不同温度条件下克氏原螯虾免疫酶活性变化

研究克氏原螯虾在不同水温条件下免疫因子活性的变化规律,结果发现:温度变化对克氏原螯虾免疫力有显著影响.水温为10～15℃时,克氏原螯虾血液中酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性保持稳定,20℃时两者活性达到峰值,水温继续升高时活性逐渐降低,水温达到30℃时酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的活性分别为74.6 U/L和56.8金氏单位/L,与水温20℃时酶的活性相比差异显著(P＜0.05);过氧化氢酶的活性随着温度的升高呈下降趋势,30℃时其活性最低(0.79 U/mL),与水温20 ～ 25℃时酶的活性相比差异显著(P＜0.05);而超氧化物歧化酶在水温10℃时的活性较低,但其活性随着温度升高而增强,水温30℃时的活性为138.31 U/mL,与15～25℃时相比差异不显著(P＞0.05),但高于水温为10℃的试验组,且差异显著(P＜0.05);低温与高温环境下,血液中溶菌酶的活性降低,显著低于水温15 ～ 25℃的试验组(P＜0.05).表明水温为20℃左右时克氏原螯虾相关免疫因子的各项指标较好,有较强的抗病能力.     

克氏原螯虾AFLP反应体系的建立

以克氏原螯虾DNA为材料,对AFLP分析中的基因组酶切时间、选择性扩增中预扩增产物稀释倍数、Mg~(2+)浓度等3个因素进行了比较.结果表明,基因组用EcoR I和MseI双酶切5h,选择性扩增的PCR反应体系中Mg~(2+)1.5 mmol/L是进行克氏原螯虾AFLP分析的最佳反应条件,能够得到丰富稳定的带纹.而预扩增产物稀释倍数对选择性扩增没有明显影响.该体系的构建为AFLP技术在克氏原螯虾相关研究中的应用奠定了基础.     

氟在克氏原螯虾体内的蓄积与释放试验

为探讨克氏原螯虾(Procambrus clarkii)对氟的蓄积性和可释放性,将220尾克氏原螯虾随机分成4组,分别饲养在含氟化钠0.00(对照)、0.05、0.50、5.00mg/L的水箱里,进行为期6周的暴露试验,每周周末取样1次;随后用自来水饲养进行为期4周的释放试验,每周周末取样1次。样品采用氟离子选择电极法测定克氏原螯虾体内氟的蓄积量。结果表明:克氏原螯虾对氟有蓄积性,水体环境氟含量越高虾体蓄积越多,在染毒水体饲养时间越长蓄积越多,而且主要蓄积在虾的甲壳和肝脏内;克氏原螯虾对氟有可释放性,但释放的速度很缓慢。     

不同地区克氏原螯虾性选择研究

利用体外标记法对来自宁波(NB)、南通(NT)、古里(GL)、大义(DY)和白茆(BM)地区克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的性选择行为进行研究。试验中共记录到220对交配虾,其中异地交配的克氏原螯虾186对,占总数的84.55%(P<0.01)。交配虾中雌雄虾体重差在5 g以下和体长差在0～1 cm间的交配对数分别占总数的64.09%和85.00%(P<0.01)。结果表明,克氏原螯虾更趋向于选择异地虾进行交配以减少近亲繁殖,提高其种群的遗传多样性,并且选择个体大小与自身相当的虾完成交配以增加交配的成功率。     

