草莓品种亲缘关系的AFLP分子标记分析

 利用AFLP技术对我国国家草莓资源圃内保存的107个草莓品种进行了DNA多态性分析。从64对“2 + 2”引物中筛选出10对引物应用于扩增基因组DNA, 共获得清晰可辨的581条带, 其中412条为多态性带。UPGMA方法聚类分析结果显示, AFLP分子鉴定结果与其系谱关系非常一致, 表明AFLP指纹图谱分析能很好地鉴别草莓品种之间的遗传关系。     

AFLP分子标记在果树上的应用

AFLP（扩增片段长度多态性）是一种新的DNA分子标记技术。该文主要对其基本原理进行了简要介绍,并从果树种质资源、果树遗传育种等方面,概述了AFLP标记在果树上的应用进展,评述了其存在的问题和应用前景。     

茶树品种资源遗传多样性的AFLP研究

 利用AFLP - 银染分子标记技术, 对40个茶树品种(系) 进行遗传多样性与亲缘关系分析。选用多态性高、分辨力强的引物组合E-ACG/M-AAC、E-AGG/M-AAG与E-AGG/M-AGT分别对供试材料的基因组DNA进行扩增, 共获得226条清晰可辨的带, 其中多态性带207条, 多态位点百分率为91.59% ,这表明供试品种资源在DNA水平上酶切位点的分布存在广泛的变异。40份资源所检出的位点平均有效等位基因数、平均基因多样度、平均Shannon信息指数, 分别为1.59 ±0.09、0.35 ±0.04、0.53 ±0.05。应用SPSS软件计算遗传距离介于0.13～0148之间, 平均为0.32; UPGMA法将40份资源分成4个类群, 从相似性系数分析了各品种资源间的亲缘关系。     

用AFLP标记分析广西龙眼种质遗传多样性

选用10对AFLP引物组合分析了广西38个龙眼品种（优良单株）和两个龙眼近缘亚种龙荔单株,以及10个来自国内外其他产区龙眼品种的遗传多样性。在所扩增的570条AFLP主带中,有485条具有多态性,占85.1%。所用引物可将供试的品种（优良单株）区分开来,供试材料的遗传相似系数在0.39（两个亚种间）到0.98之间。根据遗传相似系数（UPGMA, N-J）得到的分类树状图与传统方法的分类结果相类似。结果表明,广西龙眼种质具有较广泛的遗传多样性。     

哈密瓜杂交种纯度的AFLP指纹鉴定

 MseI/ Pst I 引物M21P69 对哈密瓜一代杂种‘雪里红’及其父母本, M17P35 对哈密瓜一代杂种‘9818’和‘9321’和各自的父母本间扩增的AFLP 指纹, 可清楚地表明一代杂种与其父母本之间的遗传关系, 并可作为杂交种纯度鉴定的依据。     

苹果属观赏海棠实生单株亲本的AFLP鉴定

应用AFLP技术, 对以苹果属观赏海棠品种王族(Malus ‘Royalty’) 为母本, 以5个材料为父本的38个实生单株进行多态性分析。结果表明: 筛选出的9对分辨率高的引物共扩增出349条带, 其中多态性带303条, 多态位点百分率达86.8%。根据聚类分析和电泳图谱扩增得到亲本材料的特征带, 鉴定出19株实生单株的父本可能为‘宝石’ (Malus‘Jewelberry’) ; 7株实生单株的父本可能为海棠花(Malus spectabilis Borkh. ) ; 3株实生单株的父本可能为草莓果冻(Malus‘Strawberry Parfait’) ; 不能确定其父本的实生单株有9株。     

DNA分子标记在猕猴桃上的应用

猕猴桃为中国半特有属植物,由于雌雄异株,自然杂交明显,染色体倍性复杂等原因,用常规方法对其进行种类(品种)鉴定、系谱分析、遗传多样性研究等难度较大。DNA分子标记具有许多优点,它的发展和应用为猕猴桃研究提供了一条有效的途径。就DNA分子标记在猕猴桃系谱分析与品种(品系)鉴定、性别鉴定、染色体起源分析、胞质遗传与系统发育研究、遗传多样性研究和分子遗传图谱构建等方面的应用进行了详细阐述,同时指出了DNA分子标记在猕猴桃研究中存在的问题和今后研究工作的重点。     

富士苹果AFLP体系的优化及其在鉴定早熟芽变中的应用

 以‘长富2号’苹果为材料,采用优化的AFLP技术对其早熟芽变与母株进行初步研究,筛选了64对引物,其中43对引物扩增结果理想,共产生了2,700条带。有4对引物在芽变与母株之间产生了7条差异片段,主要集中在350~800 bp之间。研究表明早熟芽变是由于遗传物质改变造成的,同时也说明利用该体系对苹果芽变进行分析和鉴定获得成功。     

