Real-timeqPCR检测鸡胚中贝氏隐孢子虫方法研究

为检测鸡胚中贝氏隐孢子虫,本研究根据GenBank公布的贝氏隐孢子虫和原鸡18SrRNA基因序列设计针对贝氏隐孢子虫的特异性引物,并以贝氏隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,建立检测贝氏隐孢子虫SYBRGreen实时荧光定量PCR（Real—timeqPCR）方法,同时对贝氏隐孢子虫在鸡胚中培养7d后尿囊膜和尿囊液样品中虫体DNA进行检测。结果表明,建立的SYBRGreenreal—timeqPCR方法可特异性检测到贝氏隐孢子虫,建立的标准曲线线性关系良好（R2=0．998）,卵囊基因组DNA检测阈值为10个卵囊,重复检测结果显示试验重现性较好。该方法成功检测到尿囊膜和尿囊液中虫体DNA。本研究建立了快速、特异的定量检测鸡胚中贝氏隐孢子虫real—timeqPCR方法,可用于对贝氏隐孢子虫在鸡胚中繁殖规律分析和抗隐孢子虫药物筛选等研究。     

哺乳类和鸟类动物隐孢子虫交叉感染试验研究

为了明确哺乳类和鸟类宿主隐孢子虫能否交叉感染，分别从鸡、兔、小白鼠、鸭、鹌鹑分离到隐孢子虫进行交叉感染。结果，从鸡分离的隐孢子虫卵囊能感染鸭、鹌鹑、麻雀，而不能感染鸽、大白鼠、小白鼠、兔，从鸭分离的卵囊能感染鸡，从兔、小白鼠分离的卵囊不能感染鸡、鹌鹑，从鹌鹑分离的卵囊不能感染兔、大白鼠、小白鼠和鸡。提示隐孢子虫在宿主纲水平上有宿主特异性。     

隐孢子虫某些生物学特性研究

(1)对长春地区兔、小鼠、牛以及婴幼儿腹泻的隐孢子虫感染情况作了调查,其感染率分别为36%、90%、9/10和1/22;(2)对兔隐孢子虫卵囊排出规律的观察结果表明,每隔6～8d出现一个高峰期,在两个高峰期之间有时检不到卵囊;(3)交叉感染试验,从兔粪便中分离的卵囊经口感染BALB/c乳鼠和雏鸡后,在鼠粪便中检到卵囊,而在鸡粪便中未发现卵囊;(4)建立了兔和鼠的隐孢子虫病动物模型;(5)成功地进行了隐孢子虫体外培养试验;(6)鼠隐孢子虫病的治疗药物筛选结果,10~(-3)mol/L SM520和10~(-6)mol/LSMW在体外对隐孢子虫有杀灭作用;动物试验发现,中药配方I和SMW对鼠隐孢子虫有一定抑制作用.     

隐孢子虫卵囊部分特性研究

本试验对小球隐孢子虫卵囊、鼠隐孢子虫卵囊以及新发现的隐孢子虫亚型卵囊的抗酸染色特性进行了观察，发现只有小球隐孢子虫卵囊具有酸染色特性。     

双抗夹心——ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心－ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立，试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经过２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心－ＥＬＩＳＡ试验，结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性，并不与兔球虫粪便发生类属反应，此外，本试验还在     

双抗夹心─ELISA诊断兔隐孢子虫病初步研究

本文报道了应用双抗夹心─ＥＬＩＳＡ检测兔粪便中隐孢子虫卵囊抗原方法的建立。试验所用抗体为抗小球隐孢子虫（Ｃ．ｐａｒｖｕｍ）卵囊壁的单克隆抗体，经对２０头份兔粪便样本分别进行抗酸染色和双抗夹心─ＥＬＩＳＡ试验．结果抗酸染色法检出８份有隐孢子虫卵囊，而ＥＬＩＳＡ法除对抗酸染色阳性的８份粪样判为阳性外，还对抗酸染色阴性的１份粪样判为阳性；并不与兔球虫粪便发生类属反应。此外，本试验还在稀释液中加入ＥＤＴＡ，并增加了反应温度，使得试验在抗体包被反应板并封闭完成后３０分钟结束整个检测过程。     

合肥市犬隐孢子虫感染情况初步调查

目的了解合肥市犬隐孢子虫的感染情况。方法在合肥市随机采集不同年龄、性别与饲养条件的犬粪样69份,采用金胺-酚改良抗酸染色法检测粪样隐孢子虫感染情况,并根据卵囊大小和形态,进行虫种鉴定。结果犬隐孢子虫感染率为28.99%。对68个隐孢子虫卵囊进行观察和测量,椭圆形卵囊大小平均为6.20μm×4.34μm,卵囊形状指数平均为1.44,初步鉴定为鼠隐孢子虫（Cryptosporidium muris）;近圆形卵囊,大小平均为4.69μm×4.58μm,卵囊形状指数平均为1.125,初步鉴定为微小隐孢子虫（Cryptosporidium parvum）。结论犬隐孢子虫的感染率存在年龄差异,年龄越小,感染率越高;饲养管理条件差的犬隐孢子虫感染率高;而隐孢子虫感染率与性别没有关系。     