1株克氏原螯虾摩氏摩根菌的分离鉴定及联合药敏试验

从患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株病原菌,通过对其生理生化特征鉴定、16S rRNA序列分析和进化树构建对分离株进行了鉴定;测定了分离株对20种抗菌药物的敏感性及抗菌药物与天然化合物联用后的协同抑菌作用。结果发现,该菌株的生理生化特征与摩氏摩根菌基本一致,进一步通过测序和进化树分析发现该菌株与摩氏摩根菌的基因相似度达到99%以上,因此该菌株鉴定为摩氏摩根菌。药敏试验发现该菌株对恩诺沙星、氟苯尼考和新霉素等7种药物高度敏感,对卡那霉素中等敏感,对多西环素、链霉素和四环素等12种药物耐药。此外,联合抑菌试验发现多西环素与二氢辣椒碱联用后具有协同抑菌作用。以上研究表明,本次从克氏原螯虾肝胰腺中分离的细菌为耐药性摩氏摩根菌,可选用氟苯尼考、恩诺沙星、新霉素或二氢辣椒碱和多西环素的复方制剂进行治疗。     

克氏原螯虾养殖探讨

阐述了克氏原螯虾的生物学特性、经济价值及人工养殖技术。     

1株克氏原螯虾肺炎克雷伯菌的分离鉴定及药物敏感性分析

从湖北潜江患病克氏原螯虾肝胰腺内分离到1株致病菌,经过生理生化特征测定、16S rRNA序列分析和进化树构建对该菌株进行鉴定,并通过琼脂扩散法检测该分离株的药物敏感性,通过肉汤微量稀释法测定抗菌药物的最小抑菌浓度.结果发现,该菌株具有与肺炎克雷伯菌一致的生理生化特征,16 S rRNA测序和进化树分析发现该分离株与肺炎...     

克氏原螯虾高效人工繁殖技术

从亲虾池的建造、亲虾的选择与放养、亲虾的喂养与管理、水位的控制等方面介绍了亲虾养殖及幼虾养成技术。     

稻田养殖克氏原螯虾研究

开展了稻田养殖克氏原螯虾的研究。结果表明:稻田养殖克氏原螯虾是可行的,并可获得较好的养殖效益。     

克氏原螯虾与红螯螯虾血相的比较研究

对克氏原螯虾与红螯螯虾的血相进行了比较研究。结果表明 :克氏原螯虾与红螯螯虾的血细胞均由无颗粒细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞组成 ;其血细胞数量分别为 7.0 2× 10 6个 /ml和 1.6 5× 10 6个 /ml。 2种螯虾的血细胞大小与核质比均存在显著差异 ;无颗粒细胞、小颗粒细胞和大颗粒细胞占血细胞总量的百分比在克氏原螯虾为 10 .2 1%、74 .4 1%和 15 .4 8% ,在红螯螯虾为 13.72 %、6 8.84 %和 17.5 4 %。     

不同水温下恩诺沙星在中华绒螯蟹体内药物代谢动力学

研究不同水温对恩诺沙星(ENR)在中华绒螯蟹血淋巴、肌肉和肝脏组织中的代谢规律和组织分布的影响.在17、23和29 ℃水温下,以3.0 mg·kg-1剂量单次肌肉注射给药,于给药后1、10 min及0.5、1、2、8、16、24、48、72和168 h取各组织样品,ENR和环丙沙星(CIP)药物含量由高效液相色谱法同时测定.研究结果表明,在3个温度下,血淋巴和肌肉组织中ENR含量瞬时达到峰值,而肝脏中ENR含量则随给药时间,先上升后下降,在各组织中的含量从大到小依次为:血淋巴、肝脏、肌肉.23和29 ℃水温下,ENR转化率从大到小依次为:肝脏、血淋巴、肌肉;各组织中ENR的转化率与水温呈正相关.药物代谢动力学计算软件3P97分析结果表明:肝脏组织中ENR的代谢规律符合二室开放模型,在17、23和29 ℃下,吸收半衰期(分别为:1.81、0.97和0.14 h)、消除半衰期(分别为:240.27、60.57和37.59 h)、药时曲线下总面积 (分别为:2 148.66、324.17和264.47 μg·mL-1·h-1)均与温度呈负相关,而总体消除率与温度呈正相关,分别是0.001 4、0.009 3和0.011 L·kg-1·h-1.     

