牛卵巢内卵泡及卵母细胞生长发育的组织学研究

随机摘取牛离体卵巢18枚,常规石蜡切片,光镜下共观察卵泡5 818个,并测得卵泡、卵母细胞直径和透明带厚度（平均值）。结果:在整个卵泡发育过程中,卵泡与卵母细胞发育是完全显著正相关（P<0.01,R=0.9906）,其中腔前期P<0.01,R=0.9917,有腔期P<0.01,R=0.9951。腔前卵泡时期,卵泡和其卵母细胞直径增长幅度大体相等,而从有腔卵泡始,卵泡生长速度远远大于其卵母细胞。透明带与卵母细胞发育呈不显著正相关（P>0.05,R=0.9521）。     

牛卵巢卵泡Smad9表达模式的研究

本研究旨在探究Smad9在牛卵巢卵泡中的表达模式,为研究Smad9的功能奠定基础.从屠宰场获取牛卵巢,分离得到小卵泡(2 mm≤直径≤4 mm)、中卵泡(4 mm<直径<8 mm)、大卵泡(直径≥8 mm),用免疫组织化学技术对不同直径卵泡的Smad9蛋白进行定位分析;通过机械分离法分离卵泡颗粒细胞,用qPCR和Wes...     

牛卵泡颗粒细胞中生长相关基因的表达研究

随着卵巢卵泡的生长,卵泡内雌激素分泌量逐渐上升,雌激素通过其受体(Estrogen Receptors,Esrs)对卵泡的调节作用也在发生改变。该研究通过手术法获取牛卵巢上不同直径的卵泡颗粒细胞,对颗粒细胞中雌激素受体及相关基因表达进行研究。结果表明:Esr1和Esr2都能在牛卵泡颗粒细胞中表达,且随着卵泡的生长而显著下降(P0.05);Fshr的表达随着卵泡的生长而显著上升(P0.05),但在中、大型卵泡颗粒细胞中差异不显著(P0.05);Lhr在大型卵泡颗粒细胞中的表达量极显著高于小、中型卵泡(P0.01);随着卵泡的生长,Cox2在颗粒细胞中的表达显著上升(P0.05),而Hsd17b1的表达则显著下降(P0.05)。综上所述,随着卵泡生长,卵泡颗粒细胞对Esr1、Esr2作用的依赖性逐渐减弱;大卵泡在排卵前Lhr表达量急剧上升,同时诱导Cox2表达量显著上升而Hsd17b1表达量显著下降,表明大卵泡已启动排卵反应。     

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。     

牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18～ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6～ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18～ 2 0h处理组高于 6～ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18～ 2 4h缩短至 6～ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力 ,降低成本     

牛腔前卵泡的机械分离与采集

本实验建立了皮肤移植刀切割、剪碎、分级过筛的牛卵巢腔前卵泡体外分离技术 ,分离出了在直径 6 0～180 μm的不同大小的腔前卵泡 ,提高了腔前卵泡的回收效率 [5 7.2 3± 10 .2 1(个 /h) ,n =2 0 ]。     

牛卵泡颗粒细胞无血清培养的形态学观察

McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 ( 4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养。McCoy’s5a无血清培养中的颗粒细胞形态与分化特点类似于体内情况 ,说明颗粒细胞在该培养条件下 ,其功能可能更接近体内的生理状况     

FSH和胰岛素对牛卵泡颗粒细胞长期培养的影响

McCoy’s5a为基础培养液添加硒、转铁蛋白、雄烯二酮、谷氨酰胺 ,对牛卵巢上大 (直径 >8mm)、中 (4mm <直径 <8mm)、小 (直径 <4mm)非闭锁卵泡的颗粒细胞进行无血清培养 ,研究添加不同浓度的促卵泡激素和胰岛素对颗粒细胞增生、分化和激素分泌的影响。结果 :FSH可以诱导颗粒细胞增生及雌二醇合成能力 ,颗粒细胞的雌二醇合成能力与生理浓度的FSH呈剂量依赖方式。胰岛素对大、中、小卵泡颗粒细胞增生和雌二醇分泌有促进作用。     

无血清培养液对牛腔前卵泡体外发育的影响

本文研究了基础培养液中不添加犊牛血清(FCS)及添加不同比例FCS对牛腔前卵泡体外发育和激素分泌的影响。结果显示:添加FCS对腔前卵泡体外生长无明显促进作用,对腔前卵泡的体外发育、存活及激素分泌也影响不大。腔前卵泡在无血清条件下可持续生长、分泌性腺激素。     

