长春花ISSR-PCR 反应体系的正交优化

[目的]筛选最适的长春花ISSR-PCR反应体系。[方法]采用正交试验方法,对影响长春花ISSR-PCR反应体系的引物浓度、dNTP浓度、Mg2＋浓度、TaqDNA聚合酶浓度和模板DNA浓度5个因素在4个水平上进行正交试验,建立适合长春花ISSR-PCR的反应体系。[结果]长春花ISSR-PCR反应体系的最佳条件：引物浓度0.50μmol/L,dNTP浓度0.10 mmol/L,Mg2＋浓度3.00 mmol/L,Taq酶浓度0.75U/25μl,DNA模板浓度350 ng/25μl。采用该反应体系筛选出12对适合于长春花ISSR-PCR反应的引物。[结论]利用优化系统进行长春花的ISSR-PCR反应,可获得稳定性高、重复性好、背景清晰的电泳结果。     

用正交设计法优化辣椒ISSR-PCR反应体系

采用正交设计L16(45)对辣椒ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度)在4水平上进行优化试验。结果表明,最佳反应体系为:在25μl总反应体系中,含1×PCR缓冲液、2.0 mmol Mg2+、1.5 unitTaqDNA聚合酶、0.25 mmoldNTP、0.48μmol引物、120 ng模扳DNA。扩增程序为:95℃预变性5 min;94℃变性45 s,51℃退火1 min,72℃延伸2min,进行38个循环;最后72℃延伸10 min。新优化的辣椒ISSR-PCR反应体系和程序有很好的重复性和稳定性。此研究为今后利用ISSR技术对辣椒进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位提供了一个较理想的应用方案。     

正交设计优化杂交油菜ISSR-PCR反应体系研究

采用正交设计法优化适合于杂交油菜的ISSR体系,对影响ISSR-PCR的多个因素,包括Mg2+、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物用量等进行了比较、优化;对DNA模扳浓度,退火温度进行了筛选。结果确定了杂交油菜ISSR-PCR反应体系的最佳方案为:94℃预变性5分钟,1个循环;每个循环94℃变性20s;56.2℃退火1分钟,72℃延伸80s,38个循环;72℃完全延伸6分钟;4℃保存。20μl PCR反应体系包括10×Buffer 2.5μL、模板20ng 1μl、2.5mmol/L dNTP1μl、10μmol/L Primer 1.2μl、5U TaqE0.2μl、25mmol/L Mg2+1.4μl。     

早熟马铃薯 ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

为得出马铃薯ISSR-PCR最佳的反应体系,采用正交试验设计,对rTaq DNA聚合酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs和引物进行5因素4水平筛选.结果表明,马铃薯ISSR-PCR的最佳反应体系为:总体积25 μL的反应体系中含有rTaq DNA聚合酶0.5 U、Mg2+浓度为2.5 mmol/L、模板DNA用量为75 ng、dNTPs浓度为200 μmol/L、引物浓度为0.8 μmol/L.这些因素对PCR反应的影响大小顺序为Mg2+浓度＞rTaq DNA聚合酶用量＞dNTPs浓度=引物浓度＞模板DNA用量.应用该最佳反应体系对39条ISSR引物进行筛选,得出15条条带清晰、条带数多、重复性好的引物.并通过退火温度梯度试验得出筛选引物的最佳退火温度.     

正交设计优化辣椒SRAP-PCR反应体系及引物筛选

以辣椒基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP反应体系中的5种关键因素(Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA)进行优化,结果表明,辣椒SRAP-PCR最佳反应体系为:Taq DNA 聚合酶0.75 U、Mg2+ 0.6 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.8 μmol/L、模板DNA 50 ng,总体积为10 μL.运用该体系对辣椒3份种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从198个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的35个引物组合.该体系的建立与多态性引物组合的筛选为SRAP标记技术在辣椒分子遗传学中的应用提供科学依据.     

大叶石上莲ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为建立并优化大叶石上莲(Oreocharis benthamii)ISSR-PCR反应体系,采用改良的CTAB法提取大叶石上莲叶片DNA,利用正交试验设计方法,从Mg~(2+)、d NTP、引物、Taq DNA聚合酶以及模板DNA 5因素4水平,对大叶石上莲ISSR-PCR反应体系进行优化,确立了适用于大叶石上莲的扩增多态性高、稳定性强、条带清晰的ISSR最佳反应体系:2.0μL的10×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg~(2+),0.25 mmol/L d NTP,0.7μmol/L引物,2.0 U TaqDNA聚合酶,30 ng DNA模板(20μL反应体系)。在此基础上,从100条引物中筛选出13条ISSR扩增引物,其中5条引物最为合适并已确定其最佳退火温度。     

