钩端螺旋体七日热血清型（56610）特异性单克隆抗体的研制

钩端螺旋体七日热血清型（５６６１０）培养物，经甲醛灭活后免疫ＢＡＬ Ｂ／ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合获得６株阳性杂交瘤，分别定名为１Ａ９、１Ｂ８、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４、３Ｅ８，其中１Ａ９、１Ｆ９、２Ｄ１０、２Ｅ４为特异性抗５６６１０杂交瘤。抑制试验结果表明，多抗血清能够有效地抑制这些特异性单抗，这些特异性单抗被鉴定为ＩｇＧ１亚类。     

浅谈犬钩端螺旋体病的诊治

犬钩端螺旋体病是由致病性的钩端螺旋体引起的一种人畜共患病。犬主要表现为出血性黄疸、高热、出血性素质、流产、皮肤坏死和水肿等症状。本病是犬的重要传染病之一,雄犬发病率高于雌犬,幼犬发病率高于老年犬。笔者对临床发生的病例采取综合诊疗措施,共治疗该病犬27只,治愈24只,死亡3只,治愈率为88.89%。     

猪钩端螺旋体病的诊治

随着畜牧养殖业的快速发展,给养殖户带来了非常好的经济收入。同时也出现了很多的病害给养殖户造成非常大的经济损失。本文中主要介绍了猪钩端螺旋体病的诊治和防治措施。     

梅花鹿钩端螺旋体的诊断与治疗

吉林省辽源市某养鹿户3头鹿相继死亡,死前尿血,吐黄水。通过临床症状、病理剖检、病原学检查、动物接种试验和病原分离,确诊为钩端螺旋体病。最后,提出对应的治疗方法。     

钩端螺旋体病的流行与防控探析

近钩端螺旋体属单细胞微生物,介于细菌和原虫之间,种类很多,分为致病性与非致病性两大类。致病性螺旋体可使人和动物发生自然疫源性钩端螺旋体病。此病几乎遍布于全世界,在中国也广泛存在。受菌型不同以及对动物的感染力不一样,导致患病动物的临床表现多种多样,急症多以体温升高、黄疽等症出现;慢性多是贫血、消瘦或者皮肤坏死。本病一年四季均可发生,东北以7~10月为流行高峰期,饥饿、疾病、应激等因素也可诱发本病。     

犬钩端螺旋体病的诊治研究进展

钩端螺旋体病是一种人犬共患传染病。犬的钩端螺旋体病是由犬钩端螺旋体或出血性黄疸钩端螺旋体引起的,所有年龄的犬均易感,公犬和幼犬的发病率和病死率均较高。临床上以发热、黄疸、血红蛋白尿、出血性素质为主要特征。此病可通过临床诊断和实验室血常规检查、病原学检查、血清学检查等进行确诊。平时应加强饲养管理,注意环境卫生,切断传染源,加强免疫预防措施。一旦发现本病应进行及时治疗,但发病早期症状并不明显,传统的诊断方法也难以准确快速的诊断本病。近年来,已有新型诊断和防治方法的报道。本文就钩端螺旋体病进行了总体描述,并综述了各种现有的诊断和防治方法,为钩端螺旋体病的早期诊治和深入研究提供可靠依据。     

浅述绒山羊钩端螺旋体病的防控措施

绒山羊钩端螺旋体病又称黄疸血红蛋白尿,是绵羊和山羊共患的一种传染病.其特征为明显的黄疸、血尿、皮肤和黏膜出血与坏死.全年均可发病,以夏、秋放牧期间更为多见.     