BMY母牛生长发育规律的研究

[目的]探索BMY母牛的生长发育规律。[方法]用Excel2003进行体重生长曲线模拟分析,最适合的模拟方程为y=72.742x0.4503,决定系数为0.9788,对BMY母牛的绝对生长和相对生长速度进行研究。[结果]研究发现,12月龄之前的体重体尺生长速度均增快,之后生长速度均减慢,BMY母牛早期生长强度明显高于后期,随着月龄的增加,生长强度逐渐降低;生长强度最高的为体重,其次是胸围、体斜长、体高。[结论]BMY母牛的饲养重在前期的饲养,断奶之后到12月龄饲料供应应充足,保证足够的体重进行初配。     

藏绵羊卵巢组织学及卵泡超微形态的观察

旨在通过观察藏绵羊卵泡、黄体的组织学特征及卵泡的超微形态,探讨其与生理功能的关系.本研究运用大体解剖、常规组织切片和H.E染色及透射电镜技术对藏绵羊卵巢卵泡和黄体的组织结构特点以及卵泡的超微形态进行观察和分析.结果发现,藏绵羊黄体期和卵泡期卵巢的宽度和厚度存在显著差异(P＜0.05),而重量和长度无显著差异(P＞0.0...     

驴发情期卵泡变化初探

采用实时B型超声显像法,初步观察了4头母驴3个发情期卵泡的发育过程,以确定其排卵和输精时间。结果表明:驴卵泡直径大约每天增加1.5~3 mm,优势卵泡平均每天增长2.1 mm,发情周期在20~24 d之间,发情一般持续5~7 d,约在发情停止前1 d排卵。体格较大的驴发情期间卵泡数比体格较小的驴卵泡数多。     

一氧化氮对猪腔前卵泡生长发育的影响

旨在研究在培养液中添加不同浓度（0、0.001、0.01、0.1和1 mmol.L^-1）的一氧化氮供体硝普钠（Sodium Nitroprusside,SNP）对猪腔前卵泡体外生长发育的影响。结果显示,体外培养后,各处理组卵泡直径均增加,但未达显著水平（P〉0.05）;第6天1 mmol.L^-1SNP处理组卵泡存活率要显著低于1μmol.L^-1SNP（61.61%vs81.52%,P〈0.05）,与其它各组间差异不显著（P〉0.05）;卵泡成腔率在第4天以1μmol.L^-1SNP组最高,达到50%;第6天,1μmol.L^-1SNP组的卵泡成腔率显著高于0.1和1 mmol.L^-1SNP组（73.07%vs50%,47.62%,P〈0.05）,也高于对照组和0.01 mmol.L^-1SNP组,但差异不显著（P〉0.05）。培养结束（6 d）后,除1mmol.L^-1SNP组卵母细胞正常率显著低于1μmol.L^-1SNP组（71.21%vs 48.18%,P〈0.05）外,其余各组间差异不显著（P〉0.05）,其中0.001 mmol.L^-1SNP组卵母细胞正常率最高,为71.21%;0.001 mmol.L^-1SNP组COC回收率要显著高于其余各组（37.27%vs 22.88%、25.59%、20.74%和19.39%,P〈0.05）。结果表明,NO对猪腔前卵泡的存活、发育成腔及卵母细胞发育都有促进作用,但高浓度会产生毒性作用。     

一氧化氮与哺乳动物卵泡发育

一氧化氮作为一种分子物质参与哺乳动物生殖活动,参与卵泡发育周期的各个阶段,如原始卵泡、腔前卵泡、有腔卵泡,排卵和黄体阶段。文章主要围绕卵泡发育的各个阶段,一氧化氮合成酶在卵泡中不同细胞中的定位,一氧化氮与卵母细胞的成熟、排卵及卵泡闭锁方面进行综述。     

青海门源地区杂种荷斯坦牛与本地黄牛生长发育模型研究

[目的]测定776头青海门源地区杂种荷斯坦牛和本地黄牛体尺、体重及生长发育规律.[方法]Mitscherlich、Bertalantty、Logistic和Gompertz 4种生长曲线拟合.[结果]杂种荷斯坦牛的体高、体长、胸围及体重4个性状生长曲线用Compertz模型描述拟合效果最好;本地黄牛的体高和胸围生长曲线采用Mitscherlich模型较理想,体长采用Bertalantty模型较理想.在目前农家放牧饲养条件下,杂种荷斯坦牛生长拐点在5月龄140.22 kg体重,成熟体重为381.2 kg.本地母黄牛生长拐点分别为10月龄,106.8 kg体重成熟体重为290.2 kg.[结论]利用荷斯坦牛冻精改良门源本地黄牛,荷黄杂一代的体尺体重都有较大提高,并且差异明显.     