鼠大型隐孢子虫和兔的隐孢子虫在人胚肺细胞上培养成功

中国人民解放军兽医大学寄生虫病教研室将从鼠粪便中分离的大型隐孢子虫(C.muris)和从兔粪便中分离的小型隐孢子虫(C.parvum)的卵囊,采用梯度离心法纯化,再经胰酶和兔胆汁消化脱囊产生子孢子。把一定量的子孢子接种于单层人胚肺细胞HFLC)上,6 h后换液并每天观察虫体发育情况,9 d后收获检查。 结果发现,在不     

抗酸染色法对隐孢子虫卵囊的检查

本试验主要是为探明抗酸染色法在隐孢子虫病诊断中的作用和特异性。为了证明改良抗酸染色对隐孢子虫卵囊的特异性和敏感性,用改良抗酸染色法对相似原虫进行染色。结果显示只有隐孢子虫卵囊和鞭虫卵染成红色,其他虫卵不着色。鞭虫卵外形和体积与隐孢子虫卵囊相差非常大,很容易区别。其他粪样材料呈现绿色,有些结构也可染成红色,从外形和大小上很容易与隐孢子虫卵囊相区别。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪     

猪源隐孢子虫卵囊的分离及基因型鉴定

应用RT-PCR方法对南京、上海和合肥猪源隐孢子虫卵囊SSU rRNA部分序列进行扩增,产物测序后提交GenBank,收录号为DQ855266、DQ855267;用BLAST和DNAStar软件与GenBank参考序列进行比较,分析其同源性,绘制系统发育进化树,结合卵囊形态学观察和对小鼠、大鼠、兔、山羊和鸡的传染性试验确定隐孢子虫种类或基因型。结果表明,3地区猪源隐孢子虫分离株与微小隐孢子虫(C.parvum)同源性达94%~100%,与C.parvummouse型有99.8%~100%的同源性,并处于进化树的同一分支。因此,3地区猪源隐孢子虫是C.parvummouse型,提示猪和鼠之间存在交叉传播的可能。     

猪隐孢子虫病调查报告

隐孢子虫病（Cryptosporidiosis）是由隐孢子虫属原虫引起的一种人畜共患的肠道寄生虫病。动物感染后常见的临床体征为间歇性水泻、脱水、厌食、进行性消瘦和减重。本试验应用直接涂片法、饱和盐水漂浮法、离心法以及改良抗酸染色法对沈阳东陵区3个猪养殖场的53头猪的粪便样品进行了隐孢子虫卵囊的分离。结果显示,未经染色隐孢子虫近似圆形,无色,囊壁光滑,卵囊内可见到数量不等的暗色颗粒,卵囊平均大小为4.1μm×3.6μm。经改良抗酸染色法染色后的隐孢子虫卵囊呈红色,近似圆形,轮廓清晰,背景为绿色。不同年龄的猪隐孢子虫感染率不同,年龄越小感染强度越大,育肥猪的感染率为4%,断奶仔猪的感染率为11%。     

奶牛源微小隐孢子虫的分子鉴定及动物感染试验

采用饱和蔗糖溶液漂浮法检查商丘市某奶牛场牛新鲜粪便样本的隐孢子虫卵囊,用18SrRNA基因对隐孢子虫进行PCR扩增和限制性片段长度多态性分析;基于GP60基因位点对微小隐孢子虫进行基因亚型鉴定。结果显示:103份样本中有50份为隐孢子虫阳性,42份经形态学鉴定为安氏隐孢子虫,8份形态学未能鉴定到种。经限制性片段长度多态性分析,7个分离株为微小隐孢子虫,1个分离株为牛隐孢子虫;序列比对分析,7个微小隐孢子虫均为人兽共患基因亚型IIdA19G1。接种1头3日龄犊牛1×106个卵囊,潜隐期为3d,显露期为14d,于感染后第7天和第10天出现2个排卵囊高峰期,收集到大量纯卵囊。     