克氏原螯虾不同生长阶段饲料适宜蛋白水平的研究

克氏原螯虾作为典型的杂食性偏肉食性动物,其不同生长阶段对日粮蛋白水平的需求存在明显差异.试验分别以体质量为0.026、1.04和5.06 g左右的不同生长阶段(仔虾、幼虾和亚成体虾)克氏原螯虾为研究对象,每个生长阶段分别设计5种不同蛋白水平的配合饲料,每个处理设置3个重复,分别进行为期8周的生长饲养试验.结果显示:①在...     

不同饲料对克氏原螯虾消化酶活性的影响

设置芦苇、粳米、鱼肉以及该3种成分的等量混合物作为饲料饲养成体克氏原螯虾,以酶学分析方法测定纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶活性,分析其消化酶活性的变化情况.结果显示:在芦苇组中,淀粉酶和蛋白酶活性先出现上升,后适应性下降,纤维素酶活性先下降,后增至稳定水平;在以粳米为食的条件下,蛋白酶活性先出现上升,后适应性下降,淀粉酶活性变化趋势与芦苇组纤维素酶活性变化相同,纤维素酶活性不发生明显变化;在鱼肉为饲料的条件下,纤维素酶活性先出现上升,后适应性下降至稳定,蛋白酶活性先下降后增至稳定,淀粉酶活性不发生明显变化;混合饲料组蛋白酶、淀粉酶活性不发生明显变化,后期纤维素酶活性接近芦苇组.单一组分饲料对其相应的消化酶既存在早期抑制诱导作用,也存在后期促进诱导作用.     

广西不同地区克氏原螯虾群体遗传多样性微卫星分析

[目的]了解当前广西克氏原螯虾(Procambarus clarkii)群体的遗传背景,为其人工养殖及种质资源保护提供参考依据.[方法]选取广西5个地区(南宁、大塘、融水、柳州和来宾)的克氏原螯虾群体作为研究对象,利用8对微卫星引物对各克氏原螯虾群体基因组DNA进行PCR检测,然后通过PopGene32和NTSYSpc 2.1等在线软件分析广西克氏原螯虾群体的遗传多样性.[结果]南宁(NN)、大塘(DT)、融水(RS)、柳州(LZ)和来宾(LB)5个克氏原螯虾群体的平均有效等位基因数(Ne)为2.5142~3.0574,平均期望杂合度(He)为0.5708~0.6489,平均多态信息含量(PIC)为0.4899~0.5843,存在中度至高度的遗传多样性,其中南宁群体和大塘群体的遗传多样性略低于融水群体、柳州群体和来宾群体.5个克氏原螯虾群体的平衡偏离指数(D)均为负值,且发生一定程度的Hardy-Weinberg平衡偏离,杂合子缺失现象普遍存在.5个克氏原螯虾群体间的基因流(Nm)为2.3898~6.0284,遗传分化指数(Fst)为0.0398~0.0947,表明各群体间存在广泛的基因交流,仅存在低度至中度的遗传分化;各克氏原螯虾群体间的遗传相似系数和遗传距离分别为0.6861~0.8583和0.1528~0.3768,其中,遗传距离趋势与Fst趋势一致,而遗传相似系数与Nm趋势一致,均表明柳州群体与来宾群体具有高度的相似性,遗传距离较近.UPGMA聚类分析结果也显示,南宁群体和大塘群体聚类为一支,而柳州群体先与来宾群体聚类再与融水群体聚类成另一支.[结论]广西不同地区克氏原螯虾群体具有一定的遗传多样性,但其杂合子缺失现象普遍存在,应通过适当引种及加强不同地区群体间的遗传交流,保护好克氏原螯虾的优良种质资源.     

克氏原螯虾食性和摄食活动的研究

对克氏原螯虾的食性和摄食活动进行了分析.结果表明,克氏原螯虾能适应多种生境,其食物组成随栖息地食物丰度而发生改变,丰度高的食物是其主要摄食来源;克氏原螯虾摄食活动具有明显的昼夜节律,晚间摄食活动明显多于白天,其摄食量在早6:00达到最高,晚18:00最低.     

