禽白血病病毒p27抗原ELISA检测试剂盒的比较与评估

为了更好地进行禽白血病监测与净化,研究使用由蛋清、细胞培养物、胎粪等多种样品组成的样品盘对7种禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）p27抗原ELISA检测试剂盒（国产试剂盒DA、DB、DC,进口试剂盒IA、IB、IC、IDEXX）进行比较。结果显示：从分析特性上看,试剂盒分析特异性均较好,未观察到与其他常见禽源病毒的交叉反应;与IDEXX相比,DA、IA的分析敏感性较高,DB、IC其次,DC、IB较低,对于ALV不同亚群,各种试剂盒分析敏感性差异可达2～3个稀释度;从诊断特性上看,与IDEXX相比,DB、DC和IC的诊断敏感性和诊断特异性均高于90%;DA、IA和IB与IDEXX的诊断敏感性和诊断特异性均高于80%;各试剂盒对于不同类型样品（DF-1细胞培养物、蛋清、胎粪）的诊断敏感性和诊断特异性存在差异;从重复性上看,DA和IA的批内变异系数均在15%以内。综上所述,与IDEXX相比,当前国产p27抗原ELISA检测试剂盒DA和DB、进口p27抗原ELISA检测试剂盒IA和IC的各项性能可满足禽白血病净化各阶段对不同类型样品的检测需求。     

龙岩市地方优良种禽原种场禽白血病p27抗原检测与分析

用酶联免疫吸附试验法对长汀河田鸡原种场、武平象洞鸡原种场、龙岩山麻鸭原种场共686份蛋清样本及801份泄殖腔棉拭子进行禽白血病p27抗原检测。结果为：龙岩山麻鸭的蛋清样本和泄殖腔棉拭子均未检出ALV核酸;鸡蛋清样本阳性率为12.8%（80/626）,明显高于泄殖腔棉拭子阳性率8.9%(66/741);鸡原种场180日龄蛋清样本和泄殖腔棉拭子阳性率均最高,平均阳性率分别为15.0%和11.3%。表明：龙岩市境内地方优良鸡原种场中有禽白血病感染现象。     

禽白血病净化中胎粪检测方法的研究

禽白血病是呈世界性分布的可垂直传播的病毒性肿瘤性疾病，严重制约着养禽业的发展。该病主要通过对原种核心鸡群实施持续性逐一检测并淘汰禽白血病阳性鸡只，从而实现疾病净化。胎粪检测是建立阴性核心鸡群的第一步，因此胎粪检测方法的建立是禽白血病净化方案的重要一环，是禽白血病净化工作的基础保障。在规模化养殖场原种核心鸡群的禽白血病净化中，选择准确的、合适的检测方法至关重要。本文通过对1日龄雏鸡胎粪样品进行不同方式的处理，比较其对禽白血病病毒检测结果准确性的影响，结果显示：胎粪样品经过冷冻后可提高检出率；冷冻的次数及冷冻的方法对检测结果无影响；多份胎粪混样检测会影响样品的检出率，有假阳或假阴性的产生。研究结果为规模化养殖场快速、有效和准确地检测禽白血病病毒提供了技术支撑。     

不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒-p27抗原结果的影响

为探讨不同检测材料对ELISA检测禽白血病病毒(ALV)-p27抗原结果的影响,试验首先对180日龄地方品种母鸡的泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原进行ELISA检测,选取部分阳性鸡和阴性鸡进行分组试验,采用ELISA对试验鸡血清、蛋清和病毒分离的细胞培养液进行ALV-p27抗原检测,采用RT-PCR方法检测血液ALV特异性基因。结果显示,阳性组中以血清、蛋清和细胞培养液作为ELISA ALV-p27抗原检测材料,其检测阳性率均低于泄殖腔棉拭子,血清检测的阳性个体包含全部蛋清和细胞培养液ELISA检测的阳性个体。ELISA检测数据的相关性分析显示,只有血清和细胞培养液检测数据间存在显著性相关,线性关系方程为Y(细胞上清)=1.8439X(血清)-0.1469,R²=0.937;阳性组中ALV-p27基因检测阳性率低于泄殖腔棉拭子,但高于血清、蛋清和细胞培养液,其包含所有血清ELISA检测的阳性样品;外源性ALV-J gp85基因阳性率仅为29.17%,且阳性样品均属于血清ELISA阳性样品。综上所述,成年鸡以泄殖腔棉拭子作为ELISA ALV-p27抗原检测材料存在假阳性结果,蛋清和细胞培养液作为检测材料存在漏检的可能,血清作为ELISA检测材能够更准确地反映成年鸡群ALV感染状态。     