硝唑尼特抗免疫抑制小鼠隐孢子虫活性试验

研究硝唑尼特抗隐孢子虫的活性,采用地塞米松抑制昆明鼠免疫功能,经口接种感染微小隐孢子虫孢子化卵囊,成功制备出微小隐孢子虫感染的动物模型。将感染微小隐孢子虫的小鼠随机分为感染对照组以及高、中、低剂量3个药物剂量组,连续经口灌服硝唑尼特治疗1周,观察每只小鼠每天排出微小隐孢子虫卵囊的数量,以感染抑制率来评价硝唑尼特抗微小隐孢子虫的活性。结果表明,200 mg/(kg.d)剂量组能显著减少小鼠排出隐孢子虫卵囊的数量,对治疗微小隐孢子虫感染具有较好的疗效。     

合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫感染情况调查

[目的]调查合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫的感染情况。[方法]采用饱和蔗糖水漂浮法对环尾狐猴、赤猴和狒狒等6种灵长类动物粪便进行卵囊浓集,采用抗酸染色法对其卵囊染色后进行形态学观察。在形态学观察基础上,对上述疑似粪样中的卵囊进行DNA提取,并采用PCR技术扩增隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP),以1%琼脂糖凝胶电泳鉴定PCR扩增产物,并对该园内灵长类动物感染隐孢子虫情况作统计分析。[结果]经形态学鉴定,初步判定从该动物园灵长类动物粪便中获得的卵囊大小为4.66μm×5.18μm,与报道的隐孢子虫形态特征相一致;利用PCR技术扩增得到的目的基因大小为377bp,与预期结果相一致。数据统计表明:合肥野生动物园灵长类动物隐孢子虫感染率为16.67%。[结论]合肥野生动物园灵长类动物存在隐孢子虫感染情况,具有感染人畜的潜在风险。     

应用PCR检测隐孢子虫卵囊的研究

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。为了在临床样品中更准确、快速地检测隐孢子虫卵囊，从初步纯化的含有不同数量隐孢子虫卵囊的样品中和含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA或用DNA纯化试剂盒对提取的奶牛粪便中卵囊DNA进行纯化之后用作PCR模板，用1对人工合成寡核苷酸作为PCR引物，扩增片段大小为452bp。优化了Mg^2 浓度、引物浓度和dNTP浓度，并进行了特异性检验。建立的PCR具有隐孢子虫属特异性，不仅扩增出新鲜样品DNA提取物中的目的片段，而且扩增出放置6年之久的DNA提取物中的目的片段。样品经过初步纯化之后，最低检测值100个卵囊／ml；从含有隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中提取DNA，尔后经过DNA纯化试剂盒纯化，PCR最低检测值为10^5个卵囊/g粪便。     

河南省山羊隐孢子虫流行病学调查

对河南省4个山羊场进行了隐孢子虫病流行病学调查.采集山羊粪样1 017份,以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查,结果共检出隐孢子虫卵囊阳性山羊粪样28份,平均感染率为2.75%;有2个山羊场检出隐孢子虫卵囊,场感染率为50%;中牟某羊场阳性率最高,达4.95%;在各年龄段中,2～4月龄山羊隐孢子虫感染率最高,达5.43%;山羊隐孢子虫感染可能与季节有关;所检出的隐孢子虫卵囊经形态学观察,初步鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum).     

广东省乳牛隐孢子虫病的流行病学调查

对广东省10个奶牛场进行了隐孢子虫病的流行病学调查，并按大致10％的采样率采集了1087头乳牛的新鲜粪便，以饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法检查隐孢子虫卵囊，其中检出卵囊的阳性牛92头，阳性率为8．46％；有7个场检出隐孢子虫卵囊，场阳性率为70％。这7个奶牛场的卵囊阳性检出率分别是10．00％、7．19％、6．67％、9．80％、6．72％、12．76％和6．72％。调查发现，乳牛隐孢子虫的阳性率和感染强度与乳牛年龄呈负相关关系，而且可能与气候有关；所检出的隐孢子虫卵囊经形态学鉴定为鼠隐孢子虫(Crptosporidium muris)。     

猫粪便中隐孢子球虫卵囊染色和浓集检测法的比较

猫粪便中隐孢子球虫卵囊染色和浓集检测法的比较［英］Ｍ．Ｍ．Ａ．Ｍｔａｍｂｏ等隐孢子虫是一种球虫目的寄生虫，可引起人和多种动物的腹泻。隐孢子虫病的诊断主要是从宿主粪便中查得卵囊而确诊。已用于隐孢子虫卵囊检查的有卵囊染色的改良萋－尼法（ＭＺＮ）、金胺酚法...     

种鸡感染隐孢子虫的鉴定

本文对广东某种鸡场3万余只中40%排白色、浅黄色稀粪的种鸡，作病因检查时，发现隐孢子虫卵囊，并根据测定数据，形态及寄生部位作鉴定，作者认为此次检出的卵囊介于贝氏隐孢子虫与火鸡隐孢子虫之间，究意属何种隐孢子虫还有待探讨。