用AFLP分子标记鉴定冬枣自然授粉实生后代杂种的研究

 应用AFLP技术对65株冬枣自然授粉实生后代进行杂种鉴定, 从81对EcoRⅠ和MseⅠ选择性引物中筛选出12对带型清晰且多态性较高的引物。用这12对引物共扩增出517条谱带, 其中多态性带376条, 多态性百分率为72.7%。共扩增出金丝小枣特征带10条, 鉴定出34株冬枣×金丝小枣杂交实生苗;扩增出尖枣特征带7条, 鉴定出冬枣×尖枣杂交实生苗15株; 不能确定的有16株。     

杧果主要品种遗传多态性的AFLP标记研究

 采用扩增片段长度多态性AFLP标记对国内外31个杧果主要品种进行分类与亲缘关系研究。结果表明: 筛选出的14对引物组合在31份杧果种质中共扩增出了1 761条带, 其中多态性带的比例为97%。平均每对引物产生125.8条带和121.6条多态性带, 总的多态性带率为97%; 基于AFLP标记, 以0.48的相似系数为阈值, 所有供试　果材料被分为7大组群, 第一组群内以0.52为阈值, 又可分为6组。与形态标记相比, 基于AFLP标记的杧果分类体系更能反映杧果品种间的亲缘关系。     

威赛克柱型苹果与旭的AFLP多态性研究

以旭和威赛克等 8个柱型苹果品种 (品系 )为试材 ,建立了AFLP银染技术体系。经过引物筛选 ,发现引物PstI GAC/MseI TA和PstI GAC/MseI CG可分别在旭和威赛克之间各扩增出 1条特异片段 ,初步认为这两条特异片段可能与苹果柱型Co基因相关。     

苹果果实酸/低酸性状的SSR分析

 以91株‘东光’和‘富士’的正反交F₁ 代群体为试材, 测定了成熟果实可滴定酸含量和果实不同发育阶段苹果酸含量的变化, 从表型上分析了苹果酸的遗传规律。利用140对共显性遗传的SSR引物对高酸和低酸个体群体分离分析, 筛选到一个与果实酸/低酸性状连锁的标记SDY085, 遗传距离为8.89 cM, 表型分析和标记分析都表明苹果果实酸/低酸性状由一对主效基因Ma/ma控制, 并且Ma对ma为完全显性, 而酸个体中苹果酸的连续分布则是加性多基因作用的结果。     

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记

 本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F₁ ,然后得到F₂ 性型分离群体, 利用分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA) 构建全雌和弱雌两个基因池, 筛选了64对AFLP选择性引物EcoR I-NN +Mse I-NNN组合, 发现EcoR I-TG +Mse I-CAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234 bp的特异带。经F₂ 代单株验证, 该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAP MAKER (Version 310) 软件分析, 该标记与全雌性位点的连锁距离在617 cM。命名该连锁标记为TG/CAC₂₃₄。将该特异条带回收、克隆、测序, 设计特异SCAR引物, 再对F₂ 代单株基因组DNA进行扩增, 仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166 bp 的特异带, 表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记, 该标记命名为SA₁₆₆。     

应用AFLP进行香牙蕉品种(系)的鉴别与分类

采用AFLP技术,对35个香牙蕉品种(系)进行了鉴别与分类。从AFLP试剂盒所提供的64对引物组合中选取两对引物组合EcoR I ACC+Msc I CAT和EcoR IACC+Msc I CAG对35份香牙蕉材料进行了AFLP分析,共得到扩增位点107个,其中多态性位点84个,多态性位点比例达到78.5%,对35个品种的区分率达到100%。各品种(系)多态性带数存在差别,多态性带数最多为海南红蕉(56条),多态性比例最高为0.666 7,可见其杂合程度较高;多态性带最少的为大丰1-1号(33条),其多态性比例为0.392 9。各品种(系)相互之间的相似系数介于0.71~1.00,表明香牙蕉品种(系)之间遗传关系相对较近。依相似系数0.88的水平,可以将供试的35个香牙蕉品种(单株)分为6个品种群。鉴别了3个引自不同国家的品种,几内亚、苹果以及阳江矮实际上为同一个香牙蕉品种。该研究结果基于AFLP分子标记,能从分子水平上反映香牙蕉地方品种之间的亲缘关系,可以作为香牙蕉品种(系)分类的依据。     