不同ELISA检测方法在检测出壳雏鸡禽白血病病毒感染中的应用

通过雏鸡胎粪中群特异性衣壳蛋白27(p27)抗原检测以判定禽白血病病毒(ALV)垂直传播是实施禽白血病净化的关键步骤,为对比不同ALV-p27抗原ELISA试剂盒对我国四类广泛流行的亚群ALV垂直传播的检测效果,本试验设置ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K感染组,以无菌生理盐水作为对照组,在8胚龄时以卵黄囊接种的方式感染SPF鸡胚,建立鸡胚携带ALV-A、ALV-B、ALV-J和ALV-K的垂直感染模型。采集各组雏鸡胎粪样品和血浆样品,死亡鸡胚肝脏样品,死亡雏鸡胎粪样品、血浆样品和肝脏样品,其中血浆和肝脏样品需接种鸡胚成纤维细胞系(DF-1细胞)进行病毒分离,各样品以4家公司提供的ALV-p27抗原ELISA试剂盒进行检测,并以实时荧光定量PCR(RT-qPCR)进行平行检测,比较阳性检出率和灵敏度。结果显示,4家公司的ALV-p27抗原ELISA试剂盒对于同一样品的阴阳性判定结果基本一致,但灵敏度存在差异;胎粪样品直接ELISA检测不能将ALV阳性鸡只全部检出,相对于胎粪样品,血浆和肝脏病毒分离样品ELISA检测更具有灵敏度优势。本试验所建立的对比方法不仅有助于评估4家公...     

种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与鸡群禽白血病发病率的相关性研究

本研究旨在观察种鸡群所产种蛋中禽白血病病毒P27抗原检出率与种鸡群发病状况及其下一代鸡群禽白血病发病率的相关性,为鸡群净化和禽白血病预警提供参考依据.对国内海兰褐蛋鸡等品系不同祖代及父母代共7个种鸡场所产种蛋的P27抗原进行了检测,对部分种鸡场的ALV-A/B和ALV-J抗体进行了检测和病毒的分离鉴定,对各种鸡群孵化后下一代鸡群的禽白血病发病状况和客户投诉情况进行了追踪调查.7个种鸡场所产种蛋中P27抗原检出率为0%～12％,P27抗原检出率与种鸡群的发病状况及其子代鸡群的发病状况和客户投诉情况密切相关,即种蛋中P27抗原检出率越高,种鸡群发病情况越严重,下游客户鸡群发病率和投诉率越高.种鸡群的种蛋P27检出率与种鸡群及其孵化后鸡群的禽白血病感染状况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和禽白血病感染风险评估的重要指标.     