家畜钩端螺旋体病的流行诊断与防制

钩端螺旋体有多种血清型,能感染各种家畜和人,尤其是在低洼温暖地区的猪、牛、犬经常受到钩端螺旋体侵袭,在我国大多数地区普遍存在,南方感染率很高,病症多不明显易被忽视,只有感染了致病性强的钩端螺旋体才呈现典型的临床特征。治疗及时病畜容易康复,但可从尿中长时间排菌,污染环境。     

浅述绒山羊钩端螺旋体病的防控措施

绒山羊钩端螺旋体病又称黄疸血红蛋白尿，是绵羊和山羊共患的一种传染病。其特征为明显的黄疸、血尿、皮肤和黏膜出血与坏死。全年均可发病，以夏、秋放牧期间更为多见。     

北京地区家畜钩端螺旋体病优势菌型的研究——Ⅰ.部分场猪群钩端螺旋体病优势菌型的研究

共采集了145份猪血清,36份猪肾和31份猪尿。在145份猪血清中,用13群15型单价平板凝集有色抗原分别进行检查,波摩纳型抗原检出阳性反应27例,占18.62%,豕型抗原检出阳性反应6例,占4.13%;在67份猪肾和猪尿中,分离到波摩纳型钩端螺旋体5株,占7.46%,豕型1株,占1.49%。试验结果表明,血清学和病原学试验具有同型特异性。     

抗秋季型钩体杂交瘤细胞株的建立

用杂交瘤技术所生产的单克隆抗体,为制备特异性抗体及钧端螺旋体(钩体)的分型研究提供新的试剂.我们应用国内标准株秋季型钧体建立了3个杂交瘤细胞株,定名为LA_(11),LA_(15),LA_(13).它们对秋季型钩体均有特异性反应.杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔,可诱生高效价单克隆抗体腹水.杂交瘤细胞培养上清液经鉴定分别属IgG_1,IgG_2,IgM. 应用多种钩体活抗原混合免疫接种BALB/C小鼠、取其脾细胞与FO骨髓瘤细胞融合,在一次融合中成功地建立了差异较大的不同亚类杂交瘤细胞株,这在动物方面国内尚未见报导.     

抗牛型结核分支杆菌单克隆抗体的制备和鉴定

运用杂交瘤细胞技术,以牛型结核分支杆菌免疫Balb/c小鼠,用其超声波裂解液筛选杂交瘤细胞,得到了2株能稳定分泌抗牛型结核杆菌抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5D4和4C3,并对它们的特性作了初步鉴定.经鉴定,2株单克隆抗体均为IgG1亚类.腹水经ELISA检测,效价可达1∶1×104~1∶1×105,同时分析了2株单抗的抗原位点,结果表明2株单抗针对不同的抗原位点.单抗的特异性试验结果显示,2株单抗与大肠杆菌,沙门氏菌,金黄色葡萄球菌等均没有反应,但都与人型结核分支杆菌有不同程度的交叉反应.并应用免疫胶体金技术制备牛结核杆菌胶体金快速诊断试纸条做应用性鉴定.该试纸条只与结核杆菌发生反应,而不与沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、李氏杆菌等发生交叉反应.该试纸条最低能检测出浓度为1×106个/mL的牛结核杆菌菌液,有较高的灵敏度.     

抗噻菌灵单克隆抗体的制备及异源IC-ELISA检测方法的建立

为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4。采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3。据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9μg.L-1,检测限(IC10)为2.2μg.L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1%;在自来水、苹果、梨的添加回收试验中,IC-ELISA法测定的回收率依次为95.9%～118.1%、90.0%～117.6%、74.9%～95.6%;HPLC法测定的回收率依次为92.7%～97.6%、98.9%～100.9%、91.6%～105.4%,IC-ELISA法与HPLC法测定结果基本一致。上述结果表明:抗噻菌灵单克隆抗体酶免疫检测具有很强的特异性和准确性。     