Effects of Nitric Oxide on the Growth and Development of Porcine Preantral Follicles Cultured in Vitro

<正>In order to investigate the effects of nitric oxide(NO) on the growth and development of porcine preantral follicles,we treated the follicles with different concentrations of sodium nitroprusside(SNP,0, 0.001,0.01,0.1 and 1 mmol/L),a NO donor.The results showed that the follicle diameter increased during in vitro culture,but there were no significant differences between the treatments(P0.05);the survival rate in the 1 mmol/L SNP group was significantly lower than that in the 1μmol/L SNP group(61.61% vs 81.52%,P0.05),but no significant differences were found between other treatments(P0.05);the rate of antrum formation in the 1μmol/L SNP group peaked at 50%on day 4,and the rate in the 1μmol/L SNP group on day 6 was higher than that in the 0.01 mmol/L SNP group;in addition,the rate of antrum formation in the 1μmol/L SNP group was significantly higher than that in the 0.1 and 1 mmol/L SNP groups (Day 6:73.07%vs 50%,47.62%,P0.05).After 6 days of culture,the proportion of normal oocytes in the1 mmol/L SNP group was significantly lower than that in the 1μmol/L SNP group(71.21%vs 48.18%, P0.05),with no significant differences between other treatments(P0.05).The recovery rate of cumulus cells oocyte complexes(COCs) in the 1μmol/L SNP group was significantly higher than that in the controls and all other treatments(37.27%vs 22.88%,25.59%,20.74%and 19.39%,P0.05).The results indicate that during the in vitro culture of porcine preantral follicles,low concentration of NO released from SNP improves growth and development of oocytes and follicular antrum formation while high levels of NO are toxic to follicular survival.     

分离方法及卵巢发育状况对猪次级卵泡分离和采集的影响

试验以直径在200～300 μm的次级卵泡为研究对象,研究了不同分离方法和卵巢不同发育状况对猪次级卵泡分离和采集的影响.结果表明,显微分离法每个卵巢可采集的卵泡数极显著高于剪碎过滤法,显微分离法分离每个卵泡所用的时间极显著低于剪碎过滤法;有黄体和无黄体的卵巢对卵泡采集的影响差异不显著,但有黄体的卵巢分离的卵泡数稍多于无黄体的卵巢.     

Oocyte Morphology from Primordial to Early Tertiary Follicles of Yak

The objective of this study was to investigate the developmental morphology of yak oocytes from the primordial follicle to the tertiary follicle. Yak oocytes from resting primordial (n = 6), activated primordial (n = 12), primary (n = 9), secondary (n = 7) and early tertiary (n = 5) follicles were processed and analysed by light and transmission electron microscopy. The resting primordial follicular oocyte was characterized by relatively smooth surface on the oolemma, the accumulation of free and organelle‐related smooth (SER) and rough endoplasmic reticulum (RER), round or oval mitochondria, and polyribosomes on the surface of the RER and throughout the ooplasm. The activated primordial follicular oocyte was dominated by numerous coated pits and coated vesicles on the oolemma, and round mitochondria. Up to the secondary follicular stage the oocyte displayed an increase in the number of microvilli, polyribosome, Golgi complexes and mitochondria with distinct cristae. During the secondary follicular stage, formation of the zona pellucida, development of a desmosome‐like connection between the oocyte and the granulosa cells, formation of the cortical granules in the oocyte and elongated mitochondria in nearly all oocytes were seen. In the early tertiary follicular oocyte, the perivitelline space was present and a decrease in free SER and RER in the ooplasm occurred; finally, the nucleus migrated from an eccentric to a peripheral location. In conclusion, the growth of the yak oocyte is associated with the relocation and modulation of a number of cytoplasmic organelles as well as the development of oocyte‐specific structures such as the zona pellucida, desmosome‐like connection and cortical granules.