河北滨海稻区稻田养殖克氏原螯虾模式初探

开展了河北滨海稻区稻田养殖克氏原螯虾模式的试验,对该区域稻田养殖的克氏原螯虾产量、规格、成本、利润等进行了分析,并对该模式的构建、运行过程中出现的问题进行了探讨。结果表明,在稻虾共作模式中,克氏原螯虾每公顷产量约为750-1200kg,成虾体长90mm左右,体重30g左右;每公顷水稻和虾的总利润为77598.6-109098.6元。比单一种稻模式每公顷的总利润高75264.597-106764.597元。     

克氏原螯虾暴发病细菌性病原的研究

从患暴发病的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)的肝胰腺中分离到3株细菌.人工注射感染显示,KSAX-3分离菌在浓度1010cfu/mL时可使95%以上健康克氏原螯虾死亡;在106cfu/mL浓度时可导致70%的健康克氏原螯虾死亡,并使克氏原螯虾出现明显的与自然条件下相似的疾病症状,试验结果表明该分离菌为克氏原螯虾致病菌.KSAX-3菌的主要生理生化特性为:革兰氏阴性,单鞭毛,发酵葡萄糖,甘露醇、氧化酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性,精氨酸脱羧酶、水杨酸、枸橼酸盐(西蒙氏)阴性,在含0%、10%NaCl的普通培养基中不生长,在含2%、4%、6%、8%NaCl的普通培养基中生长,在30℃、35℃、40℃、42℃条件下生长良好.鉴定该菌为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus).药敏试验结果表明,该菌对盐酸土霉素、盐酸四环素、环丙沙星、诺氟沙星、金霉素、硫酸卡那霉素、交沙霉素、烟酸诺氟沙星等8种药物敏感.     

克氏原螯虾原肌球蛋白的纯化及过敏原性分析

以13份甲壳类动物过敏患者血清的Western—blotting分析,确定克氏原螯虾主要过敏原为36ku蛋白质．通过盐析、等电点沉淀及热处理等方法纯化该蛋白质,以兔抗拟穴青蟹原肌球蛋白（Tropo-myosin,TM）多克隆抗体的Western—blotting分析,确定该蛋白质为TM．同源性分析表明,克氏原螯虾TM与南美白对虾TM、拟穴青蟹的氨基酸序列相似性较高（〉90％）．酶切位点预测显示,它分别有49个胰蛋白酶和6个胰凝乳蛋白酶的酶切位点．模拟胃肠液消化实验结果显示,纯化TM不易被胃蛋白酶降解,易于被胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶降解,进一步的Western—blotting和抑制性ELISA分析结果显示,其消化产物仍具有一定的免疫活性．采用蒸煮处理可降低TM的消化稳定性及免疫活性,且蒸煮处理时间越长,效果越显著．说明。TM为克氏原螯虾主要过敏原．与其他甲壳娄动物TM的序列相似件较高．     

日本沼虾和克氏原螯虾胃容量的研究

以体重0.672～4.827g的日本沼虾(Macrobrachium nipponense)和3.678～43.163g的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)为试验对象,研究这两种虾的胃容量及其与体长、体重间的关系。结果表明,日本沼虾和克氏原螯虾胃容量随着体重和体长的增加而增加;将日本沼虾、雄性克氏原螯虾和雌性克氏原螯虾的胃容量(y)和体重(x)进行回归分析,分别得方程式:y=0.021 5x+0.006 5(r2=0.948 5),y=0.044 7x-0.008 5(r2=0.964 8),y=0.043 6x+0.0519(r2=0.978 7);3.009～4.827 g的日本沼虾比胃容量显著小于0.672～2.811g的个体,12.967～42.071g的雄性克氏原螯虾比胃容量显著小于3.678～9.754 g的个体,不同规格的雌性克氏原螯虾比胃容量差异不显著。