正交优化法建立沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系

根据正交试验设计的原理,设计了探索性正交试验和细调性正交试验来确定沙打旺ISSR-PCR体系中各成分的浓度。得到既稳定又能扩出最多条带的适合沙打旺的ISSR-PCR最佳反应体系,即20μl的反应体系中含有1×buffer,dNTP 0.2 mmol/L,Taq酶1.0 U,引物0.3μmol/L,Mg2+2.5 mmol/L,DNA模板2.5 ng/μl。然后对沙打旺ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火试验,得到这条引物的最佳退火温度为54.1℃。这一最佳体系的建立为今后利用ISSR标记技术,研究沙打旺的遗传多样性提供了标准化程序。     

长柱金丝桃ISSR-PCR反应体系的建立与优化

为筛选可用于长柱金丝桃遗传分析的最适ISSR-PCR反应体系,采用正交试验对影响ISSR-PCR反应的5个重要因素(Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg~(2+)、引物和模板DNA浓度)进行4水平正交优化,并对退火温度、循环次数进行筛选。结果表明,20μL ISSR-PCR最佳反应体系包括Taq DNA聚合酶1.0 U、dNTPs 0.2 mmol·L-1、Mg2+3.0 mmol·L~(-1)、引物0.4μmol·L~(-1)、DNA模板40 ng,对ISSR-PCR反应的影响程度由大到小为:Taq DNA聚合酶、引物、Mg2+、dNTPs、DNA模板;引物UBC822的最佳退火温度52.7℃,最佳循环次数41,利用优化的反应体系从61条引物中筛选出12条稳定性好、多态性高的引物,验证试验表明优化的反应体系具有较高的稳定性。     

利用正交设计优化向日葵ISSR-PCR反应体系

向日葵产业的发展对调整黑龙江省种植业结构、利用中低产田、增加农民收入具有十分重要的作用,为了推广ISSR分子标记技术在向日葵分子育种上的应用,利用正交设计对向日葵ISSR-PCR反应体系中的5个因素(模板DNA、dNTP浓度、Mg2+浓度、引物浓度、Taq酶用量)在4个水平上进行优化,确立了适合向日葵ISSR-PCR反应的20μL体系:50ng模板DNA、2.0μmol·L-1dNTP、37.5μmol·L-1 Mg2+、8μmol·L-1引物、8UDNA Taq酶。     

正交设计优化棉花黄萎病菌ISSR-PCR反应体系

采用正交试验设计方法,对ISSR的影响因素进行研究,从Taq酶、Mg2+、dNTP和引物4因素3水平进行优化试验,筛选并建立了适合棉花黄萎病菌的ISSR-PCR最佳反应体系,即25 μL的反应体系中含有1×PCR buff-er,00 μmol/L dNTP,.75 μmol/L引物,50 mmol/L Mg2+,U TaqDNA聚合酶和40 ng模板DNA.     

莲雾根结线虫种类鉴定研究

在福建省厦门市翔安区新圩镇1个果园发现莲雾种苗受根结线虫侵染。经形态特征测量、观察以及rDNAITS区序列分析,该线虫被鉴定为南方根结线虫(Meloidogyne incognita)。     

莲雾果实香气成分的GC-MS分析

采用顶空固相微萃取法,提取"农科二号"莲雾成熟果实中的挥发性物质,并采用气相色谱-质谱法分析鉴定。结果表明:"农科二号"成熟果实检测到12种香气成分,其中萜烯类6种,占63.74%;醇类1种,占22.48%;醛类1种,占0.48%;酯类1种,占4.68%;呋喃类1种,占4.44%;其他2种,占4.17%。匹配度超过90%的有9种,约占93.46%,主要香气物质为顺-3-壬烯-1-醇、(-)-AlphA-荜澄茄油萜和反式石竹烯。     

莲雾采前管理及采后商品化处理技术

果实的采前管理与果实的品质和耐贮性关系密切.介绍了莲雾结果树的肥水管理、花果管理、病虫害防治等采前管理技术,同时介绍了莲雾商品生产的采后处理技术,包括果实的适时采收、分级、预冷、保鲜处理等重要环节,为莲雾的商品化生产提供相应的标准化操作规范.     

莲雾黑腐病病原菌的鉴定及其生物学特性研究

通过病害症状观察、分离菌致病性测定,以及分离菌株的形态和培养性状观察、rDNA-ITS序列分析将从莲雾果实上分离到的菌株FJAT-9860鉴定为可可毛色二孢菌Lasiodiplodia theobromae.菌株FJAT-9860在PDA培养基上菌落最初为白色,后逐渐变为灰色到黑色.分生孢子为单细胞,无色透明,椭圆形至圆形.ITS序列分析表明,菌株FJAT-9860与Lasiodi plodia theobromae strain亲缘关系最近,同源性为99％.该菌株最适生长温度为25℃,最适生长pH值为8.0,不同碳源对菌株FJAT-9860的生长影响不同,最佳碳源为甘露醇.     