蚕豆萎蔫病毒单克隆抗体研制

用蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）提纯病毒粒子免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,取其脾细胞与ＳＰ２／０骨髓瘤细胞融合,用纯化的ＢＢＷＶ病毒对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经三次有限稀释法克隆,成功获得２株ＢＢ－ＷＶ特异性单克隆抗体的细胞株,分别命名为４Ｄ１１,３Ｇ１２．２株单抗腹水间接ＥＬＩＳＡ效价高达１∶６４００００,抗体类型均为ＩｇＧ１,经Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ分析表明,２株单抗均是针对ＢＢＷＶ４４．７ｋＤ的外壳蛋白大亚基的特异性抗体．单抗抗原结合位点分析表明４Ｄ１１和３Ｇ１２两单抗作用于同一抗原决定簇     

抗新城疫病毒中和性单克隆抗体研制和特性分析

应用杂交瘤技术,以纯化的NDV-lasota为免疫原结合间接ELISA筛选到了24株抗NDV单抗,其中3 株(McAb-14、McAb-18和McAb-21)具有中和活性,并与其血凝抑制效价具有很大的相关性。McAb-18和 McAb-21的免疫球蛋白亚类都属于IgG2a;McAb-14为IgG2b。特异性鉴定结果表明:3株抗NDV的单抗均不与马立克病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒等发生交叉反应。用这3株中和单抗的任2种混合液对鸡进行了被动免疫治疗和免疫预防试验,结果表明:McAb-14 McAb -18组合的免疫预防和治疗效果最好。     

新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

将复性的重组NDV HN蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤.通过ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗HN单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞4E11.ELISA和Western-blot结果表明,该MAb能与NDV特异性反应,而不与H9亚型AIV,IBDV,EDS76,IBV和CIAV交叉...     

白斑综合征病毒单克隆抗体的制备及BA-ELISA方法的建立

白斑综合征病毒(white spot syndrom virus,WSSV)是甲壳类动物的重要病原,作者采用提纯的WSSV免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA法筛选阳性孔,经有限稀释法克隆,共得到3株能特异分泌抗WSSV的单克隆抗体(Mab)的杂交瘤细胞(1E9、1E10、4F5)。将3株杂交瘤细胞注射小鼠,制备腹水单克隆抗体,ELISA效价为1∶104~105。1E9、4F5的抗体亚型均为IgG1,1E10的抗体亚型为IgG2b。特异性实验表明:3株单抗与虾类病原桃拉综合征病毒(TSV)、罗氏沼虾诺达病毒(MrNV)、哈维氏弧菌(V.harveyi)均无交叉反应。Western bolt分析表明:单抗1E9与病毒28kD外膜蛋白特异性结合。采用生物素标记纯化后的单抗1E9,并建立了生物素-亲和素酶联免疫吸附法(Biotin-Adivin ELISA,BA-ELISA)用于WSSV的检测,该方法对提纯病毒的检测灵敏度约为4 ng,对病虾血淋巴的检测灵敏度达1∶25000。     

抗安氏隐孢子虫单克隆抗体的制备与鉴定

将纯化的安氏隐孢子虫卵囊超声波破碎,反复冻融后免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经3～5次有限稀释克隆化,筛选出4株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株.通过ELISA,IFA和EITB测其反应性.结果表明,4株杂交瘤细胞培养上清效价为1:100～1:12 800,诱生腹水效价为1:6 400～1:102 400;4株单抗均特异性识别安氏隐孢子虫卵囊壁抗原;免疫印迹表明,4株单抗分别与38.0～97.2 kD的主要抗原蛋白条带起反应.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定

根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细胞中,NSP9蛋白表达水平接毒后不断升高,48 h达最高,为深入研究NSP9功能奠定基础。     

抗大肠杆菌O157单克隆抗体制备过程中杂交瘤细胞的观测

采用细胞活力测定、形态学观察和遗传学检测的方法,研究了在用常规方法制备大肠杆菌O157单克隆抗体过程中,融合前后的细胞在细胞活力、细胞形态以及染色体数量的差异.结果表明,与凯骨髓瘤细胞相比,杂交瘤细胞的细胞活力和细胞形态无明显变化;当脾细胞与凯骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞后,其染色体数目接近两亲本细胞染色体数目之和.