苹果新品种自交不亲和基因型的分子生物学鉴定

根据保守氨基酸序列FTQQYQ 和anti-¹/_M IWPNV 设计苹果自交不亲和基因引物P1 : 5′2 TT2TACGCAGCAATATCAG23′; P2 : 5′2 ACGTTCGGCCAAATA /CATT23′, 利用PCR - RFLP分析方法, 以河北省新引进的苹果品种美国8号、昂林、松本锦、华冠、南方脆幼叶为试验材料, 鉴定其自交不亲和基因型分别为S₉S₂₇、S₁S₉、S₉S ₉、S₂S₉、S₂S₉。     

20个苹果品种的S基因型鉴定

以‘富士’、‘华瑞’、‘华硕’和‘华星’等20个苹果品种为材料,利用S等位基因高度保守氨基酸序列FTQQYQ和anti-1/MIWPNV设计的S基因通用引物,以及S等位基因多态性序列设计的19对特异引物,PCR扩增、测序以鉴定20个品种的S基因型;并用‘华瑞’和‘华硕’分别与‘美八’、‘锦秀红’、‘华冠’和‘富士’进行授粉试验验证S基因型的准确性。PCR结果表明:通用引物扩增S等位基因时,仅‘富士’、‘华瑞’、‘华硕’、‘华星’、‘美八’和‘红脆宝’6个品种有效地扩增出2条特异的S等位基因条带,其S基因型有S1S_9、S_9S_(24)、S_5S_9和S_5S_(24)等4种;19对特异引物扩增S等位基因时,‘华帅’等14个品种扩增得到2条特异性条带,S基因型有S_(10)S_(19)、s_2s_3、s_2S_5、s_3S_(10)、s_2S_9、S_5S_(24)、S_9S_(10)、s_3S_(10)和S_5S_9等9种。因此,20个苹果品种的S基因型分别为:‘富士’S1S_9,‘华瑞’和‘华硕’S_9S_(24),‘华星’、‘美八’和‘红珍珠’S_5S_9,‘红脆宝’、‘华玉’和‘99-1-29’S_5S_(24),‘华帅’S_(10)S_(19),‘金玉’s_2s_3,‘早红’、‘华美’和‘嘎拉’s_2S_5,‘Seokwang’s_3S_(10),‘锦秀红’、‘蜜玉’和‘华冠’s_2S_9,‘绿佳’S_9S_(10),‘信浓红’s_3S_(10)。2015和2016年‘华瑞’与‘华硕’的正反交组合坐果率较低(低于15.52%);而‘华瑞’和‘华硕’分别与‘美八’、‘锦秀红’和‘华冠’、‘富士’品种的正反交组合坐果率较高(高于46.30%)。因此,本试验中相同S基因型的授粉组合其坐果率较低,不同S基因型的授粉组合其坐果率较高,授粉试验支持S基因型鉴定结果。     

苹果柱型基因的ISSR分子标记研究

 以普通型苹果品种‘富士’和柱型苹果‘舞姿’以及其杂交后代的柱型与非柱型实生苗为试材, 建立了苹果的ISSR ( Inter-Simple Squence Repeat polymorphic DNA) 分子标记体系, 并将ISSR 标记用于苹果柱型基因Co 的遗传分析。结果表明, 在20μL 反应体系中各组分的用量为Taq DNA 聚合酶1U、Mg²⁺ 的浓度为2.5 mmol·L^-1 、模板DNA 用量20 ng、引物浓度0.2μmol·L - 1及退火温度52 ℃, 80 %引物具有良好的扩增能力。调整模板DNA 的用量、引物浓度及退火温度能够优化苹果ISSR-PCR 扩增体系。从所筛选的65 个引物中获得了35 个ISSR 标记, 其中33 个标记呈现1∶1 分离, 可用于苹果柱型基因的遗传分析。     

苹果柱型基因Co的一个AFLP 标记的SCAR转换

 将苹果柱型基因的一个AFLP 标记成功地转换成了简单实用的SCAR 标记。首先对AFLP 标记片段进行序列测定, 然后根据序列特点设计了两对特异引物CoA1/ CoA2 和CoA1/ CoA3 , 每条引物长20 bp。PCR 结果表明CoA1/ CoA2 可以扩增出216 bp 和148 bp 两条带, 其中216 bp 的为柱型性状的特征带; CoA1/CoA3 可以扩增出273 bp 和205 bp 的两条带, 其中273 bp 的为柱型性状的特征带。两对引物在杂交后代中扩增出的特征带与柱型性状的分离重组率都很低(CoA1/ CoA2 为6. 3 % ±2. 5 %; CoA1/ CoA3 为7. 3 % ±2. 6 %) , 所以它们都可以作为该SCAR 标记的特异引物所用。