禽白血病病毒ELISA检测方法的建立与初步应用

本研究以在毕赤酵母系统中表达并纯化的p27重组蛋白为包被抗原,HRP标记的兔抗鸡IgY为酶标二抗,建立了一种快速有效的禽蛋白血病病毒ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,该方法具有良好的特异性和重复性;与市售商品试剂盒相比,符合率为96.92%,且更为敏感。应用建立的ELISA方法检测来自吉林省内鸡场314份疑似样品,阳性检出率为75.15%。本研究为禽白血病病毒的检测与诊断提供了一种简便、有效的检测方法。     

江西地方鸡禽白血病P27抗原消长规律的研究

随机选取1日龄崇仁麻鸡及东乡黑鸡(原种鸡)各92只,带翅号。于1、7、14、21、28、35、42、49、56、70、98、112、140、150、160、170、180、190、200、230、260、290、320日龄按号对应采集泄殖腔棉拭子进行ELISA检测ALV-P27抗原,查清崇仁麻鸡及东乡黑鸡禽白血病的排毒规律,找出最佳净化时机。结果显示:全群鸡在监测的320日龄内均有ALV感染发生,崇仁麻鸡与东乡黑鸡均在8周龄达到第1个排毒高峰,经过10周龄至12周龄ALV-P27阳性率降低之后,崇仁麻鸡与东乡黑鸡ALV-P27阳性率在20周龄再一次达到高峰,随后进入一个相对的平稳期。试验结果为种鸡场开展净化工作提供了科学依据。     

禽白血病病毒抗体间接ELISA 检测方法的建立及初步应用

以大肠杆菌表达、纯化的禽白血病病毒（ALV）重组P27蛋白为包被抗原,建立了检测ALV-P27抗体的间接ELISA方法,为禽白血病流行病学调查提供了一种简便的血清学检测方法.该方法与9种禽常见传染病病毒阳性血清及大肠杆菌阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于10％,具有良好的重复性;新建立的ELISA方法比IDEXX公司生产的ALVA、B亚群抗体检测试剂盒和J亚群抗体检测试剂盒相对于免疫荧光试验（IFA）有更高的符合率.     

禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较

本试验以80只300日龄的A品系蛋鸡为试验对象,分5个日龄段按翅号采集蛋清、泄殖腔棉拭子,无菌抗凝血和血清.用ALV p27抗原检测试剂盒检测蛋清和泄殖腔棉拭子.将无菌抗凝血分离血浆接种DF-1细胞,培养一周后用同样方法检测上清收集液,分析该群鸡只在不同日龄段泄殖腔棉拭子阳性、蛋清样本阳性和病毒分离阳性之间的相关性.用ALV-Ab抗体试剂盒检测各日龄段血清的抗体水平.此外,选取某一日龄段蛋清和泄殖腔拭子样本用4个不同厂家的ALV p27抗原检测试剂盒进行检测比较.结果表明,5个日龄段泄殖腔棉拭子平均阳性率为61％,蛋清样本平均阳性率为72.6％,病毒分离平均阳性率为48.8％.5个日龄段ALV的抗体阳性率一直为零;4个厂家的ELISA试剂盒对同一批样本的检测结果表明,IDEXX试剂盒的敏感度最高.本试验为外源性鸡白血病病毒检测及鸡白血病净化其方法的应用、试剂盒的选择、减少判定的误差、提高净化效果提供了一定的科学依据.     

国家三类新兽药 禽白血病病毒p27抗原夹心ELISA检测试剂盒

一、主要成分与含量二、作用与用途用于检测蛋清、泄殖腔棉拭子(胎粪)和细胞分离病毒上清中的禽白血病病毒p27抗原。三、用法与判定1.用法(1)洗涤液的配制使用前,将浓缩的洗涤液恢复至室温(20℃-25℃),并摇动使结晶溶解,然后用超纯水作10倍稀释(例如:每板用40ml浓缩液加上360ml水),即1x洗涤液。     