不同培养基质和激素浓度对莲雾嫩枝扦插生根的影响

[目的]采用正交试验进行莲雾嫩枝扦插,研究不同培养基质和激素浓度对莲雾嫩枝插穗成活率和生根数的影响。[方法]以莲雾母株上当年生半木质化枝条作为插穗,使用浓度为250、500、1 000 mg/L生根粉(ABT)溶液处理扦插枝条,在黄沙、珍珠岩中培养60 d。统计每个处理的生根率,并测量根长、根数。[结果]500 mg/L生根粉溶液处理的扦插枝条在珍珠岩中的扦插成活率最高,达61.700%;珍珠岩中培养的扦插枝条,后期移栽时不易伤根,有利于莲雾后期移栽成活率的提高。[结论]500 mg/L生根粉溶液处理的扦插枝条在珍珠岩中培养为最佳组合。     

三亚地区莲雾果园生态系统碳 储量及其分布特征

分别应用平均木法、样方收获法和分层取样法采样并测定三亚地区莲雾果园生态系统乔木层、草本及凋 落物层和土壤层的生物量及碳含量,并探讨了莲雾果园生态系统各组分的碳储量及其分布特征。结果表明,三亚地 区莲雾果园生态系统总碳储量为76.87 t/hm2,其中乔木层、草本及凋落物层和土壤层碳储量分别为11.63、1.21、64.03 t/hm2,分别占总碳储量的15.13%、1.57%、83.30%;乔木层各器官碳储量大小为树枝>树根>树叶>树干>果实;土壤层 随深度的增加碳储量逐渐降低。总体而言,三亚地区莲雾果园生态系统固碳潜力较大且系统碳储量主要位于土壤 层,乔木层碳储量以树枝和树根较多,草本及凋落物层碳储量较低。     

莲雾扦插苗质量标准的性状指标研究

以种苗智能化快繁的莲雾扦插苗为材料,通过对苗株的根条数、根粗度、根长度、根重、株高、干粗、梢数、梢长、梢叶数等9个性状进行测定分析,探讨莲雾扦插苗质量标准评价性状的选择及其指标分级。结果表明：地上部的株高、干粗性状与其余各性状间多呈显著或极显著正相关,两性状可较好反映地上部生长状况;根系性状中根条数、根粗度、根长度三者间的相关性较差,综合三者性状方可较好地反映苗株根系发达程度。苗株株高、干粗、根条数、根粗度、根长度可作为莲雾扦插苗株质量标准的评价性状,文中对评价性状进行分级,并制定指标参数。     

莲雾插穗与其母体植株叶片光合特性比较研究

在种苗智能化快繁系统调控下,探讨生根过程中莲雾插穗叶片与其母体植株叶片光合特性的差异。结果表明,扦插前中期插穗叶片的净光合速率高于母体植株,插穗叶片PSII有效光化学量子产量（YIELD ）始终保持在离体时的较高水平,插穗生根后叶片光合电子传递速率（ETR）均高于母体植株,反映了在种苗智能化快繁系统调控下,莲雾插穗叶片的光合能力不低于其母体植株,仍保持刚离体时的较高水平,插穗依靠叶片光合作用为其生根提供物质和能量。     

不同干酵母对莲雾果酒酿造的影响

[目的]分析不同干酵母对莲雾果酒酿造的影响,筛选出最适活性干酵母,为莲雾果酒生产加工提供参考.[方法]以海南黑珍珠莲雾为试验材料,选用7种果酒活性干酵母发酵莲雾果汁,分别测定发酵过程中糖含量、酵母菌菌落总数、发酵能力和果酒总酸含量,并结合感官评价,分析不同酵母菌的发酵情况.[结果]在发酵温度25℃、初始糖度25.5 Brix、酵母菌接种量0.1%的条件下,拉曼得系列Lalvin 71B降酸干酵母在莲雾果酒发酵阶段始终保持较高的酵母菌菌落总数,发酵速率较快,果酒总酸含量较低,所制备的莲雾果酒感官评分最高(92分),品质最佳,酒体颜色浅黄,澄清透亮,具有莲雾果酒特有的清香味,酸甜可口,回味甘甜,口感柔和;而法国K1酿酒酵母的发酵效果最差,果酒感官评分最低.[结论]拉曼得系列Lalvin 71B降酸干酵母发酵的莲雾果酒色、香、味俱佳,可作为酵母菌用于莲雾果酒的工厂化生产.     

莲雾果实过氧化氢酶活性及其影响因素分析

[目的]探讨莲雾果实过氧化氢酶（CAT）活性及其影响因素,为莲雾采后保鲜提供理论依据.[方法]以莲雾果实为试材,利用分光光度法测定莲雾果实CAT活力,同时分析温度、pH、有机溶剂和金属离子等因素对莲雾果实CAT活性的影响.[结果]莲雾果实CAT的最大活力212.395 U/gFW·min,最适温度30℃,最适pH 7.2;甲醇和乙醇对其活性的影响均表现为低浓度具有激活作用,高浓度转为抑制作用;Cu2＋对其活性有一定程度的激活作用,Mn2＋和Na＋贝表现出抑制作用.[结论]莲雾果实CAT活性受温度、pH、有机溶剂和金属离子等因素的影响较明显,通过低温贮藏、合理使用有机溶剂可延长莲雾果实的贮藏寿命.