小麦 夏玉米轮作是华北平原主要的耕作方式之一。本研究通过田间15N微区试验 ,研究了高肥力土壤条件下冬小麦 夏玉米轮作体系中化肥氮的去向。结果表明 ,在每季施氮量 1 2 0～ 3 60kg hm2 条件下 ,冬小麦对化肥氮的吸收率为 2 3 8%～44 5 % ,夏玉米为 2 6 5 %～ 5 1 1 % ,整个轮作周期为 2 8 0 %～ 5 1 6%。而后茬作物对化肥氮的吸收量较少 ,低于施氮量的 1 0 %。当季化肥氮的土壤残留率约占施氮的2 0 %～ 5 0 % ,轮作周期化肥氮的土壤残留率约占施氮的 3 0 %。当季和轮作周期化肥氮的损失量和损失率 ,均随着施氮量的提高而显著升高。当施氮量分别为 2 40kg hm2和 72 0kg hm2 时 ,整个轮作周期化肥氮的损失率分别为 1 9 0 %和 40 5 %。     

输液器污染微生物辐射抗性频率分布的研究

从 5 6套输液器分离得到 3 0 3 2株分离菌 ,系统地研究了输液器上污染微生物的辐射抗性。用辐射处理获得了较高抗辐射的微生物 98株 ,测定了它们的辐射抗性D10 。分离菌株的D10 是在 0 8～ 4 0kGy之间 ,主要集中在 1 2～ 1 6kGy。D10 ≤1 6kGy占全部污染菌的 99%。所有辐射筛选菌株是革兰氏阳性菌 ,其中 84株是Bacillussp .,1 4株是micrococcussp .。在输液器外壁获得了 1株桔红色的菌株 ,其D10 为 4 0kGy。     

春小麦花前~(14)C同化物分配与累积研究

研究结果表明：从花前标记到整个灌浆期,春小麦９０１ 叶和鞘中１４ Ｃ同化物分配率分别下降２３１ ％ 和７８％ ,陕２２９ 下降了３２１％ 和７７％ 。茎中１４Ｃ 同化物分配率,９０１ 增加了７３ ％ ,陕２２９ 增加了２２０ ％ 。从花前标记、灌浆到成熟,９０１ 穗颖壳１４Ｃ同化物分配率上升了１２２％ ,陕２２９ 上升了８７ ％ 。在花后２１ｄ 前,两品种旗叶１４Ｃ同化物分配率逐渐下降。花后３５ｄ ９０１ 旗叶中１４Ｃ 同化物分配率存在一个高峰,尔后又下降,比花前标记时下降４２ ％ ;陕２２９ 则一直下降,比花前标记下降４５ ％ 。花后同化物转运,陕２２９ 早于９０１ ,陕２２９ 籽粒中１４Ｃ同化物放射性相对高于９０１ 。花前标记的１４Ｃ同化物在９０１ 中有４５ ％ 转运到籽粒中,陕２２９ 中有１１１ ％ 转运到籽粒中去。     

~(60)Coγ射线诱变选育热凝胶多糖高产菌株的研究

利用60 Coγ射线对产生热凝胶多糖 (Curdlan)出发菌株GM 2 4的菌体细胞与原生质体分别进行辐照处理 ,发现60 Coγ射线对GM 2 4原生质体的诱变效应明显优于对其菌体细胞的作用。对最终诱变筛选获得的 1株高产稳定的Curdlan生产突变株A81研究表明 :与GM 2 4相比 ,其Curdlan产量提高了 5 0 4%,发酵周期缩短了 1 8%,发酵终止后底物残糖由 1 5 3g L降至7 4g L。糖的转化率从 38 7%提高至 5 8 2 %。这说明在Curdlan生产菌株的筛选中60 Coγ辐照是一种有效的方法     

小麦氮锌配施效应及增产机理研究

本文报道了淮北平原砂姜黑土区小麦氮锌配施效应及增产机理的研究。结果表明 ,在缺锌的砂姜黑土上 ,氮锌配合施用具有显著的增产效果。盆栽小麦增产1 0 2 %～ 1 8 8% ;大田小麦平均增产 9 76 %～ 1 6 6 %。氮锌配合施用显著提高了土壤有效锌和速效氮含量水平 ,促进了小麦对氮锌的吸收 ,有效提高了植株氮锌含量 ,土壤水解氮含量增加了 9 1 3%～ 2 1 2 % ;有效锌含量提高了 32 3%～ 6 4 5 % ,小麦氮锌含量分别升高 5 2 0 %～ 1 3 0 %和 1 8 9%～ 36 7% ,氮和锌积累量分别增加2 2 2 %～ 49 7%和 40 2 %～ 6 8 2 %。说明在本试验条件下适当的氮锌配施对小麦生长发育具有明显的促进作用     

旱稻(Oryza sativa)/稗草(Echinochloa caudata)//高梁(Sorghum bicolor)三属杂种表现及分析

以旱稻基因型远F2 1 [旱 65 (Oryzasativa) 长芒稗 (Echinochloacaudata) ]为母本 ,高粱(Sorghumbicolor)基因型沈农 1 33为父本 ,进行属间远缘杂交 ,获得三属间杂交实粒种子。对杂交种F0 、F1、F2 代连续观察结果表明 :( 1 )杂交F0 代高度不孕 ,并伴有杂交种发育夭折现象发生 ,结实率仅为 2 63‰ ;( 2 )F1杂种优势明显 ,株高、穗长、1级枝梗数、小花数、结实粒数、结实率、千粒重诸性状超母本优势为 0 61 %～ 2 0 5 6% ;主茎叶片数多于母本 1片 ,总叶面积超亲优势为 1 1 95 % ;F1出现母本没有的红芒、红护颖和紫柱头 3个可遗传性状 ;( 3)F2 除在生育期、株高及穗长等性状发生分离外 ,其典型特征是穗型、芒性、芒色、柱头颜色、护颖颜色等性状发生分离