不同类型鸡泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原检测与病毒分离的相关性分析

为探讨泄殖腔棉拭子或种蛋中禽白血病病毒(ALV)-p27抗原检测与病毒分离检测之间的相关性,对不同类型鸡编号后分别对应采集泄殖腔棉拭子或蛋清后以ALV-p27抗原检测试剂盒检测,同时无菌采集抗凝血接种DF-1细胞进行ALV的分离鉴定。结果显示,人工感染A亚群ALV的SPF鸡群泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测与病毒分离有很高的吻合率,相对于病毒分离法,119次泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测中出现有1例假阳性和3例假阴性;从美国进口的200只祖代肉鸡3次采血DF1细胞分离病毒结果均为阴性,而泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率依次为4.00%(8/200),2.97%(5/168)和2.61%(4/153),假阳性率为3.30%。相对于病毒分离法,正在实施ALV净化的不同遗传背景地方品系鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测的假阳性率高达93.20%~100.00%,还有一定比例假阴性(1/9,1/4,1/3)。本研究大量对应比较的数据表明,相对于血浆病毒分离法,不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALVp27抗原检测法不仅有很高的假阳性率,还有一定比例的漏检率。在种鸡场的ALV净化过程中考虑到成本,不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。本试验为我国鸡群禽白血病净化检测和临床鉴别诊断提供参考依据。     

崇仁麻鸡禽白血病净化试验初报

采用ELISA检测ALV-Ag P27抗原的方法,对崇仁麻鸡禽白血病进行净化,结果表明该方法的净化效果显著。经过一个世代禽白血病的净化,净化种鸡群比非净化种鸡群在存活率、产蛋性能、种蛋受精率以及后代商品鸡生长性能等方面都有较大辐度的提高,可显著提高养殖效益,种鸡群进行禽白血病净化对提高养鸡经济效益意义重大。     

进口海兰褐祖代鸡禽白血病感染状态的持续观察及与国内发病鸡群种蛋p27检出率、病毒分离率的相关性

对自国外直接进口的蛋用型海兰褐祖代鸡群的禽白血病感染状态进行了持续观察,并与国内3个不同发病状况的海兰褐父母代鸡群的种蛋p27检出率、抗体阳性率、投诉情况进行了比较.将国外直接进口的蛋用型海兰褐祖代鸡群3个配套系240只1日龄鸡在SPF环境中饲养,在不同日龄采集泄殖腔棉拭子检测禽白血病病毒(A-vian leukosis virus,ALV)群特异性p27抗原、采集血清检测ALV-AB及J特异性抗体和采集血浆分离外源性ALV,并在鸡群开产后收集种蛋,检测蛋清p27抗原和父母代鸡群胎粪p27抗原.同时对来自天津、山东的不同投诉情况的3个父母代鸡场种蛋p27抗原或ALV-AB及J抗体进行了检测.结果显示,进口祖代鸡ALV-AB及J特异性抗体在68、150日龄检测均为阴性；分别在12、26、68、150日龄采血浆在DF1细胞分离病毒均为阴性；收集的250枚种蛋蛋清和孵化的父母代鸡群胎粪p27抗原检测均为阴性.而其他国内3个父母代鸡场的种蛋p27检出率最高达12％.结果表明,该海兰褐祖代鸡群无外源性禽白血病的感染,不同鸡群的种蛋p27检出率与病毒分离率 及发病情况具有较好的吻合性,可以作为开展ALV的流行病学调查和种鸡场净化的重要指标.     

蛋清P27抗原高阳性率对禽白血病诊断分析

河北一场区出现禽疑似肿瘤性疾病引起的高死亡率,表现为肝脾肿大出血,4个栋舍情况相似,每个栋舍采集种蛋进行白血病P27抗原检测,方法为ELISA,结果阳性率较高,最高达到40%,对1栋采集30份随机样品进行白血病病毒分离,结果有9份白血病P27,因DF-1细胞可以排除内源性白血病,结合临床案例情况,判断为J亚型白血病感染。     

禽白血病病毒p27基因在毕赤酵母中的表达

为获得禽白血病病毒p27蛋白,利用DNA重组技术,将扩增的p27基因亚克隆至酵母表达载体pPIC9K中,并将制备的酵母表达质粒电转至毕赤酵母细胞GS115中,通过SDS-PAGE和Western blot技术检测p27蛋白在不同条件下的表达情况,同时对诱导表达条件进行系统的优化.结果表明,成功构建出pPIC9K-p27...